细胞周期蛋白E在皮肤鳞状细胞癌中的表达

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【摘要】目的:探讨细胞周期蛋白E(cyclin E)在皮肤鳞状细胞癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法观察32例皮肤鳞状细胞癌标本中cyclin E的表达情况。结果:在对照组皮肤细胞核内未见阳性表达;在观察组鳞癌组织中表达定位于细胞核,呈棕黄色,阳性染色细胞散在分布于表皮组织中。Cyclin E在鳞癌组织中阳性表达较正常人对照组高,两者差异有统计学意义(P

【关键词】皮肤鳞状细胞癌;细胞周期蛋白;cyclin E;表达

【中图分类号】R739.5 【文献标识码】A 【文章编号】1006-1959(2009)09-0007-01

2005年2月到2009年4月采用免疫组织化学法观察32例皮肤鳞状细胞癌中Cyclin E的表达,并进行相关性分析,探讨其在皮肤鳞状细胞癌是表达异常的意义及其与皮肤生物学行为的关系。

1 临床资料

1.1 一般资料:皮肤鳞状细胞癌标本为我院2005年2月到2009年4月经病理确诊存档的32例石蜡包埋组织(观察组),其中男26例,女6例,年龄40-90岁,平均年龄(54.5±12.5)岁。皮损部位:头面部10例,下唇部1例,躯干部5例,下肢5例,会10例,足部1例。病理分级按WHO标准,I级7例,Ⅱ级15例,Ⅲ级10例。对照组为外科手术中剔除的32例正常皮肤组织。

1.2 免疫组织化学染色

1.2.1 试剂及仪器。一抗:鼠抗人Cyclin E单克隆抗体,免疫组织化学SP试剂盒(生工生物工程公司,武汉)。

1.2.2 染色方法:石蜡切片常规脱蜡水化后,经高压锅热处理修复抗原,4% H2O2阻断内源性过氧化物酶,蒸馏水洗,10%正常羊血清封闭20min,滴加PBS稀释的Cyciin E工作液,室温2h,PBS洗3次,再分别加鼠抗人Cyclin E单克隆抗体及SABC复合物室温各孵育30min,两次孵育后均用PBS洗3次;DAB显色,苏木素复染,中性树胶封片。

1.3 结果观察及判定标准:Cyclin E蛋白阳性表达表现为细胞核出现棕褐色或棕黄色颗粒。在高倍镜下取5-8个视野观察,计数500个以上细胞并计算Cyclin E阳性细胞百分率,以Cyclin E阳性表达细胞数>5%为Cyclin E蛋白过表达。Cyclin E蛋白免疫组织化学结果均经重复染色一次印证,两位独立观察者分别观察计数并取均值。

1.4 统计方法:实验数据用SPSS15.0程序进行统计学处理。计量资料用均数±标准误(x±S>x),若是正态分布,用方差分析,组间、组内比较;若是非正态分布,用秩和检验。以P

2 结果

在对照组皮肤细胞核内未见阳性表达;在观察组鳞癌组织中表达定位于细胞核,呈棕黄色,阳性染色细胞散在分布于表皮组织中。Cyclin E在鳞癌组织中阳性表达较正常人对照组高,两者差异有统计学意义(P

3 讨论

当前细胞周期中存在几个重要关卡(checkpoint),并受一些细胞周期蛋白调控,当控制这些关卡的基因异常表达细胞周期调控蛋白时,可造成基因组不稳或静止的细胞越过这些关卡,引起细胞周期失控,导致细胞过度增殖。 G1向S转变是细胞周期主要调控点之一,目前发现G1期的调节因子与癌变关系最密切。细胞周期调控涉及细胞周期蛋白(Cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(CDKI),以CDK的活性表达与调控为主。已证实,作为一种细胞周期正向调节因子的细胞周期蛋白E(Cyclin E)是一种癌基因, Cyclin E的正调控在肿瘤的发生发展过程中起关键作用。Cyclin E表达在G1晚期达高峰,是G1/S期转换的限速因子,其过度表达可加速细胞进入S期,导致细胞无限制增殖,并进一步引起肿瘤的发生发展。CyclinE是1991年美国的研究小组在筛选人cDNA文库中发现的。由4个外显子3个内含子组成,转录2.2 kb的mRNA,编码395个氨基酸的蛋白质,分子质量50ku。Cyclin E的合成在G1晚期达高峰,继CyclinD后被活化,然后经与PEST序列有关的蛋白水解或泛素路径降解而迅速下降。因此,CyclinE主要在G1晚期发挥正性调控细胞周期的作用。

Mullerw等研究表明在一大部分早期NSCLC患者中Cyclin E的mRNA水平升高。Geng等研究了87例乳腺癌患者,其中21例有Cyclin E mRNA的高表达,约占24%,雌激素受体阳性及阴性的频率大致相当。一大部分Cyclin E过表达的人乳腺癌同时过表达周期蛋白E mRNA。Payton等发现肺癌和乳腺癌患者原发肿瘤Cyclin E的表达升高。肺神经内分泌癌Cyclin E2信号最强,其次是乳腺浸润性导管癌。雌激素受体缺乏的乳腺肿瘤更容易引起Cyclin E升高,提示Cyclin E可能导致乳腺肿瘤发病机理的解偶联。本组正常皮肤组织cyclin E无表达,皮肤鳞状细胞癌组织cyclin E阳性表达,且在复发肿瘤中及随病理分级升高而升高。表明在皮肤鳞状细胞癌发生的早期,cyclin E阳性表达逐渐增高,但仅为量变,故其阳性表达与病理分型、临床分期、淋巴结转移、颅神经侵犯无关;当其阳性表达增至最高点,由量变发生质变,细胞进入S期,瘤细胞进入无限增殖期。cyclin E阳性表达在鼻咽癌患者中的3年生存率差异有显著性,表明其在判断鼻咽癌预后中有参考价值。

总之,细胞周期调节失控是肿瘤发生发展的重要机制,其中Cyclin E的正调控在此过程中起关键作用。随着对Cyclin E作用机理的深入研究,将为进一步阐明皮肤鳞状细胞癌的发病机制带来曙光,并为皮肤鳞状细胞癌的治疗和预防提供新的靶点。

参考文献

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作者单位:518000 北京大学深圳医院皮肤性病科1

518036 广东省深圳市第三人民医院2