高效液相色谱法测定四川粉葛中葛根素的含量

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[摘要] 目的：采用HPLC法测定四川粉葛中葛根素的含量。方法：色谱柱为依利特C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（25∶75），流速为0.8 ml/min，检测波长为250 nm，柱温为25℃。结果：葛根素在0.088 0～0.704 0 μg范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系，回归方程为A=336.35X－1.771 6，r=1.000 0，其平均回收率为100.01％，RSD为0.14％（n=6）。结论：该方法简便易行，结果准确，可用于四川粉葛药材的质量控制。

[关键词] 四川粉葛；葛根素；高效液相色谱法；含量测定；质量控制

[中图分类号]R927.2 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2009）06（c）-050-02

Content determination of puerarin in Sichuan Radix thomsonii puerariae by HPLC

LIU Ning 1, SHENG Rong 2, TAN Jing2

(1.College of Bioengineering, Southwest Jiaotong University, Chengdu 610031, China; 2.The Hospital Affiliated to Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China)

[Abstract] Objective: To determine the content of puerarin in Sichuan Radix puerariae thomsonii by HPLC. Methods: The C18 column(4.6 mm×150 mm, 5 μm) was used with a mobile phase consisted of methanol-water(25∶75) at the flow rate of 0.8 ml/min, the detection wavelength was 250 nm and the column temperature was 25℃. Results: The content of puerarin showed good linearity in the rage of 0.088 0-0.704 0 μg, the regression equation was A=336.35X－1.771 6, r=1.000 0, and the average recovery was 100.01％ with a RSD of 0.14％(n=6). Conclusion: The method is simple, accurate and can be used to control the quality of Sichuan Radix puerariae thomsonii.

[Key words] Radix puerariae thomsonii; Puerarin; HPLC; Content determination; Quality control

粉葛为豆科植物甘葛藤（Pueraria thomsonii Benth.）的干燥根，自古与野葛同作中药葛根用，也是2005版《中国药典》一部新单列品种[1]。粉葛主含异黄酮成分葛根素、葛根素木糖苷、大豆黄酮、大豆黄酮苷及大量淀粉等，具有解肌退热、生津、透疹、生阳止泻之功效。葛根素是粉葛药材中的主要活性成分之一，具有扩张冠状动脉、降低血压、减少心肌耗氧量、抗心率失常、降血糖、降血脂、抗动脉硬化、改善微循环、抗肿瘤等多种药理作用[2-3]，为此，粉葛越来越受到人们的重视。以往文献研究大多以野葛为主，而四川省内常用的葛根基本为粉葛[4]。本文按照2005版《中国药典》一部粉葛项下供试品溶液的制备进行提取，通过HPLC法对四川不同来源粉葛进行葛根素含量测定，可较为全面地评价四川粉葛药材质量，为四川粉葛药材的开发和应用提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

惠普1100型高效液相色谱仪（惠普化学工作站，DAD检测器）；德国塞多利斯BP211D型电子天平。

1.2 试药

葛根素对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110752-200511，供含量测定用）；粉葛（成都A药房、广汉B医院、成都C大药房、绵阳D医院、成都E研究院、成都F医院；其中成都C大药房5批，批号为070126、070601、070421、070703、070902）经成都中医药大学中药鉴定教研室鉴定为豆科植物甘葛藤（Pueraria thomsonii Benth.)干燥根炮制品；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为依利特C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（25∶75），流速为0.8 ml/min，检测波长为250 nm，柱温为25℃。理论塔板数按葛根素峰计应不低于4 000。

2.2溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品4.40 mg，置25 ml容量瓶中，加30％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，葛根素对照品含量为0.176 0 mg/ml。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约0.8 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30％乙醇50 ml，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液经微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 系统适用性实验

