自制枸杞叶漱口液对牙菌斑清除效能的在体研究

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【摘要】目的研究枸杞叶漱口液对牙菌斑的抑制作用。方法①使用85%的乙醇，加热回流法反复提取3次，使用旋转蒸发仪进行浓缩，获得枸杞叶总浸膏；②取适量枸杞叶浸膏配制成0.5%的枸杞叶漱口液；③选取8名志愿者，依据随机双盲、自身对照的原则，每位受试者分别先后含漱生理盐水（阴性对照组）、高露洁漱口液（阳性对照组）、枸杞叶漱口液（实验组）。测试前彻底清洁口腔，每种漱口液测试周期为4d，期间停止一切口腔清洁措施。4d后，采用改良Qiugley-Hein菌斑指数记录法，记录PI值。中间间隔1周，再使用另一种漱口液，直至3种漱口液测试完。最后比较3组菌斑数。结果实验组和阳性对照组菌斑数均高于阴性对照组，差异有统计学意义（P0.05）。结论枸杞叶漱口液具有良好的清除牙菌斑的作用。

【关键词】枸杞叶；漱口液；牙菌斑；菌斑数

人体口腔中寄生有300-500种不同种类的细菌，但只有少数机会致病菌对牙周疾病发生发展起关键作用，它们是与慢性牙周炎形成有关的牙菌斑微生物。牙菌斑是存在于牙齿或其他硬的口腔结构或牙齿修复体表面软而未矿化的不能被水冲去的微生物膜，它是导致龋病和牙周病的主要病因[1-2]。漱口是一种简便易行的口腔自我保健方法，尤其对于无法采用机械方法清除菌斑的患者，用化学方法祛除菌斑显得更为重要。目前临床常用控制菌斑的漱口液大多含有抗生素，长期使用会产生一定的不良反应[3]。本实验采用随机双盲自身前后对照的方法，观察一种自制的新型天然植物提取物漱口液―枸杞叶漱口液对牙菌斑的抑制效果。

1资料与方法

1.1材料与仪器枸杞叶采自宁夏、旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、干燥箱（郑州长城科工贸有限公司）、螺旋式循环水冷凝管（配备橡皮水管）、无水乙醇分析纯（天津市江天化工技术有限公司）、高露洁贝齿清新茶健漱口水（高露洁棕榄有限公司）

1.2实验方法

1.2.1枸杞叶有效成分提取本实验采用加热回流法提取枸杞叶浸膏，溶剂为85%乙醇。所提取溶液使用旋转蒸发仪进行浓缩。具体流程如下：枸杞叶-阴干-加热回流法提取-真空抽滤-分离滤液-真空干燥-枸杞叶浸膏-水提或脂提。

1.2.2自制枸杞叶漱口液的配制用生理盐水，配制成0.5%枸杞叶提取物溶液，待充分溶解之后，经自然沉淀，滤取上清液，脱色备用。

2自制枸杞叶漱口液的在体实验研究

2.1实验对象和分组

2.1.1实验对象宁夏医科大学大学学生志愿者中按纳入标准随机抽取10人（19-23岁），中途两人因故，中途退出，样本统计以每牙面计算，共选取48个牙面。要求受试者了解本实验的内容和实验要求，并签署知情同意书[4]。纳入标准：①无全身性疾病；②实验前3个月内未服用抗生素；③口腔卫生良好，受试牙发育正常；④牙列完整；⑤受试牙牙面无充填物及龋损，根面无暴露及龋损；⑥受试者无吸烟酗酒习惯。

2.1.2分组本实验采用随机双盲自身对照的方法，观察枸杞叶漱口液在体内清除牙菌斑的效果。阴性对照组：生理盐水。实验组：枸杞提取物漱口液主要成分为枸杞提取物。阳性对照组：高露洁漱口水。以上3种漱口液均采用统一规格的、相同外包装的试剂瓶存放，由第三者将试剂编号（分别为甲、乙、丙）并记录相关数据，以保证双盲。

2.1.3漱口方法实验前对每个受试者作菌斑指数（Plaque index，PI）测定，此后停止刷牙等一切机械清洁措施，先用甲漱口液每天含漱4次，起床后以及早中晚餐后，每次20mL，含漱30s，漱后不用清水漱口。实验期间避免甜食及茶、咖啡等有色饮料，禁用其他药物。4d后记录受检牙面PI值。中间间隔一周。再以乙漱口液用同样方法含漱4d后再次记录受检牙面PI值。丙漱口液重复上述过程。每次实验后回收漱口液，以检查依从性。

