活血化瘀法对实验性前列腺增生小鼠前列腺组织中bFGF表达的影响
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摘要：目的：现察活血化瘀方顺闭饮对小鼠实验性前列腺增生组织形态学及碱性成纤维生长因子(bFGF)表达的影响。方法：皮下注射丙酸辛酮制备实验小鼠模型，光镜观察前列腺上皮细胞高度、计算前列腺湿重，免疫组织化学法检测小鼠前列腺组织碱性成纤维生长因子(bfgf)的表达。结果：HE染色：顺闭饮组较模型组的前列腺腺上皮增生呈明显抑制.腺腔分泌物和间质减少。颇闭饮组碱性成纤维生长因子(bFGF)阳性表达率较模型组呈明显减少(P
关键词：前列腺增生；活血化瘀法；小鼠；碱性成纤维生长因子(bFGF)
中图分类号：R 33
文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2008)01－0121－02
良性前列腺增生为老年男性常见难治疾病之一。活血化瘀法在治疗良性前列腺增生疾病中所起作用被大家越来越重视，通过以活血化瘀为主要药味的顺闭饮为研究对象，观察对丙酸酮引起的实验性小鼠前列腺增生组织形态学方面及碱性成纤维生长因子(bFGF)阳性指数的影响，来探究其抑制前列腺增生的效果及可能机制。
1 实验材料
1.1 实验动物ICR雄性小鼠，体重22－24g。由中科院上海实验性动物中心提供。
1.2 药物及制备①顺闭饮(自拟方)：由丹参、黄芪、桃仁、红花、莪术、川牛膝、益母草、大黄、肉桂、土茯苓、甘草组成，提取物为水性。低剂量及高剂量分别为成人剂量的lO倍和30倍，每毫升生药量2.88g。②前列泰由甘肃河西制药厂提供(批号：030701)，每毫升含药量O.144g。治疗用量分高低剂量，其中低剂量为1g／kg，高剂量为3g／kg。③造模药物：丙酸酮注射液，规格每支25mg，广州明兴制药公司(批号：050601)。④主要试剂：鼠抗人bFGF单克隆抗体，克隆号PCI0；S―P试剂盒。均由福州迈新生物技术公司提供。
2 实验方法
2.1 分组与造模将80只雄性小鼠饲养1周以适应环境后随机分为8组，空白组(A)和模型组(B)、实验组设预防组和治疗组，预防组为顺闭饮低剂量(c1)和高剂量组(c2)，治疗组分为前列泰低剂量(D1)、高剂量组(D2)，顺闭饮低剂量(E1)和高剂量组(磁)。除空白组外，其余各组小鼠均皮下注射丙酸睾酮制备模型15天，给药剂量为10rag／k。
2.2 给药15天后空白组和模型组按lmL／100g体重给予生理盐水灌胃，每天1次连续21天。预防组在造模(同模型组)同时药物灌胃给药21天。各治疗组在丙酸睾酮造模15天后以不同剂量药物灌胃给药21天。给药剂量根据小鼠体重给药，每天称重调整给药剂量。
2.3 取材与制样各组小鼠在第37天称重后处死，取出前列腺并称湿重，计算前列腺指数(湿重／体重×100)，将前列腺组织同定于10％甲醛溶液中，4℃冰箱保存，石蜡包埋，切片厚4um，作HE染色。
2.4 观察指标与检测 光镜下观察各组前列腺组织的细胞形态，具体观察前列腺腺腔分泌物，腺体密度，腺上皮形态，间质情况等。用免疫组化法检测碱性成纤维生长因子(bFGF)的表达，方法参照试剂说明步骤操作。
2.5 结果判定为确保实验结果的真实性和避免主观性，染色结果由专人阅片。PBS代替一抗做阴性对照，bFGF用已知阳性标本做阳性对照，在高倍显微镜(400倍)下选密度最高的5个视野，计数目镜侧微网内bFGF阳性细胞数，计算平均数，用x±s表示。
