HLA―A抗原在喉癌鳞状细胞癌中的表达及临床意义

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摘要：目的 检测人类白细胞抗原-A抗原（hla-A）在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化SP法和流式细胞术，观察20例正常喉组织和58例喉鳞状细胞癌组织中HLA-A抗原的表达，并结合患者的临床病理资料对其结果进行分析。结果 ①HLA-A抗原在后鳞状细胞癌和正常喉组织中的阳性表达率分别为72.4%（42/58），100%（20/20），二者之间差异有统计学意义。（P

关键词：喉肿瘤癌；鳞状细胞；HLA-A抗原；免疫组化技术；流式细胞术

喉癌是仅次于肺癌的第二大呼吸道高发癌，目前在我国的发病率有逐渐走高的趋势。多种治疗方法的综合应用已使患者的生存率和生活质量大大提高，但喉癌的复发和转移等问题常使治疗效果不佳，术后颈部淋巴结转移仍是患者致死的主要原因[1]。人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA），其编码基因位于第6号染色体短臂（6p21，31），是一组具有高度多态性，紧密连锁的基因群，它分别表达HLA-Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ类抗原分子，HLA-A抗原是经典的Ⅰ类抗原之一，具有高度多态性，广泛分布于有核细胞的表面，其主要生物学功能是参与内源性抗原的提呈和交叉提呈外源性抗原，激发特异性免疫应答反应。

近年来肿瘤免疫学研究发现，许多肿瘤的HLA-A抗原表达降低或缺失，致杀伤性T细胞对肿瘤细胞不能识别，肿瘤细胞得以逃避宿主的免疫攻击，从而不利于肿瘤的临床治疗和T细胞免疫疗法的预后。为进一步研究证实HLA-A抗原的表达情况及其与临床病理学及预后等的相关性，本组采用免疫组织化学法染色技术，检测了HLA-A抗原在各级鳞状细胞癌中的表达水平，并对其与临床病理特征之间的关系进行了分析，旨在探讨此种抗原在喉癌的表达特点及其与临床病理特征的关系，为临床诊断及治疗提供一定的理论指导。

1资料与方法

1.1一般资料 58例标本取自沈阳市第一人民医院2011年3月～2013年3月，手术切除并经病理证实为喉鳞癌，术前均未行化疗及放射治疗，术后立即将肿瘤组织包埋于OCT组织冻存液中，迅速用液氮处理后，于-80℃冻存，备免疫组化检测，其中男48例，女10例，年龄38～76岁，中位年龄60岁；依照国际抗癌协会TNM分期标准分期，Ⅰ-Ⅱ期23例，Ⅲ-Ⅳ期35例；声门上型25例，声门型33例，组织病理学分级，高分化32例，中分化15例，低分化11例；其中15例有颈部淋巴结转移，术后经病理检测得到证实。同时取20例喉部正常组织做对照（对照组取自喉全切除术，均经病理证实为正常喉组织）。另取喉鳞状细胞组织及正常喉组织标本各8例，备流式细胞检查。

1.2结果判定

1.2.1免疫组化的结果判定标准 HLA-A抗原阳性主要表达在细胞膜，呈棕褐色或棕黄色，胞浆亦有淡染。按Mattern等提出的标准，从两方面进行半定量评分：①按染色细胞的百分比评分：无阳性细胞为0分，阳性细胞50%为3分。②按染色细胞强度评分：无显色为0分，浅棕黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。③将这两方面评分相加计总分（0～6分），>2分为阳性表达，≤2分为阴性表达。

1.2.2 HLA-A染色灰度的测定 利用IBASⅡ图像分析系统，检测免疫组化染色阳性的各组标本中的HLA-A抗原的相对含量，每组检测5张切片。被测样品先光学显微镜成像，随机选5个测量视野，由电视机摄像后，被测细胞呈像余彩色监视器上，并输入计算机处理，计算被测细胞的灰度值。灰度值范围为0～255，其中0代表灰度最深，255代表灰度最浅。

1.2.3流式细胞术结果观察 按照Morkve等提出的荧光指数（fluorescence index，FI）表示HLA-A抗原表达的相对含量。公式如下：FI=瘤细胞表达的平均荧光强度/正常对照样品平均荧光强度。

1.3统计学处理 运用统计软件SPSS11.5进行t检验，χ2检验，Fisher精确计算。

2结果

2.1免疫组化结果

2.1.1 HLA-A抗原在喉鳞状细胞癌和正常喉组织中的表达情况 在喉癌组和对照组中HLA-A抗原阳性表达率分别为72.4%（42/58），100%（20/20），经统计学分析，HLA-A 抗原在喉癌组和对照组中的表达，差异有统计学意义（P

2.1.2 HLA-A抗原的表达与临床病理参数的关系 对58例LSCC组织中HLA-A抗原的表达与临床病理参数进行研究，发现Ⅰ～Ⅱ期LSCC组织中HLA-A抗原阳性率86.9%（20/23）较Ⅲ～Ⅳ62.8%（22/35）高，两组比较有显著性差异（P