TRFIA测定HCV的假阳性和解决方法
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【摘要】目的了解时间分辨荧光免疫分析法（trfia）检测HCV的假阳性率，为临床检测HCV提供参考方法。方法TRFIA法检测了3854份血清标本，筛选HCV结果为弱阳性的28份标本，用酶联免疫吸附试验（EL1SA）复核检测，复查ELISA为阳性的发阳性报告；ELISA法检测结果阴性者，用PCR法再次复查，阴性者发阴性报告。结果TRFIA法检测HCV的假阳性率为0.441%（17/3854），而用PCR法再次复查后假阳性占总检测标本百分比降至0.415%（16/3854）。结论TRFIA法检测HCV假阳性偶有发生，绝大多数可以通过用ELISA法复检加以纠正。
【关键词】酶联免疫法；时间分辨免疫荧光分析法；HCV
丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的肝炎是危害人类健康的疾病之一，当前，临床上诊断丙肝病毒感染的方法主要有血清抗体的检测和分子生物学技术检测病毒核酸等。其中自动酶联免疫测定可用于检测大批量样本，用来初步检测血液中的丙肝病毒抗体，然而，在临床实践中，在免疫力低下患者或肾衰竭患者或冷球蛋白血症合并丙肝病毒感染者，可有产生假阴性结果。抗体弱阳性者需要用核酸扩增的方法定量检测hcv-RNA。
1材料与方法
1.1研究对象选取2012年4月5日-2012年6月5日，通化中心医院门诊患者与住院病人血清共3854份，收集OD值在1.0-2.0之问的弱阳性标本28份。
1.2主要仪器和试剂①HCV酶免疫诊断试剂盒为上海实业科华生物技术有限公司产品。②HCV时间分辨免疫荧光分析法测定试剂盒为苏州新波生物技术有限公司产品。ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪出自上海新波生物技术有限公司。
1.3方法酶联免疫法、时间分辨免疫荧光分析法对血清标本进行检测，严格按照试剂盒说明书操作测定；对TRFIA法检测结果HCV为弱阳性的标本，全部用ELISA法复核检测，其ELISA为阳性的发阳性报告；ELISA法检测结果阴性者，再用PCR法复查阴性者发阴性报告。
2结果
TRFIA法共检测了3854份血清标本，收集其OD值在1.0-2.0之问的28份弱阳性标本，以ELISA法进行复检，其中11份标本HCV阳性，将余下17份标本检测HCV—RNA，其中1份阳性。TRFIA法检测HCV的假阳性占总检测标本的百分比为0.441%（17/3854），而用PCR法再次复查后假阳性占总检测标本的百分比降至0.415%（16/3854）。
3讨论
丙型肝炎病毒作为非经口传播的非甲非乙型肝炎的主要病原于1989年得到确认。全世界大约有1.7亿人为慢性丙肝病毒感染患者，其特征是导致不同程度的炎症和肝脏的纤维化。部分慢性感染患者经过20-40年将发生进行性的肝脏损害以致肝硬化及终末期肝病的各种并发症。目前在发达国家，慢性丙肝感染是肝移植的首要适应证，在未来10-20年中慢性丙肝将继续成为重要的健康和经济负担，因此，进一步提高血清HCV检测的准确度、灵敏度及特异性有重要意义。
3.1酶联免疫法是传统的HCV检测方法，因其成本低廉、操作简单、易于大批量检测，己普遍应用，但它特异性和敏感度都较差，对低水平人群易造成漏检：由于孔间差异、批间差异、不同操作者之间差异、放置时间差异、环境温度不同等导致其检测的重复性也差；由于方法学本身的局限性，酶联免疫法只能进行HCV阴性和阳性的定性判断，不能进行HCV的定量检测；由于其试剂盒中酶标试剂不易保存，操作中需通过加样、加试剂、孵育、洗板等一系列过程，延时长，对于低水平存在的HCV酶联免疫法易产生假阳性或假阴性，易引起标本间交叉污染或阳性标本对人体的污染，给实验室检测工作带来不便，不能满足临床急诊快速出结果的要求。
3.2时间分辨免疫分析技术（TRFIA）是近年发展起来的精密的免疫标记检测技术，它以稀土离子为标记物，通过时间延迟，去除非特异性荧光干扰，在固定时间检测特异性荧光，解决了自然背景干扰问题，明显提高了检测灵敏度，提高了光谱的分辨率，使特异性明显增强。与酶联免疫法比较，TRFIA灵敏度高，特异性强，操作简便，不用放射性物质而用镧系作标记物，因此具有无放射性，标记物稳定，便于长期保存，试验重复性好，分析速度快，样品用量少及标准曲线量程宽等优点[1]，时间分辨也有时间分辨的缺点，就是由于其在国内起步较晚，试剂盒的性能及稳定性方面都还不够好，且对实验室条件和操作人员条件要求高，血液成分复杂，存在多种未知的干扰，可能造成假阳性，同时操作不当也是引起假阳性的主要原因，本实验严格按照试剂说明书操作，很大程度上减少了实验误差。试剂本身的质量问题也会引起TRFIA法检测HCV假阳性结果。本实验所用的试剂都是经卫生部批检合格的产品，并在有效期内使用。TRFIA法检测HCV假阳性时有发生，但从本实验的结果看，绝大多数都可以通过用ELISA法复检加以纠正。
抗体阳性而丙肝病毒RNA阴性在临床中也偶尔可见，这提示可能为感染清除；或者免疫检测假阳性，可见于低危患者；或者间断性低水平病毒血症极少见。
参考文献
[1]叶应妩，王毓三，申子瑜，主编.全国临床检验操作规程（第三版）[M].南京：东南大学出版社，2006：571.
[2]丙型肝炎病毒抗体酶联免疫吸附试验阳性判断值在献血员血液筛检中的意义[J].中华检验医学杂志，2004（10）.
[3]乙型肝炎病毒免疫检测弱反应性标本的产生原因及处理[J].中国中医药现代远程教育，2010（11）.