特应性皮炎患儿口腔及皮肤金葡菌的检测

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[摘要] 目的 探讨婴儿期特应性皮炎患儿口腔及皮肤金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）的定植情况，分析金葡菌与特应性皮炎发病的关系。方法 用细菌培养法对40例婴儿期特应性皮炎患儿唾液及皮损处进行金葡菌检测，同时与20例健康婴儿作对照。结果 特应性皮炎患儿急性期唾液及皮损中的金葡菌检出率分别为35%、65%，而健康对照组的金葡菌检出率均为5%，患儿与健康儿比较均有统计学差异（P0.05）。患儿唾液及皮损中的金葡菌菌落密度分别为2.33×104CFU•ml-1和1.26×105 CFU•cm-2 ,且金葡菌的定植密度与病情严重度呈正相关(P

[关键词] 特应性皮炎；金葡菌；唾液；皮损

[中图分类号] R758.23 [文献标识码] A [文章编号] 1671-7562(2008)02-0115-04

Detection of Staphylococcus aureus in oral cavity and

skin lesions of atopic dermatitis infants

CHEN Ping1,YANG Li2,WANG Fei3

(1.Clinical Medical College of Southeast University,Nanjing 210009,China;2.Department of Pediatrics,Zhongda Hospital,Nanjing 210009,China;3.Department of Dermatology,Zhongda Hospital,Nanjing 210009,China)

Abstract:Objective To investigate the colonization of Staphylococcus aureus in oral cavity and skin lesions of acute atopic dermatitis(AD) infants.Methods This study involved 40 cases of AD,in comparison with 20 healthy infants.Samples were obtained from their saliva and skin lesions,and thenStaphylococcus aureus were detected by bacteria culture.Results The positive detection rate of Staphylococcus aureus in AD infant saliva and skin lesions were 35% and 65% respectively,while 5% both in saliva and skin in control.There was a significant difference between the case and control group(P0.05).The colony density of Staphylococcus aureus in AD infant were 2.33×104CFU•ml-1in saliva and 1.26×105CFU•cm-2in skin lesions respectively.The colony density of Staphylococcus aureus had a positive carrelation with the severity of AD(P

Key words:atopic dermatitis;Staphylococcus aureus;saliva ;skin lesions

(Modern Medical Journal,2008,36:115-118)

特应性皮炎（atopic dermatitis,AD）又称异位性湿疹，是一种以皮肤严重瘙痒及反复发作为特征的慢性炎症性皮肤病，好发于儿童和青少年。根据不同年龄阶段的临床特点，通常分为婴儿期、儿童期和青年成人期[1]。到目前为止其发病机制尚不十分清楚。研究表明，AD的发病与细菌感染尤其是金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）感染密切相关。为进一步探讨金葡菌在AD发病中的作用，我们对40例婴儿期的AD患儿进行了口腔和皮肤金葡菌的检测，现将结果报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

特应性皮炎患儿40例，为2007年1―6月在我院皮肤科门诊就诊的患儿。特应性皮炎的诊断符合Hanifin和Rajka于1980年提出的诊断标准。有口腔疾病、感染性疾病、免疫缺陷者除外，检查前2周系统服用抗生素、肾上腺皮质激素、抗组胺药或免疫调节剂者及局部外用抗生素或肾上腺皮质激素者除外。40例患儿中，男28例，女12例，男∶女为2.3∶1，年龄1~11个月，平均3.8个月，病程1周~7个月，平均2.2个月。疾病严重度按欧洲的特应性皮炎评分标准(scoring atopic dermatitis,SCORAD)进行记分（最高103分），患儿SCORAD评分为15.4~67.5分，平均(38.88±12.43)分，40例患儿均处于急性期。另设对照组20例，为我院儿保科健康体检儿，男14例，女6例，年龄1~11个月，平均3.2个月。

1.2 研究方法

1.2.1 唾液收集及细菌培养 病例组及对照组患儿均于清晨10时（哺乳后约2h），用生理盐水冲洗口腔，用1ml无菌针管去针头后在口腔底部抽取唾液0.1ml，用接种环取1环（2μl）接种于羊血琼脂平皿上，在35℃有氧环境下培养24h，记录培养结果并鉴定菌种，计算菌落密度（CFU•ml-1）。

