加味交泰汤对高血压失眠大鼠动脉内皮的影响

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（1.浙江中医药大学附属第二医院，浙江 杭州 310005；2.河南中医学院，河南 郑州 450008；

3.衢州职业技术学院医学系，浙江 衢州 310053）

摘 要：目的：观察加味交泰汤对高血压失眠大鼠主动脉内皮血管性假血友病因子（Von Willebrand factor，vWF）和内皮型一氧化氮合成酶（endothelial，eNOS）表达的影响,探讨中医药防治高血压合并失眠状态思路。方法：24只12周龄SHR分为4组：空白组（高血压），模型组（高血压失眠），加味交泰汤组，归脾汤组（对照组）。采用药物睡眠剥夺法建立模型（空白组除外），用药2周后，采用免疫组化法检测主动脉eNOS、VWF8的表达。结果：加味交泰汤组eNOS表达升高，vWF表达降低显著。结论：加味交泰汤具有降压安神和明显内皮保护作用。

关键词：高血压；失眠； 交通心肾

中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-7717（2011）03-0571-03

The Effect of Jiaweijiaotaitang to Artery Endothelium in the Hypertension Rats with Insomnia

DOU Li-ping1,YIN Zi-jie2,YAO Xiao-tian3,HUANG Shu-wei1,CHENG Zhi-qing1

（1.Zhejiang Medical University Second Affiliated Hospital, Hangzhou 310053, Zhejiang,China;

2.Henan University of TCM,Zhengzhou 450008,Henan,China;

3.Quzhou College of Techology, Quzhou 324000,Zhejiang，China）

Abstract:Objective:To study the effect that Jiaweijiaotaitang to the expression of aortic endothelial von Willebrand factor （Von Willebrand factor, vWF） and endothelial nitric oxide synthase （endothelial, eNOS） in the hypertension rats with insomnia, and to explore the treatment and prevention by Traditional Chinese Medicine in the status of hypertension with insomnia. Methods: 24 SHR were divided into 4 groups of 12 weeks old, Control group,Model group, Jiaweijiaotaitang group and Guipitang group. Insomnia model rat was established by Drug sleep deprivation method （except the blank group）. After 2 weeks of treatment, detect the aortic eNOS, VWF8 expression with the method of immunohistochemistry. Results: Jiaweijiaotaitang group increased expression of eNOS, vWF expression decreased significantly. Conclusion: Jiaweijiaotaitao have significant endothelial protective effect with the antihypertensive effect and Calm the nerves.

Key words:hypertension ;insomnia;imbalance between heart-yang and kidneyyin

流行病学调查显示高血压合并失眠较为普遍［1-2］。高血压合并失眠增加了心血管病不良预后的危险性［3-4］。安眠西药虽然可以改善睡眠质量，但因为存在不同程度的副作用，只适合于小剂量间断使用［5］。开发既能够改善睡眠质量又有助于改善高血压患者预后的纯中药制剂有一定的现实意义。

本实验旨在观察加味交泰汤对高血压失眠大鼠主动脉内皮血管性假血友病因子（Von Willebrand factor，vWF）和内皮型NOS（endothelial，eNOS）表达的影响,探讨其相关机制,为高血压合并失眠状态的防治提供新的思路和手段。

1 材料与方法

1.1 动物造模及分组

采用药物睡眠剥夺法建立高血压失眠大鼠模型。选用SHR（自发性高血压大鼠），12周龄雄性，称体重250～300g［浙江中医药大学实验动物中心提供，使用许可证：SYXK（浙）2003-0003］。饲养于浙江中医药大学实验动物中心，采用架式笼养。饲养条件：屏障系统大鼠实验饲养室。温度：18～25℃，湿度50%～70%，光照：150～200Lx，12h明暗交替，噪音

1.2 检测指标及方法

1.2.1 收缩压测定 大鼠于40℃预热15～20 min后，用大鼠尾静脉无创血压测定仪（型号：ALC-NIBP－TY2928，上海奥尔科特仪器有限公司）测量大鼠安静、清醒状态下尾动脉收缩压。每周固定时间测量，测量一般重复3次，每次间隔约1min，取3次测量的均值。

1.2.2 主动脉eNOS VWF8表达和测量 石蜡切片的免疫组化染色：免疫组化检测试剂盒powerVisionTM Two-Step Histostaining Reagent.均为为北京中山生物技术有限公司的产品。操作步骤（略）。结果：细胞核呈蓝色，阳性为黄色或棕黄色。主动脉vWF和eNOS的表达和测量：eNOS、VWF8主要在主动脉的内皮细胞的胞浆可见阳性。采用Image-Proplus5.0图像分析系统测量其平均光密度。如下：即对每张切片的阳性细胞的着色强度采用分析系统进行测量。即：每张切片的大动脉随机采集3个视野（×200倍），经过该系统自动分析获得该3个视野的3个平均光密度，经计算机平均后代表该标本的染色强度，然后进行整理及统计分析。

