ELISA自动化检验影响因素探讨

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进入21世纪以后， 我国血液elisa检验逐步由手工操作过渡为更方便、准确的自动化仪器检测。但在血液ELISA自动化检测过程中， 如果一些细微之处注意不到就可能造成假阳性、假阴性的产生， 影响实验结果的准确性。作者根据实际工作经验就ELISA试验检测结果出现偏差的常见原因进行总结分析， 以确保结果的准确， 提高血液检测质量。

1 人员与环境

1. 1 操作人员素质 自动化仪器检测操作人员应具备扎实、过硬的血液ELISA检验基础知识和操作技能， 对计算机、机械、电子与光电技术和仪器的工作原理、程序有一定的了解， 以便出现问题时及时应对。

1. 2 熟读全自动仪器的说明书 彻底了解仪器的工作原理和使用注意事项， 仪器和用户软件的使用方法、仪器的维护程序与方法、使用中可能出现的故障及可能的原因等。

1. 3 室温保证 实验室需配备空调、暖气、加湿器等设备， 保证室温在规定的范围内， 每天测量并记录室内温湿度， 以防过冷或过热造成仪器报警不运行。

2 血液标本的处理

2. 1 ELISA检验多用血清（血浆）标本， 标本的处理直接影响仪器的运行和检测结果， 应控制离心转速和离心时间， 使血清（血浆）标本离心分离彻底。

2. 2 血液标本离心后， 应检查标本的离心情况， 防止血凝块、血细胞、纤维蛋白悬浮在血清（血浆）中， 避免全自动加样器向酶标板微孔中加入上述物质， 造成洗板头的吸液针堵塞而出现假阳性结果。

2. 3 不能立即检测的血液标本放在2～8℃冰箱储存， 最好使用可监控报警的专用冰箱， 以防温度过高或过低对血液标本造成影响。

3 检验试剂的准备

3. 1 查看试剂 应检查试剂的包装是否破损， 污染、潮湿；试剂是否浑浊、变色；试剂是否在有效期。遇到这些情况均应重新更换新的试剂。

3. 2 试剂平衡 取出试剂盒中的酶标板和各组分， 在室温平衡30 min后， 再开启酶标板和各组分的包装， 开始使用。试剂是否平衡、平衡时间是否足够将直接影响试剂对弱阳性标本的检出。

3. 3 酶标板检查 如果酶标板框架不规整、微孔条不平整， 微孔内有塑料屑、泡沫屑等异物， 将影响洗板， 导致出现假阳性结果。

3. 4 试剂盒清洗 全自动仪器使用的试剂盒应每周用刷子刷洗干净， 蒸馏水冲洗后晾干备用。阴阳对照及质控品也要及时更换， 以防时间过久影响实验结果。

4 标本加样

4. 1 自动化仪器使用的一次性加样针要把针盒和一次性针放置到位， 要注意检查一次性针是否变形或不通。

4. 2 注意观察加样针进入酶标板微孔的深度和分配速度， 保证加样时液体不溅出、不挂珠， 确保加样准确。

4. 3 加样后， 及时检查酶标板的加样情况， 查看微孔中有无血细胞、血凝块、纤维蛋白；标本量是否足够；应变色的微孔是否都已变色。如有异常， 应手工处理。

5 酶标板洗板

5. 1 各厂家的洗液是根据各自试剂的条件配制的， 因此采用不配套的洗液常会得到不正常的反应结果， 包括本底升高， 所以不同厂家的洗液不能混用。

5. 2 洗液应按规定的倍数稀释使用。试剂盒提供的洗液是浓缩的， 过多稀释洗液， 会影响洗液的效果， 而使反应的本底升高。反之造成假阴性。

5. 3 稀释洗液的水应该是新鲜的蒸馏水， 如果存放时间过长或受到灰尘等污染， 水中含钙镁离子增多使实验本底增高， 灰尘等异物容易堵塞洗板针孔造成花板。

5. 4 洗板时， 洗液应注满每孔， 如果加入的洗液液量不够， 极易产生高值阴性和假阳性。不同试剂厂家的酶标板孔规格不一样， 洗板时一定要选择配套的板模式进行洗板， 以保证洗板效果。

5. 5 严格按照说明书规定的次数， 浸泡时间进行洗板。如果次数少于规定要求， 没有按设洗板浸泡时间， 会使孔内多余的抗原（抗体）或酶结合物不能彻底去除， 引起本底升高和假阳性。

优质的试剂， 良好的仪器和正确的操作是保证ELISA试验检测结果准确可靠的必要条件。实际操作中， 除了选择的优良试剂、保证仪器设备的正常运转外， 必须严格执行试剂操作说明， 认真做好ELISA实验的每一步， 掌握影响实验检测结果的各类因素以及解决办法， 做好仪器设备的日常维护保养工作。必须以严谨的工作作风对待每一份检测标本， 才能保证检测质量和血液产品的安全。