1.2.2 皮肤取材及细菌培养 病例组取皮损较严重处，如渗出、结痂处，对照组取左侧肘关节伸侧皮肤，用消毒的浸有生理盐水的无菌棉签在靶皮损处2cm×2cm范围内横向、纵向、斜向反复擦拭10次，然后将棉签投入2.5ml生理盐水中，反复振荡80次，用接种环取1环（2μl）接种于羊血琼脂平皿上，在35℃有氧环境下培养24h，记录培养结果并鉴定菌种，计算菌落密度（CFU•cm-2）。

1.2.3 金葡菌的鉴定 根据菌落形态，挑取金黄色有透明溶血环的菌落行革兰染色，涂片镜检为革兰染色阳性球菌葡萄状排列，进一步行血浆凝固酶试验（试管法）和甘露醇发酵试验，前者在37℃水浴中3~4h观察结果，试管内血浆凝固呈胶冻状；后者在35℃孵育18~24h观察结果，培养基混浊，由紫色变为黄色，可鉴定

为金葡菌。菌落密度可按以下公式计算：皮损处菌落密度（CFU•cm-2 ）=(每平皿菌落数×1250)/4；唾液菌落密度（CFU•ml-1）=每平皿菌落数×500。

1.3 统计学处理

两组金葡菌检出率的比较采用χ2检验，金葡菌定植密度和AD严重程度的相关性采用直线相关分析。

2 结 果

2.1 唾液培养结果

病例组唾液中细菌检出率为90%，主要为草绿色链球菌和表皮葡萄球菌，金葡菌检出率为35%，菌落密度为2.33×104CFU•ml-1；对照组细菌检出率为70%，主要为草绿色链球菌，1例(5%)检出金葡菌。两组比较唾液中金葡菌检出率有统计学差异(P

2.2 皮肤培养结果

病例组皮损中细菌检出率为80%，金葡菌检出率为65%，菌落密度为1.26×105CFU•cm-2；对照组细菌检出率30%，主要为表皮葡萄球菌，1例(5%)检出金葡菌。两组比较皮肤中金葡菌检出率有统计学差异(P

2.3 金葡菌检出率与疾病严重度的关系

SCORAD评分越高，病情越重，按分值从低到高分为3组，50分为重度，虽然唾液和皮损处的金葡菌检出率随病情加重有上升趋势,但组间比较无统计学差异（P>0.05），见表2。

2.4 金葡菌的菌落密度与疾病严重度的关系

唾液中金葡菌的菌落密度与SCORAD评分呈正相关（r=0.976,P

3 讨 论

AD是一种常见的变态反应性疾病，常自婴儿期发病，由于其日后更容易发展为哮喘和过敏性鼻炎，且反复的瘙痒症状影响了儿童的生长发育和身心健康，因此对于AD的研究也越来越引起医学界的重视。该病病因复杂，主要与遗传、免疫、皮肤屏障功能失调有关。

自1974年Leyden等[2]首先报道90%的AD皮损中可检测到金葡菌以来，金葡菌在AD发病中的作用和地位备受关注。金葡菌是体表的暂住菌群之一，健康人皮肤中的金葡菌检出率甚低，仅为5%~30%，且主要存在于鼻前庭、腋窝、会阴、足趾擦烂区，鼻部的携带率在10%~45%[2]。研究表明AD患者的鼻前庭和指甲是金葡菌最常见的寄生处，鼻前庭的检出率为86.4%，手指甲处为72.7%，均高于其他皮肤病患者或健康人[3]。国外研究表明AD患者急性渗出性皮损中金葡菌的检出率为100%，且患者皮损局部金葡菌定植的密度与病情轻重呈正比[4]。国内田美华等[5]报道急性渗出性皮损中金葡菌的检出率为56.52%。本组患儿急性期皮损中金葡菌的检出率为65%,与国内学者的报道一致，但均低于国外的报道，这种差异考虑与国内抗生素的滥用有关，也不除外地区性差异。Leyden等[2]从90%的AD患者的皮损中分离出金葡菌，其密度高达1×106CFU•cm-2,所有渗出性AD皮损均分离出金葡菌，平均密度14×106CFU•cm-2。田美华等[5]对AD患者皮损进行金葡菌培养，其菌落密度平均为1.07×105CFU• cm-2。本组AD患儿皮损处金葡菌平均密度1.26×105CFU•cm-2,与国内报道一致，低于国外的报道，考虑与实验条件有关。