1.3 统计学处理

用SPSS 17.0进行统计学分析,所有数据以均数±标准差（±s）表示，各组样本均数的比较采用单因素方差分析，P

2 结 果

2.1 各组大鼠血压情况

造模前，实验各组大鼠血压，无统计学差异（P>0.05）。造模后1周，模型组血压较空白组增高，差异有统计学意义，各组与模型组比较均有统计学意义。造模后2周时，治疗组血压较空白组及模型组低，归脾汤组较加味交泰组血压高，均有统计学意义（P

表1 实验各组大鼠血压测量结果

注：*与空白组比较P

2.2 eNOS免疫组化检测结果

结果显示：eNOS、vWF主要在主动脉的内皮细胞的胞浆内可见阳性。模型组较空白组比较eNOS表达下降，vWF表达升高（P

表2 实验各组大鼠eNOS vWF免疫组化

检测结果（平均光密度，±s）

注：*与空白组比较P

3 讨 论

高血压与失眠密切相关，二者相互影响［1,6-7］。失眠对血压的影响涉及两个方面，一方面是扰乱人体生物钟，破坏血压昼夜节律，夜间血压无明显下降，呈较明显的非杓型血压曲线［1,8］；另一方面失眠还使得患者的植物神经调节功能紊乱，并使患者出现情绪紧张、烦躁、易激动、焦虑或抑郁等精神障碍，使小动脉处于持续性收缩状态。

程志清教授早年于高血压病人证型、体质特点调查研究中发现［9-12］中老年高血压并失眠者属阴虚火旺证型为主，长期临床实践中应用传承经验方“加味交泰汤”治疗此类患者已取得了较理想的临床疗效，因此程志清教授提出采用交通心肾法治疗高血压合并失眠症，滋阴降火、交通心肾是整体治疗的关键。

有研究证明了PCPA大鼠失眠模型与中医心肾不交症候属性相似［13］，故本实验采用PACA致SHR失眠模型为研究对象。通过主动脉内皮细胞eNOS、vWF表达的测定，观察分析高血压失眠及相关治疗对内皮功能的影响。

血管内皮细胞的功能发生紊乱时,引起动脉粥样硬化发生和发展。内皮功能不全是内皮受损的早期反映。近年来控制高血压的同时改善受损的血管内皮功能受到人们的重视，甚至有人提出把血管内皮作为一个新的治疗靶器官，把能否改善内皮功能作为评价抗高血压药物疗效优劣的标准之一［14］。eNOS是血管内皮细胞合成NO的关键酶，使 NO的合成和释放增加。NO作为细胞信使分子,参与血管张力及局部血流的调节，具有降压、抑制血管平滑肌细胞VSMC生长和增殖,抑制血小板黏附、聚集的作用,是体内重要的抗高血压及防止其并发症的重要保护因子。目前认为，vWF是比较有价值的内皮功能障碍标志物，具有一定的特异性［15］。有研究表明，高血压患者vWF水平显著升高，血压控制后，vWF可降至正常水平。

睡眠剥夺后SHR（模型组）血压较未剥夺睡眠SHR（空白组）增高，证实失眠可以加重高血压的病情。模型组与空白组比较，主动脉内皮细胞的eNOS表达下降，vWF表达升高，说明高血压并失眠状态较单纯高血压血管内皮功能障碍加重。治疗2周后，各治疗组血压降低显示出降压治疗的意义。治疗用药组有不同程度的eNOS表达升高，vWF表达降低，与模型组比较有统计学意义，说明治疗组发挥了血管内皮保护作用。加味交泰汤组内皮保护作用最明显，同时，该实验观察到氨氯地平联合加味交泰汤降压安神作用优于归脾汤组。证明方证相符，从而发挥了良好的整体疗效。

加味交泰汤药用龟板、生地入肾滋阴助黄连清心火，珍珠母、牡蛎平肝潜阳，百合清心安神，枣仁、茯神养心安神，少量肉桂使肾水不寒以阳中求阴。全方合用，使肾精充足、肝阳不亢，烦躁得除；肾水上承、心火得降，心神得安。共达滋阴降火，上下交泰的目的。可能从镇静、降压、改善微循环，调整中枢神经系统和心血管功能等多途径，提高了机体抗氧化应激能力，睡眠质量改善，精神紧张程度降低，缓解了心理压力，从而降低血压并发挥了良好的血管内皮保护作用。

归脾汤主治心脾两虚、气血亏虚之证，其目的在于心脾同治，重点在脾；气血双补，重在补气。对于高血压病而言，多有肝阳上亢之基质，气血旺则阳气上冲，肝阳难潜，心火愈亢，故可加重烦躁不寐。

两者对比说明，交通心肾法是治疗高血压并失眠的有效途径，选择合理的降压安眠治疗方案有利于加强心血管保护作用。中医药治疗初步显示了较理想的疗效，深入研究可丰富和发展对于高血压病的认识，开发有效降压安眠药物，可以从整体上改善患者生活质量并加强靶器官保护作用，可能有助于降低患者心血管不良预后风险。

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