家族性乳腺癌患者亲属BRCA基因突变研究
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【关键词】 乳腺癌;肿瘤易感基因;基因突变
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【摘要】 目的 研究河北省家族性乳腺癌患者一级亲属brca基因突变情况。方法 采用聚合酶链反应?单链构象多态性分析(polymerase chain reaction?single strand conformation polymorphism, pcr?sscp)和基因测序技术对国内外报告中常见的4个brca1/brca2突变热点区域(brca1：外显子2、11、20;brca2:外显子11)进行检测。结果 在12个家族性乳腺癌家系46例一级亲属中，发现1个brca2基因突变位点(5329inst)和1个核苷酸多态性位点(287 g>c)。结论 家族性乳腺癌家系中健康一级亲属突变基因和核苷酸多态性位点携带者存在较大的乳腺癌发病风险。
【关键词】 乳腺癌;肿瘤易感基因;基因突变
近年来研究表明，乳腺癌易感基因brca(breast cancer susceptibility gene，brca)在家族性乳腺癌发生的过程中起到重要作用，突变基因可以常染色体显性遗传方式传给子代[1]，目前研究最多的是brca1和brca2基因。本实验采用聚合酶链反应?单链构象多态性分析(polymerase chain reaction?single strand conformation polymorphism, pcr?sscp)和基因测序技术，对河北省12个独立家族性乳腺癌家系中患者的健康一级亲属进行brca1和brca2基因突变检测，以探讨家族性乳腺癌患者健康一级亲属brca基因的突变位点及携带情况，为乳腺癌的预防和早期干预提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 研究对象均为女性，平均年龄42.3岁。 入选标准：家族中2个及2个以上一级或二级亲属患乳腺癌，选取同意入组的12个独立家族性乳腺癌家系中乳腺癌患者健康一级亲属46例样本作为研究对象。
1.2 标本采集和dna提取 经研究对象知情同意后，采集每位研究个体外周静脉血5 ml，经枸橼酸钠抗凝，置4?c冰箱保存，并于采血后1周内用高盐沉淀法提取基因组dna。
1.3 pcr?sscp 分析 brca1基因有24个外显子，brca2基因有27个外显子，本实验对国内外报告中常见的4个brca1/brca2突变热点区域(brca1：外显子2、11、20;brca2外显子11)进行了检测。
1.4 数据分析 采用dna star?magalign分析软件进行序列比较，所有核酸序列位置编码参考美国国家生物技术信息中心网站(ncbi, www.ncbi.nlm. nih.gov)genbank上野生型cdna序列：brca1(u14680.1)和brca2 (u43746.1)[2];采用ncbi上blast2应用程序进行核苷酸翻译为蛋白质的比较，确定该核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，snp)是否引起氨基酸编码改变;对发现的snp在乳腺癌信息中心网站 (breast cancer information core， www. nhgri.nih.gov /intramural?research /lab?tran?sfer/bic)进行比较，以确定新发现的突变位点是否为新的突变点。
2 结果
46例研究样本中，于brca2基因发现了1个突变位点(5329inst)，且分布于第11外显子上，其核苷酸序列在5 329位插入t，为移码突变，导致终止密码子形成，产生截断蛋白。该基因携带者24岁，健康一级亲属，其母亲和两个姨妈分别于49、43和47岁确诊为乳腺癌，其中一个姨妈为隐性乳腺癌患者。另外，于brca1基因发现了一个核苷酸多肽位点(287g>c)，分布于第2外显子，携带者为另一家系中的健康一级亲属，其母亲、姨妈和表姐分别于49岁、56岁、35岁诊断为乳腺癌。上述两个家系中乳腺癌患者均为3例。
3 讨论
brca1和brca2是与家族性乳腺癌发病密切相关的两个基因[3，4]。研究认为，两基因突变可以导致家族性、早发性、双侧性乳腺癌的发生[5]。
目前国内外关于家族性乳腺癌患者brca1和brca2基因突变的研究较多，但其一级健康亲属brca1和brca2突变情况罕有报道。该研究应用pcr?sscp技术对12个独立河北汉族乳腺癌家系中乳腺癌患者46例健康一级亲属，进行了国内外报告中常见的4个brca1和brca2突变热点区域(brca1：外显子2、11、20;brca2：外显子11)进行检测，发现1例致病性突变：5 329inst分布于brca2基因第11外显子上，为移码突变，其核苷酸序列在5 329位插入t，导致终止密码子形成，产生截断蛋白，上述突变点在国内首次被发现。研究还发现brca1基因外显子2 存在1个snp位点(287g>c)，经过比对，上述snp位点亦为首次发现。
在该研究中，brca1基因核苷酸多态性位点和brca2基因突变位点携带者分别属于两个无任何血缘关系的家系，且两个家系中均相继发生3个乳腺癌。因此，作者认为：上述核苷酸多态性位点和突变基因携带者存在很大的乳腺癌发病风险，应该引起重视，密切随访或尽早进行手术或药物干预。
【参考文献】
1 ripperger t, gadzicki d, meindl a, et al. breast cancer susceptibility: current knowledge and implications for genetic counselling. eur j hum genet，2009，17:722?731.
2 马擘,宁连胜,史玉荣.乳腺癌家族史对乳腺癌临床特点及预后的影响.中华肿瘤防治杂志, 2006,13:173?176.
3 dunnen jt, antonarakis se. mutation nomenclature extensions and suggestions to describe complexmutations: a discussion. hum mutat, 2000, 15:7?12.
4 tada t, kasumi f. characteristics of familial breast cancer. nippon riusho,2000,58:1405?1408.
5 weitzel jn. genetic cancer risk assessment. cancer, 1999,86:2483?2492.
作者：李军改 刘伟 作者单位：054000 河北省邢台市,邢台医学高等专科学校