钼中毒对卡拉库尔羊血清中SOD、CP、XOD和POD活性的影响
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摘要：将10只体重为（21±3）kg的健康卡拉库尔羊随机分成2组，每组5只，试验组按每天30 mg/kg体重灌服钼酸铵，对照组灌服相同体积的去离子水，每隔15 d检测血清中超氧化物歧化酶（SOD）、铜蓝蛋白（CP）、黄嘌呤氧化酶（XOD）和过氧化物酶（POD）的活性。结果显示，试验组的血清中SOD、CP、XOD、POD活性显著低于对照组（P﹤0.05）。因此，血清中SOD、XOD、CP、POD活性可作为绵羊钼中毒诊断的敏感指标。
关键词：卡拉库尔羊；钼中毒；铜酶；钼酶
中图分类号：S826.8+9 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）18-4458-03
钼（Molybdenum，Mo）是人和动物的必需微量元素，是动物体内多种酶的组成成分，对维持机体生命活动具有极其重要的作用，但人和动物对钼的需求量均小于1 mg/kg[1]，且反刍动物对钼特别敏感，过量食入则会导致钼中毒。据研究表明，高钼引起的动物中毒主要表现为明显的铜缺乏症状[2]，故测定血液中相关酶活的变化，对动物钼中毒早期诊断具有重要意义。李三强等[3]通过高钼饮水复制了耕牛钼中毒的病理模型，并测定了超氧化物歧化酶（SOD）和黄嘌呤氧化酶（XOD）等的活性，为耕牛钼中毒的诊断提供了依据。为此，本试验通过构建卡拉库尔羊钼中毒的动物模型，观察卡拉库尔羊钼中毒后血清中sod、铜蓝蛋白（cp）、xod和过氧化物酶（pod）活性变化规律，以期为动物钼中毒的诊断、治疗和环境污染的控制提供试验依据。
1 材料与方法
1.1 试验动物分组及饲养管理
试验动物为10只（21±3） kg的卡拉库尔羊，健康状况良好。试验羊集体驱虫，饲喂相同基础日粮，预饲期20 d。预饲期后根据体重相近的原则将试验动物随机分成2组，即试验组和对照组，每组5只，分栏饲养。试验期为60 d，其饲喂方式相同，均以青贮玉米为主，分早、晚两次添加，中午补饲青干草，除此之外每晚添加精料200 g/只。试验组每天以30 mg/kg剂量灌服钼酸铵（NH4）2MoO4，对照组灌服相同体积的去离子水。
1.2 主要试剂
超氧化物歧化酶（SOD）、铜蓝蛋白（CP）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、过氧化物酶（POD）试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所；钼酸铵（分析纯），购自淄博市三营化工有限公司。
1.3 主要仪器
721型可见光分光光度计（上海第三分析仪器厂），TDL-5-A型台式离心机（上海安亭科学仪器厂），HH-W420型三用恒温水箱（江苏省金坛市医疗仪器厂），VORTEX-5型旋窝振荡器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）。
1.4 样本采集与处理
分别在试验期的0、15、30、45、60 d早上9：30～10：30空腹采血，血液采集后先于37 ℃恒温水浴30 min，之后以3 000 r/min离心30 min，分离血清后置于4 ℃冰箱内，待测。
1.5 样品的测定方法
SOD采用羟胺法测定，CP、XOD和POD活性均采用比色法测定，操作步骤及方法严格按说明书进行。
1.6 统计方法
试验数据用SPSS 17.0软件进行t检验，结果以x±s表示。
2 结果与分析
2.1 临床症状
在试验开始15 d后，试验组个别羊出现采食量减少、精神沉郁等症状，此后随着试验天数的增加，试验组全部羊逐渐出现上述症状。与此同时，眼圈周围的毛色开始逐渐变白，发生严重的持续性腹泻、粪便稀薄并带有气泡，有泥炭味，个别羊发生共济失调；食欲不振，贫血，消瘦；被毛粗糙，色泽变浅，可视黏膜苍白。
由表1可知，试验组和对照组血清SOD活性在0 d差异不显著（P>0.05），但在15、30、45、60 d时差异显著（P
2.3 钼中毒对卡拉库尔羊血清中CP活性的影响
由表2可知，试验组和对照组血清CP活性在0、15、30 d时差异不显著（P>0.05），但在45、60 d时差异显著（P
2.4 钼中毒对卡拉库尔羊血清中XOD活性的影响
由表3可知，试验组和对照组血清中XOD活性在0、15 d时差异不显著（P>0.05），但在30、45、60 d时差异显著（P
2.5 钼中毒对卡拉库尔羊血清中POD活性的影响
由表4可知，试验组和对照组血清POD活性在0 d时差异不显著（P
3 小结与讨论
3.1 钼对卡拉库尔羊血清中SOD、CP活性的影响
钼与铜在吸收上存在着明显的拮抗作用，其原理可能是由于钼与铜相互竞争载体系统从而导致相互抑制[4]。随着钼在体内的含量不断升高，会干扰体内铜的吸收与代谢，导致动物铜缺乏，进而影响SOD和CP的活性[5，6]。本试验血清中SOD活性随钼在体内的蓄积而显著降低，这与张瑜等[7]和杨自军等[8]研究结果相一致。铜在体内大部分与蛋白结合，吸收进入血液的铜主要以CP的形式存在，而高钼导致继发性铜缺乏，使体内的铜含量迅速下降而减少血清中CP的合成，本试验血清中CP的活性降低，这与张明等[9]研究报道一致。
3.2 钼对卡拉库尔羊血清中XOD、POD活性的影响
到目前为止，已知钼的生理功能在于通过各种酶的活性来实现，其存在于所有生物体。XOD作为机体的重要酶之一，对体内嘌呤化合物的氧化代谢及最后形成尿酸起主要的催化作用，对机体代谢和有害物质的清除有重要作用[10]。本试验结果表明，血清中XOD活性随着钼在机体内的蓄积呈显著降低，过量的钼抑制了XOD的活性，从而影响细胞的正常代谢，这与程才才等[11]研究结果一致。本试验中POD活性随钼中毒的加重而显著下降。POD是机体重要的酶，也是机体内主要抗氧化酶系之一，它协同SOD一起分解体内自由基代谢产物H2O2，使其变成H2O[12]。适量的钼可促进POD将一定数量的自由基快速分解，而钼中毒时会造成机体自由基的大量堆积，这时POD无法有效清除过量的自由基，而其活性也受到自由基的抑制。
本试验结果表明卡拉库尔羊机体钼中毒时，高剂量的钼能够引起机体铜缺乏，导致自由基大量堆积、细胞能量代谢障碍等因素，所测SOD、CP、XOD和POD的活性均显著降低，故上述四个指标可作为钼中毒诊断的敏感指标。
参考文献：
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