2.6 数据处理统计描述用均数±标准差(x±s)表示，组间差异的显著性检验采用单因素方差分析检验。所有数据输入计算机，由SPSS11.0统计分析软件分析处理。
3 结果
3.1 小鼠前列腺湿重指数见表1。前列腺湿重和指数的各组间比较结果显示，实验组与空白组、模型组之间的差异均有显著意义(均P
3.2 小鼠前列腺bFGF平均值见表2。bFGF阳性表达结果显示：实验组与空白组的比较显示低剂量预防组的顺闭饮的抑制程度较低，仅达到治疗前水平，而其他各组均较治疗前明显抑制。各实验组与模型组比较均有显著差异(P
4 讨论
前列腺增生系老年常见疾病之一，目前理论上还不能充分阐述其病因和病机，医学研究发现，细胞凋亡可能在前列腺增生发生发展中起着重要作用，如Kyprianou等对前列腺细胞进行增殖与凋亡研究，发现前列腺增生标本的增殖活性较正常前列腺明显升高，而细胞凋亡较正常明显减少，说明细胞增殖与凋亡均参与了前列腺增生的发生。bFGF是碱性成纤维细胞生长因子家族的一个重要成员，广泛存在于各种正常组织器官中，具有多种生物功能的一类多肽成长因子，能促进多种来自中胚层和神经外胚层的细胞生长、增殖和分化。在前列腺组织中分布广泛，前列腺上皮细胞，间质平滑肌与纤维细胞，血管内皮细胞以及间质细胞外基质皆有阳性反应。bFGF是由基质细胞分泌，在前列腺内的主要作用是广泛促进基质细胞的有丝分裂，刺激基质血管的形成。bFGF的作用途径是活化前列腺基质细胞的成纤维因子受体而调节基质细胞的增殖，因此其能反映基质细胞的增殖状态。应用免疫组化法检测bFGF的表达能较好反映细胞增殖状态。本实验通过检测小鼠前列腺组织bFGF的表达，表明细胞增殖在前列腺增生发生发展过程中起着重要作用。本实验表明，模型组小鼠前列腺组织中bFGF水平明显高于其他组。而各实验组bFGF水平明显下降，说明活血化瘀法能抑制前列腺组织中bFGF的释放，对调节bFGF的浓度有一定作用。由于bFGF能刺激上皮，或间质细胞增殖，故在模型组HE观察腺体排列明显密集，部分腺体扩张，部分早状突向腔内，腺上皮呈复层或假复层增生，细胞早柱状，腺腔分泌物多，间质增生，部分组织间质小血管扩张充血；而在各实验组比较腺上皮增生不明显，腺腔分泌物减少，间质减少。中医认为肾虚气弱是前列腺增生发病基础，蓄血瘀结，湿热蕴结是决定本病性质的关键，膀胱气化失司则是排尿困难的直接原因，体虚久病，瘀浊内停，外邪侵袭的是本病主要病因，膀胱气化失司是基本病机，蓄血瘀结型是前列腺增生常见的证型之一，因此，活血化瘀法为临床治疗前列腺增生应用最多的方法之一。顺闭饮是在古方抵挡丸基础上，结合临床实践之所得。方中丹参活血化瘀作用较强，为君药；桃仁、红花相须为用，增强丹参活血化瘀作用，为臣药；黄芪补气利水，当归补血活血，莪术破血消，川牛膝活血化瘀并能引血下行，益母草活血利水，大黄活血化瘀，肉桂补肾温阳，土茯苓利水，甘草调和诸药，以上药物共为佐药。方中诸药以活血化瘀为主，兼以补肾、利水，主治以血瘀证为主的前列腺增生。实验结果证实，顺闭饮治疗的实验性小鼠前列腺增生在组织形态学方面有明显的改变，不但能减少前列腺组织湿重和降低前列腺指数，并能减轻间质小血管的充血和减少腺腔分泌物。bFGF结果也提示顺闭饮可降低前列腺组织的bFGF阳性表达，通过减少细胞的分裂、增殖而抑制实验性小鼠前列腺腺组织增生。表明活血化瘀法的确能达到预防和治疗前列腺增生的目的。