四种方法检测甲胎蛋白的比较

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摘 要 目的：比较时间分辨荧光免疫法（TRFIA）、微粒子化学发光法（CLA）、放射免疫法（RIA）和酶免疫法（EIA）四种方法检测甲胎蛋白（AFP）的线性、重复性、准确性和对比试验。方法：用不同浓度AFP分别进行了线性、精密度和回收试验。结果：TRFIA、CLA、RIA、和EIA四种方法的线性范围分别为1～1000ng/ml，1～1000ng/ml，10～400ng/ml和10～300ng；平均批内CV分别为3．75%、2．88%、5．08%和6．78%；平均批间CV分别为4．56%、3．45%、5．88%和7．72%；平均回收率分别为96．8%、97．1%、95．4%和92．6%。对比试验为TRFIA与CLA的相关系数r=0．991，TRFIA与RIA的相关系数r=0．963、TRFIA与EIA的相关系数r=0．843。结论：TRFIA法和CLA法是目前检测AFP理想的定量方法。

关键词 时间分辨荧光免疫 化学发光免疫 放射免疫 酶免疫 甲胎蛋白

材料和方法

试剂与仪器：TRFIA法用丰华Ⅰ型时间分辨荧光免疫分析系统及其配套试剂：CIA法用Beckman公司ACCESS化学发光分析以及配套试剂；RIA法用SN-682型放射免疫γ-计数仪及中国原子能科学研究所试剂；ELA法用伯乐450型酶标仪；香港大龙洗板机及杭州埃夫郎公司进口AFP单抗试剂盒。

方法：TRFIA法：用Eu标双抗体夹心一步法，按试剂说明书进行。CLA法：用ACCESS全自动发光免疫分析仪自动分析。RIA法：100ul血清及标准品加125I-AFP抗体混合，37℃、3小时。测每分钟脉冲数，然后各管加分离剂1ml，室温15分钟后，以4000转/秒离心15分钟，弃上清液，在用γ-计数仪测各管衰变率，计算AFP含量。ELA法：血清20μl加缓冲液150μl，37℃、30分钟，洗板5次拍干，加酶标抗体200μl。37℃、30分钟，洗板5次拍干，加显色剂显色，酶标仪测OD值，计算AFP含量。

结 果

线性试验：将标准液按不同浓度稀释后做线性分析，结果显示，TRFIA和CLA法的线性分别在1～1000ng/ml范围呈良好的线性关系。而RIA和ELA法的线性分别在10～400ng/ml和10～300ng/ml范围内呈良好的线性关系。提示TRFIA和CLA法线性最宽。

回收试验：取不同浓度的混合学清，分别加不同浓度的标准品（乘稀释倍数）。用四种方法测得的回收率分别为95．6～104．5%，91．2～106．5%，90．3～109．7%和85．6～112．8%，平均回收率分别为96．8%，97．1%，95．4%和92．6%。

对比试验：用四种方法同时测定20份血清样本。对比分析表明，TRFIA与CLA法的回归方程为y=16．25+15．21x，r=0．991；TRFIA与RIA法的回归方程为y=11．21+10．12x，r=0．963。TRFIA与ELA法的回归方程为y=1．21+1．12x，r=0．872。

重复性试验：取低、中、高值AFP（20，300，1000ng/ml）标准品分别用四种方法同时平行测定10次的批内变异和连续10天测定的批间变异，见表1。

讨 论

目前较常用的测定方法主要是ELA法和RIA法[1,2]，前者操作简便，但是检测甲胎蛋白灵敏度很低，线性较窄，高浓度AFP出现“钩状效应”，如不预先稀释，常出现假阴性结果，很容易造成漏诊。后者灵敏度较高，但存在标记物半衰期短和放射性污染而逐渐被CLA和TRFIA所取代。

TRFIA与CLA法的检测灵敏度可高达1×10，两者的检测指标相当，两者均可实现全自动监测。不仅如此，本研究结果表明，两者的线性，重复性，准确性均较RIA法和ELA法为优，是现代免疫学定量分析的理想方法。

参考文献

1 网江平,李炎萍,张明辉,等.甲胎蛋白定量与肝脏疾病的关系.中西医结合肝病杂志,2003,13(3):167-168.

2 郑玲,邓文余,姚履枫.310例HBV感染者甲胎蛋白临床意义的评估.中西医结合,肝病杂志,2003,1:118-119.