气相色谱法测定培美曲塞二钠中有机溶剂残留量

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[摘要] 目的:建立培美曲塞二钠中有机溶剂残留量的气相色谱分析方法。方法:选用OV-101毛细管色谱柱为分离柱,FID检测器,外标法进行定量,并对分离条件进行了研究。结果:二氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺的线性范围分别为5.1～50.6 μg/ml(r=0.999 7)、8.1～81.2 μg/ml(r=0.999 6)、7.5～75.2 μg/ml(r=0.999 7);平均回收率分别为99.74%、101.94%、100.58%;RSD分别为1.40%、2.07%、2.56%(n=6);检测限分别为0.4、0.4、1.7 μg/ml。结论:该方法快速、灵敏、准确,可作为培美曲塞二钠中有机溶剂残留量的测定方法。

[关键词] 气相色谱法;培美曲塞二钠;有机溶剂残留量

[中图分类号] R927.2[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)02(a)-034-02

Determination of residual organic solvents in pemetrexed disodium by gas chromatography

ZHAO Yanrong, XU Xian

(Jiangsu Aosaikang Pharmaceutical Co., Ltd., Nanjing 211112, China)

[Abstract] Objective: To establish a method for the determination of three kinds of residual organic solvents in pemetrexed disodium by gas chromatography. Methods: A non-polar stationary phase GC column was chosen for separation with FID detector. The external standard method was used for quantitative analysis. Analytical conditions were studied. Results: The standard curves were linear in the range of 5.1-50.6 μg/ml (r=0.999 7) for dichloromethane, 8.1-81.2 μg/ml (r=0.999 6) for tetrahydrofuran and 7.5-75.2 μg/ml (r=0.999 7) for dimethyl formamide. The average recoveries for the three residual organic solvents were 99.74%,101.94% and 100.58% with RSD of 1.40%, 2.07% and 2.56% (n=6) . The detection limits of dichloromethane, tetrahydrofuran and dimethyl formamide were 0.4, 0.4 and 1.7 μg/ml, respectively. Conclusion: The method is rapid, sensitive, accurate and can be used for detecting residual organic solvents in pemetrexed disodium.

[Key words] Gas chromatography; Pemetrexed disodium; Residual organic solvents

培美曲塞二钠(pemetrexed disodium)是一种多靶位叶酸拮抗剂,可同时阻断胸苷酸合酶(TS)、二氢叶酸还原酶(DHFR)和甘氨酰胺核苷酸转甲酰酶(GARFT)这3种不同的对癌细胞的生存至关重要的酶靶标,从而阻断肿瘤DNA复制、细胞分裂所需的酶,抑制了肿瘤的生长[1-2]。由于该原料药在制备过程中使用了有机溶剂二氯甲烷、四氢呋喃和N,N-二甲基甲酰胺,依据人用药品注册技术规范国际协调会(ICH)提出的残留溶剂指导原则,所用溶剂均被列为药品必须限制的第二、三类有机溶剂[3],因此为保证药品质量和用药安全,对该原料药进行有机溶剂残留量检测就显得尤为重要。本实验采用毛细管气相色谱法[4-6],对培美曲塞二钠中有机溶剂残留量分析进行了系统性的研究、确认,所建立的方法简单、灵敏、重现性好、准确度高。可用于实际生产中的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津GC-14C型气相色谱仪(配FID检测器,化学工作站)。

1.2 试药

培美曲塞二钠(批号:090201,090202,090903,090204,江苏奥赛康药业有限公司)。二氯甲烷、四氢呋喃和N,N-二甲基甲酰胺均为分析纯(南京化学试剂厂);水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:OV-101毛细管色谱柱(30 m×0.53 mm,1.0 μm),内涂100%聚二甲基聚硅氧烷。柱温:50℃;保持5 min后,以30℃/min速度升至150℃,保持3 min;进样口温度:180℃;检测室(FID)温度:200℃;载气:N2;流速:1.0 ml/min;分流比为1∶50;进样体积:1 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液的制备精密称取二氯甲烷0.024 g、四氢呋喃0.0288 g、N,N-二甲基甲酰胺0.0352 g置50 ml量瓶中,加纯化水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取上述溶液0.5 ml,置10 ml量瓶中,加纯化水稀释至刻度,摇匀,即得。