2.1.4改良Qiugley-Hein记录菌斑指数（PI）值每组漱口液漱口结束后，用清水漱口2次，用2%碱性品红溶液对受检牙面进行染色，30s后用清水漱口，检查并记录每个受试者的11、14、31、34近中、远中、舌面及唇面和26、46近中、远中、舌面及颊面的PI值。分别计分，于用药前、用药后分别检查1次。记分标准如下：0分为龈区牙面无菌斑；1分为牙颈缘处有散在菌斑小点；2分为牙菌斑从颈缘向上伸达1mm；3分为牙菌斑宽度大于1mm，但未达牙冠1/3；4分为牙菌斑宽度。由同一研究者进行。

2.2问卷调查受试者使用不同漱口水后，对其口感、不良反应的评价。

2.3统计学处理菌斑指数以（χ±s）表示，组间比较采用q检验，P

4讨论

牙菌斑是龋病和牙周病的始动因素，如果能有效控制牙菌斑的形成，就能够很好的预防这两种病的发生。目前比较常见的控制菌斑的方法有：刷牙、使用牙线和使用漱口液等。特别是漱口液因使用简单且能达到一定的菌斑抑制效果而得到更多的人的认可。作为非处方漱口水，应具有高安全性，有较好抗菌斑能力，又不会破坏口腔内菌群平衡，适合长期使用。

目前临床上常用的漱口液有口泰（复方氯已定），西吡氯铵漱口液等。口泰漱口液有强效广谱的杀菌效果，但对黏膜刺激性大，且长期使用可能致口腔正常菌群失调。西吡氯铵漱口液为一种阳离子季胺化合物，可通过降低表面张力，增加细菌的通透性从而抑制和杀灭细菌，达到减少或抑制菌斑形成的效果，但病人常称其使用时有一定刺激性，并伴有不良反应。

枸杞叶漱口液的主要成分是枸杞叶提取物，很多学者对枸杞叶进行了研究，证实枸杞叶含有丰富的维生素C、黄酮甙、多种氨基酸及铁、锌、钙等对人体健康有益的营养成分。枸杞叶具有抗菌消炎、生津止渴、清热解毒、润肺强心、美容养颜、抗癌防癌等多种医疗保健功能。其含有20种氨基酸，含量也高于枸杞果实，游离氨基酸较多，且有人体必需的8种氨基酸[5]。枸杞叶的药理功效也广泛[6]，其总黄酮含量极高，主要为芦丁，具有抗炎，抗病毒，清除自由基的功效。枸杞叶多酚[7]具有很强的清除清除DPPH・和・OH自由基能力。其中仅黄烷醇类的儿茶素，表儿茶素等八种的含量就占茶干重的8%，能够减少造成蛀牙的口腔变形链球菌数量，清除口嗅气味。

本实验结果显示枸杞叶漱口液清除菌斑的能力与高露洁漱口液的抑制菌斑能力相当（P>0.05），达到临床使用的要求。同时，受试者大部分觉得枸杞叶漱口液的口感较好，无着色现象，对黏膜刺激性小，易于接受。总之，枸杞叶漱口液作为一种新型天然植物提取物漱口液，有望应用于预防治疗口腔细菌感染性疾患，有助于降低牙菌斑数，减低唾液内细菌的附着性，更重要的是，其含有胡萝卜素、抗坏血酸、亚油酸，富含Ca、铁Fe、锌Zn、硒Se、维生素B1、维生素B2、维生素C等多种人体必需的微量元素和多种游离氨基酸。易于渗透口腔各组织，对保护口腔黏膜，坚固牙齿，抗酸防蛀，协调口腔菌群，减少牙菌斑的形成都有积极的作用。

参考文献

[1]Fujinaka H，Takeshita T，Sato H，Yamamoto T，Nakamura J，Hase T，Yamashita Y.Relationship of periodontal clinical parameters with bacterial composition in human dental plaque[J].Arch Microbiol，2013 Mar 29.

[2]Storti E，Roncati M，Danesi MV，Hehsani S，Sberna MT.Effectiveness of chlorhexidine on dental plaque：a new technique[J].Minerva Stomatol，2012 Oct，61（10）：449-56.

[3]张颖.菌斑控制[J].Chinese Journal of Practical Stomatology，2010，3（1）：15.

[4]汪秀琴，熊宁宁，刘沈林，等.临床试验的伦理审查：知情同意书[J].中国临床药理学与治疗学，2004，9（1）：117-120.

[5]孟协中，胡向群，张桂兰等.枸杞子和枸杞叶化学成分的研究-第2报-枸杞子和枸杞叶中氨基酸[J].中药通报，1987，12（5）：42-44.

[6]马婷婷，张旭，饶建华，田晓燕.枸杞叶成分及药理作用研究进展[J].北京园艺，2011（13）：194-196.

[7]李南薇，钟兆敬.枸杞叶多酚的提取及抗氧化活性研究[J].食品工业，2013，43（2）：65-69.