在“2.1”项色谱条件下，葛根素与相邻峰可达到基线分离，分离度大于2.0，理论塔板数以葛根素计算为5 118， 葛根素对照品及粉葛药材色谱图见图1。

2.4 线性关系考察

精密称取葛根素对照品4.40 mg，置25 ml容量瓶中，加30％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，葛根素对照品含量为0.176 0 mg/ml。精密吸取葛根素对照品溶液（0.176 0 mg/ml）5 ml，定容至10 ml，稀释成浓度为0.088 mg/ml的标准溶液，分别进样1、2、4、6、8 μl，按上述色谱条件测定峰面积，并以峰面积积分值A为纵坐标，进样量X为横坐标，得回归方程A=336.35X－1.771 6，r=1.000 0。结果表明，葛根素含量在0.088 0～0.704 0 μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

精密吸取“2.4”项下对照溶液 10 μl，按上述色谱条件，重复进样6次，测定每次进样峰面积值，结果葛根素峰面积的RSD为0.35%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取成都C大药房样品5份，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，分别进样10 μl，测定峰面积值，计算含量及相对标准偏差，结果葛根素含量的RSD为1.43%（n=6），相对标准偏差小于2.0%，表明本方法重现性良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液，按上述色谱条件于0、2、4、6、8、10 h分别进样10 μl，测定样品中葛根素的峰面积值，结果葛根素峰面积的RSD为0.79%（n=6），表明供试品溶液在10 h内基本稳定。

2.8 回收率试验

取已知含量同一批粉葛药材约0.25 g（葛根素含量为6.169 6 mg/g），精密称定，共6份，分别添加葛根素对照品溶液（1.315 7 mg/ml）各1 ml，按前述方法制备供试品溶液，测定，计算回收率，结果见表1。

2.9 样品含量测定[5-6]

分别对11个样品按“2.2.2”项下的方法制备，按“2.1”项下色谱条件进行含量测定。①不同来源粉葛药材葛根素含量测定，见表2。②同一来源不同批号粉葛药材葛根素含量测定，见表3。均购于成都G中药饮片有限公司。

3 讨论

由表2可以看出，不同来源的粉葛中葛根素含量存在较大差异，且B、D医院的葛根素含量未达到药典的要求（≥0.3％）；由表3也可以看出，同一来源不同批号的粉葛中葛根素含量也存在较大的差异，其中批号为070126的粉葛葛根素含量未达到药典要求（≥0.3％），其原因可能与粉葛药材的炮制方法等因素有关，产生含量差异的因素还有待进一步研究。为确保临床用药疗效，对四川粉葛的研究是非常必要的[7-8]。

本文对四川不同来源的粉葛进行研究，实验结果表明，在临床应用中应严格控制其质量，以确保药效，本实验方法有效可行，可为粉葛的进一步研究提供依据。

[参考文献]

[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005:203.

[2]周红英,王建华,严凤云,等.RP-HPLC法测定不同栽培品种粉葛中葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量[J].药物分析杂志,2006,26(11):1668.

[3]李小燕,潘洪平,杨立芳,等.广西粉葛药材高效液相色谱指纹图谱的研究[J].中成药,2006,28(9):1249.

[4]龙汉利,鄢武先,闵安民,等.四川粉葛生物能源产业化发展调研报告[J].四川林业科技,2008,29(2):40-45.

[5]吴彩霞,郅妙利,贺光东,等.RP-HPLC法测定贵州湖南卷柏中穗花杉双黄酮的含量[J].中国药房,2008,19(15):1169-1170.

[6]舒胜辉.不同产地山银花有效成分绿原酸含量的比较研究[J].中医药导报,2006,12(5):74-75.

[7]杨立芳,李小燕,罗伟强,等.高效液相色谱法测定广西粉葛中葛根素的含量[J].时珍国医国药，2007,18(3):578-579.

[8]黄丽霞,贾晓斌,陈彦,等.HPLC法测定不同产地夏枯草中熊果酸的含量[J].中国药房,2008,19(12):910-911.

（收稿日期：2008-12-30）