2.2.2 供试品溶液的制备取培美曲塞二钠40 mg,精密称定,置5 ml具塞试管中,加纯化水1 ml,摇匀,作为供试品溶液。

2.3 色谱峰定性试验

分别精密吸取二氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺各1 μl,按“2.1”项下的色谱条件进样,记录色谱图。二氯甲烷峰的保留时间为0.918 min,四氢呋喃峰的保留时间为1.295 min,N,N-二甲基甲酰胺峰的保留时间为3.583 min,结果见图1。

2.4 线性关系考察

取二氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺,分别精密称定,置同一只100 ml量瓶中,用纯化水制成标准贮备液,其质量浓度分别为0.253、0.406、0.376 mg/ml。精密量取标准贮备液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 ml分别置于25 ml量瓶中,用纯化水稀释至刻度,摇匀,得对照品系列标准溶液。精密量取系列标准溶液各1 μl,分别进样分析,以峰面积(A)对相应溶液中各组分质量浓度(C)作线性回归,结果见表1。

2.5 检测限测定

取二氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺分别加水稀释,按“2.1”项下的色谱条件进样。信噪比S/N=3时计算检测限,分别为0.4、0.4、1.7 μg/ml。

2.6 精密度试验

精密吸取线性关系考察项下中间浓度的溶液,重复进样6次,以各溶剂峰面积计算,RSD分别为2.01%、2.98%和3.14%,结果表明该法精密度良好。

2.7 重复性试验

取二氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺和培美曲塞二钠(批号:090201)适量,按“2.2”项下方法制备混合对照品溶液和6份供试品溶液,分别进样分析。结果3种有机溶剂均未检出。

2.8 稳定性试验

取回收率试验项下序号为1的测试溶液,放置1 d后,按“2.1”项下的色谱条件进样分析,检测结果不变,表明被测物的稳定性良好。

2.9 回收率试验

取已知溶剂残留量的培美曲塞二钠(批号:090201)40 mg,精密称定,置5 ml具塞试管中,共6份,精密添加1 ml二氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺质量浓度分别为20.24、32.48、30.08 μg/ml的混合标准溶液,振摇使溶解,摇匀。按“2.1”项下色谱条件进样分析,计算回收率,见表2。结果表明该法准确性良好。

2.10 样品测定

取对照品溶液和供试品溶液进样测定,按外标法以峰面积定量计算。3批培美曲塞二钠样品(批号:090202、090203、090204)中3种有机溶剂均未检出。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

由于原料药在水中易溶,故选择水作为溶剂。分析时采用程序升温,在保证各溶剂分离良好的情况下,提高分析效率。结果表明用水作溶剂,谱图简单,干扰峰少,6 min内完成整个分析,快速简便。

3.2 系统耐用性

在实验过程中,曾选用Agilent DB-5毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm),内涂5%苯基甲基聚硅氧烷,其他按“2.1”项下色谱条件进行测定,各溶剂峰除保留时间略有改变,其他没有影响。结果表明采用的检测条件适用于不同型号的非极性气相柱。出于价格因素,推荐首选OV-101毛细管色谱柱。

[参考文献]

[1]Hutson TE, Vukelja S, Atienza D, et al. Phase Ⅰ study of a 3-drug regimen of gemcitabine/cisplatin/pemetrexed in patients with metastatic transitional cell carcinoma of the urothelium [J]. Investigational New Drugs,2008,26(2):151-158.

[2]Robert D, Hailun L, Matthew M, et al. Phase 2 trial of pemetrexed disodium and gemcitabine in advanced urothelial cancer [J]. Cancer,2008,112(15):2671-2675.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2005:附录Ⅷ P.

[4]Liu DH, Zhang CY, Mao ZM. Determination of Residual Organic Solvents in Tiotropium Bromide by GC [J]. Chinese Journal of Pharmaceuticals,2009,40(3):207-208.

[5]周岐勋,李健和,徐幸民.高效液相色谱法测定盐酸甲氯芬酯分散片含量及有关物质[J].中国当代医药,2009,16(4):73-76.

[6]关强,王云龙,杜遵义.高效液相色谱法测定延胡索药材中延胡索乙素的含量[J].中国当代医药,2009,16(4):78-79.

(收稿日期:2009-07-21)