布洛芬注射液小鼠单次腹腔注射给药毒性的试验研究
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[摘要] 目的 观察布洛芬注射液单次腹腔注射以后小鼠的急性中毒反应。方法 试验采用ICR小鼠，给药后观察出现的各种应激反应和临床中毒症状。连续观察14d后将动物安乐死，对肉眼所见异常的组织器官进行组织病理学检查。结果 给药后，小鼠出现活动减少、困倦、趴伏、呼吸减少的症状。550、467、397、337mg/kg组死亡动物数分别为10、9、2、1，动物死亡数随着剂量降低而减少；287mg/kg组及溶媒对照组未见动物死亡。结论 按Bliss法计算，布洛芬注射液小鼠单次腹腔注射给药的LD50和95%可信区间为414.39mg/kg，385.17～445.89。
[关键词] 布洛芬注射液；急性毒性；LD50
[中图分类号] R971.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2011）23-18-02
Studies on the Acute Toxicity of Caldolor on ICR Mice by Single Intraperitoneal Injection
YUE Peng CAI Ming LIU Jing SHEN Jiao
Jiangsu Institute of Materia Medica，Jiangsu Center for Safety Evaluation of Drugs，Nanjing 210009，China
[Abstract] Objective To evaluate the acute toxicity of Caldolor on ICR mice. Methods After treatment， the animals were observed daily for totally 14 days. Stress reactions and clinical symptoms were observed and recorded. At the end of the observation period， the mice were sacrificed， necropsied and the major organs were taken out for pathological examination. Results After treatment，the mice appeared abnormal clinical signs such as reduced activity，sleepiness，reduced respiration. The number of dead mice for 550，467，397，337 mg/kg group were 10，9，2 and 1， respectively; There were no mouse dead in 287 mg/kg group and in the vehicle control group. Conclusion Calculated by Bliss，50% lethal dose（LD50） of intraperitoneal Caldolor in mice is 414.39 mg/kg and the 95% confidence interval is 385.17-445.89.
[Key words] Caldolor；Acute Toxicity；LD50
布洛芬是一个较强的前列腺素合成抑制剂，以抗炎、解热和镇痛效果确切、不良反应小等优点被广泛应用，成为全球最畅销的非处方药物之一[1-3]。在我国国家药品监督管理局公布的国家非处方药目录第一批西药名单中，布洛芬赫然位列第一[4]。其作为注射液应用于临床是从2009开始，为疼痛和发热同时又不方便口服的患者带来了方便。国内关于布洛芬注射液的相关毒性作用报道较少，本试验在小鼠单次腹腔注射布洛芬注射液后，观察其出现的急性毒性反应，为布洛芬注射液长期毒性试验剂量的设计和其Ⅰ期临床起始剂量的选择提供参考[5-7]。
1 材料与方法
1.1 药物
布洛芬注射液由浙江尖峰药业有限公司提供，批号101101，本品为无色澄明液体，含布洛芬（C13H18O2）为标示量的102.0%，阴凉处保存。溶媒对照采用0.9%NaCl注射液，由南京小营药业集团有限公司提供，批号2010070106。
1.2 动物
SPF级ICR小鼠60只，雄鼠30只，雌鼠30只。动物分为6组，每组10只，雌雄各半。实验动物年龄为4～5周龄，体重为18～22g。实验动物购于上海西普尔－必凯实验动物有限公司，动物质量合格证号0041319，生产单位许可证号SCXK（沪）2008-0016。
1.3 动物饲养
小鼠饲养于江苏省药物安全性评价中心SPF动物房，饲养密度为5只/笼，笼具每日清洁，托盘、食盆、饮水瓶每周更换消毒，噪音小于60分贝。饲养间温度21℃～24℃，相对湿度50％～65％，换气次数10～20次/h，照明 12h/d（06：00开灯～18：00关灯）。
1.4 动物饲料
小鼠饲料由江苏省协同医药生物工程有限公司提供，批号20101229，动物自由采食，饲料检测内容为粗蛋白、粗灰分、水分、钙、总磷，检测合格。
1.5 方法
