当归体外对山梨醇生成及蛋白质糖基化的抑制作用

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摘要：目的观察当归水提取液对红细胞内山梨醇生成及糖化蛋白 （BSA）生成的影响。方法当归水提取液与红细胞、葡萄糖混合，培养2 h，测定山梨醇的含量，计算当归提取液对红细胞山梨醇生成的抑制率。不同浓度的当归提取取液加入体外蛋白糖化终末产物生成系统，培养8周，测定孵育液的荧光值，计算当归对糖化蛋白生成的抑制率。结果当归水提取液使高浓度葡萄糖培养的红细胞内山梨醇生成减少，糖化蛋白生成较对照组少。结论当归水提取液能抑制红细胞内山梨醇的生成，抑制蛋白质的糖基化作用。

关键词：当归；山梨醇；蛋白质糖基化

中图分类号：R282.71文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)06-0015-02

Inhibitory Effect of Angelica Extract on Content of Sorbitol in Red Blood Cell and Protein Glycosylation in Vitro

GONG Jian-wei1, TIAN En-sheng 2

(1. Shandong Zibo Prevention and Treatment Center for Occupational Diseases, Zibo 255067, China;

2. Shandong Zibo Institute for Drug Control, Zibo 255067, China)

Abstract：Objective To investigate the effect of angelica extract on the content of sorbitol in red blood cell and the synthesis of glycated protein in vitro. Methods Glucose, red blood cell and the angelica extract were mixed. The mixture was cultivated for two hours. The inhibition rate was calculated according to the concentration of sorbitol. The angelica extract was added to the system of glycosylated protein. The system was cultivated for eight weeks. The inhibition rate was calculated according to fluorescence value of the system. Results The angelica extract decreased the production of sorbitol in red blood cell and also decreased the production of glycated protein in the incubated liquid. Conclusion The angelica extract can inhibit the production of sorbitol and protein glycosylation.

Key words：angelica; sorbitol; protein glycosylation

糖尿病（diabetes methitus, DM）是常见的以高血糖和代谢紊乱为主要特征的内分泌代谢疾病。据统计，目前全世界约有1.2亿糖尿病患者，且患病率仍在快速增加。长期高血糖状态危害体内许多组织和器官，导致多种糖尿病慢性并发症（diabetic chronic complications, DCC），如神经病变、视网膜病变、肾病等。目前提出的病因学包括改变的多元醇代谢、超氧自由基的产生、蛋白糖化及血管供血不足等。当归是一种常用中药，在《神农本草经》中列为中品，具有补血活血、祛风湿等功效，在《本草纲目》中列为草部芳香类56种药物之首，临床用途广泛，俗有“十方九归”之说，还被誉为“血家圣药”。现代药理研究表明，当归具有保护肾脏[1]、抑制血小板凝集[2]、调节肝药酶活性[3]及增强免疫力等作用。当归在体外对抗红细胞内山梨醇生成及抑制蛋白质糖基化作用尚未见文献报道。

1材料与方法

1.1材料

当归提取物（淄博市职业病防治院药剂科提供）；氨基胍（Sigma公司）；葡萄糖（沈阳化学试剂厂）；变色酸（上海三爱思试剂有限公司）；山梨醇（北京奥博星生物技术责任有限公司）；牛血清白蛋白（北京华美生物工程公司）；RF-510型荧光分光光度计（日本岛津）。

1.2方法

1.2.1当归对山梨醇生成的抑制作用自大鼠眶静脉丛取血，EDTA抗凝，2 500 r/min离心5 min，弃血浆，4 ℃生理盐水洗涤红细胞3次，每次洗涤后2 500 r/min离心5 min，弃上清，留下压积红细胞；用生理盐水稀释当归提取液成不同浓度；用生理盐水配制20%的葡萄糖溶液。吸取红细胞0.5 mL，加入0.5 mL 20%葡萄糖溶液和1 mL当归提取液，空白对照组加入1.5 mL生理盐水，阳性对照组加入0.5 mL 20%葡萄糖溶液和1 mL生理盐水，置于培养箱37 ℃ 5% CO2培养3 h。培养完毕后，取出温孵液，2 500 r/min离心5 min，弃上清，用4℃生理盐水洗涤红细胞3次，每次洗涤后2 500 r/min离心5 min，弃上清，留下压积红细胞。取压积红细胞200 μL，生理盐水稀释，缓慢打匀，得40%红细胞稀释液。

吸取40%红细胞稀释液0.4 mL，加入1.0 mL 6%高氯酸溶液，振摇1 min，4 000r/min离心5 min，吸取上清液1 mL，置入具塞玻璃管，加入50μL高碘酸溶液，混匀后避光保存10 min，再加入50μL亚砷酸钠溶液，混匀，静置10 min，最后加入2 mL 变色酸-浓硫酸溶液，混匀后沸水浴30 min。取出放冷至室温，用分光光度计在570 nm处比色，空白管调零。根据山梨醇标准品的吸光度与其浓度间的回归方程计算红细胞的山梨醇含量。按下式计算当归对红细胞中山梨醇生成的抑制率：抑制率 =

×100%（Cc为空白对照组红细胞中山梨醇的生成量，Cm为阳性对照组红细胞中山梨醇的生成量，Cs为各给药组红细胞中山梨醇的生成量。）

1.2.2当归提取液体外对蛋白质糖基化的抑制作用[4]用pH 7.4的磷酸盐缓冲液配制含100 g/L牛血清白蛋白和100 g/L葡萄糖的混合液，同时配制不同浓度的当归提取液。依次向已灭菌的西林瓶里灌装2.0 mL混合液和2.0 mL当归提取液作为样品组，阳性对照组加入2.0 mL浓度为2×10-3 g/mL的氨基胍磷酸缓冲液，空白对照组加入2.0 mL磷酸缓冲液，每瓶加入青霉素和链霉素各500 U用于抗菌。用胶塞将西林瓶塞好，置37 ℃培养箱培养8周，在激发波长370 nm，发射波长440 nm处测定F值（1 μg/mL奎宁的荧光值F调100）[5]。按下式计算药物在体外对蛋白质糖基化的抑制率 ：抑制率= F空为空白对照组的F值，F药为给药组和阳性对照组的F值。）

2结果

2.1当归对山梨醇生成的抑制作用

见表1。由表1可见，不同浓度当归提取液对体外温孵红细胞中山梨醇的生成都有不同程度的抑制作用，在一定浓度范围内呈良好的量效关系。IC50为5.02×10-5 g/mL，显示当归提取液对红细胞中山梨醇的生成有较强的抑制作用。

2.2对蛋白质糖化的影响

体外37℃孵育条件下，4个浓度的当归提取液对蛋白糖化产物的生成均有不同程度的抑制作用，在一定浓度范围内呈良好的量效关系。IC50为1.55×10-2 g/mL，当归提取液的浓度为0.01 g/mL时，抑制率达到58.6%。见表2。

3讨论

糖尿病患者体内山梨醇的生成量增加及蛋白质糖基化是引发糖尿病并发症的重要因素[6,7]，本实验结果表明，当归对红细胞内山梨醇生成的抑制作用较强，能够抑制蛋白质的糖基化，有可能成为治疗糖尿病并发症的药物。有关当归发挥作用的主要成分，尚待进一步研究。

参考文献

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