以往研究还表明，不仅在AD的皮损和非皮损处有金葡菌的定植，在患者的结膜囊和睑缘处也分离出金葡菌，可能是由于患者的搔抓引起金葡菌的播散[6]。Toshitani等[7]发现患者的泪液中也有较高的金葡菌检出率。AD患者合并泪囊炎时，眼周皮损往往较重。

AD患者的皮损容易继发金葡菌感染，可能的原因主要有[4]：(1)金葡菌容易黏附在角质形成细胞;(2)金葡菌与角质形成细胞间的一些原纤维和无定型物质可引起细菌生物膜暴露，导致金葡菌黏附;(3)皮肤表面的脂质（游离脂肪酸）有抗细菌的作用，而AD患者皮肤表面的脂质被破坏，金葡菌可进入皮肤内。金葡菌通过分泌一种超抗原特性的毒素，主要是肠毒素A~D(SEA~D)和中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)，引起T细胞和巨噬细胞的激活，产生外毒素特异性IgE抗体升高，诱导和加剧AD皮损的发生[8-9]。另有研究发现金葡菌还可以分泌不耐热毒素a-毒素（溶毒血素），刺激角质形成细胞的细胞毒损伤，导致表皮细胞坏死，使AD病情加剧[10]。此外，金葡菌不仅能导致AD病情的加重，还可以导致败血症等全身感染[11]。

正常人的口腔中主要是链球菌，而金葡菌并不多见[12]。鼻腔与口腔均直接与外界相通，在解剖结构上又是相通的腔隙，口腔黏膜兼有皮肤和消化道的某些特征，口腔黏膜的组织结构与皮肤基本相似。本研究结果显示在患儿的唾液中也有金葡菌的定植，患儿唾液中细菌检出率为90%，主要为草绿色链球菌和表皮葡萄球菌，金葡菌检出率为35%;健康儿细菌检出率为70%，也主要为草绿色链球菌，仅1例(5%)检出金葡菌。患儿与健康儿比较唾液中金葡菌检出率有统计学差异，且随病情的加重金葡菌的定植密度增大。同时在临床症状上，有流涎症时下颏处的皮损往往较周围区域重，以往认为唾液作为致敏原加重皮损，但本实验结果显示可能由于患者唾液中含有较多的金葡菌接触皮肤而引起，从而进一步表明了金葡菌在AD的发病中起到重要的作用，也为临床治疗中是否需要系统服用抗生素提供了依据。

此外，唾液中尽管有金葡菌的定植，但临床上AD患者没有口腔黏膜受累的表现，因此患者口腔中的金葡菌是否致病，口腔局部的免疫状态是否发生变化，仍有待深入研究。由于本研究样本量较小，研究对象主要为婴儿期的患者，疾病处于急性期，因此研究结果还有待在大样本中进一步证实。

[参考文献]

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[2]Leyden J J,Marples R R,Kligman A M,et al.Staphylococcus aureus in the lesions of atopic dermatitis[J].Br J Dermatol,1974,90(5):525-530.

[3]Nishijima S,Namura S,Higashida T,et al.Staphylococcus aureus in the anterior nares and subungual spaces of the hands in atopic dermatitis[J].J Int Med Res,1997,25(1):155-158.

[4]Breuer K,Kappa A,Werfel T.Bacterial infection and atopic dermatitis[J].Allergy,2001,56(5):1034-1041.

[5]田美华,毕志刚.特应性皮炎皮损金黄色葡萄球菌检出情况的研究[J].临床皮肤科杂志，2004，20（2）:110-112.

[6]Nakata K,Inoue Y,Harada J,et al.A High incidence of staphylococcus aureus colonization in the external eyes of patients with atopic dermatitis[J].Ophthalmology,2000,7(12):2167-2171.

[7]Toshitani A,Imayama S,Shimozono Y,et al.Reduced amount of secretory component of IgA secretion in tears of patients with atopic dermatitis[J].J Dermatol Sci,1999，19(2):134-138.

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[10]Ezepchuk Y U,Leung D Y M,Middleton M H,et al.Staphylococcal toxins and protein A differentially induce cytotoxicity and releuse of tumor necrosis factor-a from human keratinocytes[J].J Invest Dermatol,1996,107(4):603-609.

[11]Hoeger P H,Ganschow R,Finger G,et al.Stafhylococcal septicemia in children with atopic dermatitis[J].Dediatr Dermatol,2000,17(2):111-114.

[12]王翰章.中华口腔科学[M].北京：人民卫生出版社,2001:462.

[收稿日期] 2007-10-09