高效液相色谱法测定舒筋片中大黄素、大黄酚的含量

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[摘要] 目的：建立舒筋片中大黄素、大黄酚的含量测定方法。方法：采用高效液相法，色谱柱为依利特C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.1%磷酸（85∶15），流速1.0 ml/min，检测波长为290 nm。结果：大黄素、大黄酚进样量在0.019 392～0.058 176 μg、0.055 104～0.165 312 μg范围内线性关系良好， 相关系数分别为0.999 9、0.999 9，大黄素平均加标回收率为97.54%，RSD=2.46%，大黄酚平均加标回收率为99.02%，RSD=2.78%。结论：此方法简便可靠，精密度高，重现性好，可用于舒筋片的质量控制。

[关键词] 舒筋片；大黄素；大黄酚；含量测定；高效液相色谱法

[中图分类号] R917[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2007）06（c）-183-02

舒筋片由当归、大黄、骨碎补、红花、土鳖虫等八味中药精制而成。本研究选择大黄作为含量测定的对象，大黄素、大黄酚是大黄的主要有效成分，我们建立了测定舒筋片中大黄素、大黄酚含量的高效液相色谱法，为该药的质控提供了可靠的方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

岛津LC－10A高效液相色谱仪，LC－10AVP检测器，岛津Class－VP工作站（日本岛津公司）；大黄素、大黄酚对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供）；甲醇为色谱纯，水为蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

1.2 实验方法

1.2.1色谱条件与系统适用性试验

采用依利特C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）；以甲醇-0.1%磷酸（85∶15）为流动相，流速1.0 ml/min，检测波长为290 nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于1 500，大黄素、大黄酚和其他组分均能达到较好的分离。

1.2.2 供试液的制备

1.2.2.1对照品溶液的制备：精密称取大黄素、大黄酚对照品，加甲醇制成大黄素含量3.23 μg/ml、大黄酚含量9.18 μg/ml的混合溶液，即得。

1.2.2.2供试品溶液的制备：取本品5片，除去包衣，研细，混匀，取约0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入2.5 mol/L硫酸10 ml、氯仿20 ml，加热回流1 h，放冷，分取氯仿层，水层再用等量氯仿振摇提取3次，合并氯仿液，用水50 ml洗涤，分取氯仿层，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容于25 ml容量瓶中，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

1.2.2.3阴性对照品溶液的制备：按处方比例称取除大黄以外的其余药味，按制备工艺制成缺大黄的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法同法制成阴性对照溶液。精密吸取10 μl注入液相色谱仪，观察在样品峰的保留时间处是否有杂质峰。结果表明，在样品保留时间处无明显杂质峰干扰。

2 结果

2.1线性关系的考察

精密吸取大黄素、大黄酚对照品溶液，分别进样6、9、12、15、18 μl测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，大黄素、大黄酚的进样量为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：大黄素Y＝4 956 054X-2 990.4，r＝0.999 9；大黄酚Y＝2 091 460X-1 146.4，r＝0.999 9。表明大黄素、大黄酚0.019 392～0.058 176 μg、0.055 104～0.165 312 μg之间呈良好的线性关系。

2.2精密度试验

取同一批样品，依法制得供试品溶液，重复进样5次，每次10 μl，测定大黄素、大黄酚峰面积。大黄素峰面积平均值为184 344，RSD=1.60%；大黄酚峰面积平均值为219 523，RSD=1.24%。结果表明，精密度良好。

2.3稳定性试验

取精密度项下供试品溶液，分别在0、2、4、6、8 h测定大黄素、大黄酚峰面积，峰面积平均值分别为184 383、203 514，RSD分别为0.91%、0.95%。结果显示，制备的供试品溶液在8 h稳定。

2.4重现性试验

取同一批号已知含量的舒筋片5份，精密称定，依法分别制得供试品溶液，分别测定大黄素、大黄酚含量。舒筋片中大黄素的平均含量为0.360 mg/片、RSD=1.29%，大黄酚的平均含量为0.962mg/片、RSD=0.99%。结果显示，所建立方法重现性良好。

2.5 干扰试验

取不含大黄的阴性样品，依法制得阴性样品溶液并测定，结果样品中色谱峰与对照品溶液有相同的保留时间，而阴性样品没有，说明舒筋片的其他成分对大黄素、大黄酚的测定无显著性干扰。

2.6加标回收率试验

取同一批号已知含量的供试品，去除包衣，研细，混匀，取0.15 g，精密称定，共取5份，置锥形瓶中，加2.5 mol/L的硫酸溶液10 ml、氯仿20 ml，加热回流1 h，冷却，分别加已配制好的大黄素对照品溶液（0.010 464 mg/ml）5 ml，大黄酚对照品溶液（0.295 mg/ml）0.5 ml，分取氯仿层、水层再用等量氯仿振摇提取3次，合并氯仿液，用水50 ml洗涤，分取氯仿层，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容于25 ml容量瓶中，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。按上述色谱条件测定，按以下公式计算回收率，结果见表1、表2。

2.7样品测定

按照拟定的含量测定方法对3批样品进行测定，测定结果见表3。

3 讨论

3.1 流动相的选择

参照《中国药典》大黄项下含量测定方法 [1]，考察大黄素、大黄酚色谱峰的分离情况和保留时间，当流动相比例为甲醇-0.1%磷酸（85∶15）时，达基线分离，保留时间合适。

3.2 检测波长的选择

分别对大黄素、大黄酚对照品溶液和舒筋片样品溶液色谱图中的大黄素、大黄酚峰在200～400 nm范围内进行光谱扫描，结果样品和对照品均在290 nm处有较大吸收，故本品检测波长定为290 nm。

[参考文献]

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版,2000.17.

（收稿日期：2007-04-01）

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