布洛芬注射液小鼠单次腹腔注射给药预试验设定剂量为2000mg/kg、1000mg/kg、500mg/kg、250mg/kg和125mg/kg，给药容积为0.5mL/20g，2000mg/kg组、1000mg/kg组、500mg/kg组的死亡率均为100%（每组3只动物，给药后3只动物均死亡），250mg/kg组、125mg/kg组小鼠没有出现死亡情况。所以布洛芬注射液小鼠单次腹腔注射给药正式试验设定给药剂量为550mg/kg、467mg/kg、397mg/kg、337mg/kg、287mg/kg和0.9%氯化钠注射液对照组。剂量间距比为0.85。给药容积为0.5mL/20g。布洛芬注射液小鼠单次腹腔注射给药正式试验药物浓度及配制方法见表1。根据动物体重按随机化分组法分组。剂量设计及分组情况见表2。
根据所观察到的各种反应出现的时间、严重程度、持续时间以及大体解剖中肉眼可见的病变和组织病理学检查的结果，分析判断出现的各种反应可能涉及的组织、器官或系统，从而初步判断供试品可能的毒性靶器官，并确定供试品的安全剂量范围。
1.6 统计学处理
采用Bliss法于计算机上用POMS软件计算供试品小鼠单次腹腔注射LD50和95%可信区间[6]。
2 结果
2.1 各组动物死亡情况
550mg/kg组给药当天未见动物死亡，给药后1d观察时发现4雄、5雌动物死亡，仅剩的1只雄性小鼠精神萎靡，状态不佳；给药后3d观察，仅剩的1只雄性小鼠死亡。467mg/kg组给药当天未见动物死亡，给药后1d观察1雄、4雌动物死亡；给药后3d观察时发现3雄、1雌动物死亡；剩余的1只雄性小鼠在剩余观察期内未见异常。397mg/kg组给药当天未见动物死亡，给药后1d观察1雄死亡；给药后3d观察时发现1雌死亡，其余动物在剩余观察期内未见异常。337mg/kg组给药后3d观察时发现1雌鼠死亡，其余动物在观察期内未见异常。287mg/kg组给药后，在观察期内未见动物死亡。腹腔注射0.9％氯化钠注射液对照组，小鼠在14d观察期间均未发现明显异常现象。动物具体死亡时间及死亡总数见表3。
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2.2 动物症状观察及病理解剖结果
各布洛芬注射液给药组动物给药后立即出现活动减少、四肢乏力、俯卧、呼吸减缓的现象，但给药当天1～4h观察期内未见死亡；在随后的观察期内，发现小鼠死亡时对小鼠尸体解剖，发现动物尸体内器官已出现自溶现象，未做病理切片；存活的动物在给药后1d活动恢复正常。在试验结束时，对各组存活动物进行解剖，并对主要脏器（肾脏、脾脏、肝脏、肺、心脏、脑）进行肉眼观察及病理切片分析；各布洛芬注射液给药组存活动物的主要脏器病理切片与对照组相比，未见异常改变。
2.3 试验数据统计结果
布洛芬注射液小鼠单次腹腔注射给药试验结果见表4。经过Bliss法计算，布洛芬注射液小鼠单次腹腔注射给药的LD50和95％可信区间为414.39mg/kg、385.17～445.89。
3 讨论
以往的研究发现，布洛芬的严重过敏反应与急性中毒可导致肾坏死、急性肾功能衰竭、膀胱炎和排尿困难、休克、大出血、知觉丧失等症状[8]。布洛芬产生的不良反应通常在减量或停药后可减轻或迅速消失[9]，治疗的主要途径为尽早洗胃、导泻、补液、脱敏和对症处理，以促进药物排出。
在中国药典二部标准（2010年版）中关于布洛芬制剂仅有口服溶液、片剂、胶囊、缓释胶囊、滴剂和糖浆。布洛芬注射液是近两年在国外上市的新型制剂。因为剂型的原因，布洛芬注射液经静脉推注或滴注后生物利用度较其他剂型有显著提高。因此，若临床剂量设计不合理，出现不良反应后，治疗方法较其他布洛芬制剂更加困难。
本次试验中，小鼠单次腹腔给予布洛芬注射液后，各给药组动物给药后立即出现活动减少、四肢乏力、俯卧、呼吸减缓的现象，符合以往研究中发现的布洛芬急性中毒后的乏力、嗜睡的症状。存活的动物在给药后第2天观察时症状消失，也符合布洛芬经代谢后，其不良反应症状减轻或迅速消失的描述。
经过Bliss法计算，布洛芬注射液小鼠单次腹腔注射给药的LD50和95％可信区间为414.39 mg/kg [（385.17～445.89）mg/kg]。在设计布洛芬注射液长期毒性试验剂量的和其Ⅰ期临床起始剂量时，不仅要考虑到LD50，也应充分考虑到剂型改变后布洛芬的生物利用度和其药代动力学的变化。
[参考文献]
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[4] 张娇. 布洛芬的临床研究进展[J]. 中国药业，2010，19（5）：63-64.
[5] 国家食品药品监督管理局. 化学药物急性毒性试验技术指导原则[Z]. 2006-12-19.
[6] 袁伯俊，廖明阳，李波. 药物毒理学实验方法与技术[M]. 北京：化学工业出版社，2007：200-210.
[7] 国家食品药品监督管理局. 药物非临床研究质量管理规范[Z]. 2003-09-01.
[8] Pavliv L，Voss B，Rock A. Pharmacokinetics，safety，and tolerability of a rapid infusion of i.v. ibuprofen in healthy adults[J]. Am J Health Syst Pharm，2011，68（1）：47-51.
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（收稿日期：2011-06-13）
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