常规方法测定LDH测量不确定度的评定

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摘要：目的 探讨测量不确定度评定在临床检验常规测量中的应用。方法 以常规方法测定乳酸脱氢酶（ldh-L）为列，按测量不确定度评定过程，分析不确定度的来源并分别按A类和B类进行评定，合成标准不确定度，计算拓展不确定度。结果 当LDH浓度为水平1时，A类不确定度UA=1.09，B类不确定度UB=3.32，合成标准不确定度UC=3.49，拓展不确定度U=6.84。当LDH浓度为水平2时，A类不确定度UA=0.58，B类不确定度UB=3.32，合成标准不确定度UC=3.37，拓展不确定度U=6.61。结论 该研究只评估测量过程的不确定度，各实验室应参照《测量不确定度表示指南》建立本实验室各项检测项目不确定度评定程序并进行评定，以确保实验结果的可靠性。

关键词：不确定度；乳酸脱氢酶；评定

"不确定度（ uncertainty）"起源于1927年德国[1]。1998年我国了国家计量技术规范JJF1001-1998《通用计量术语及定义》。它是指"表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数"。测量不确定度的概念及其评定和表示方法的采用，是计量科学的一个新进展[2]。测量不确定度的来源甚广，我们在进行测量工作时无法做到消除，只能尽量减少其来源[3]。随着经济发展全球化，不确定度是国际检测实验室之间互认和通用准则接轨的基础[4]。本文将对使用临床常规方法测定人乳酸脱氢酶的结果进行不确定度评定，并对影响不确定度评定因素进行了逐项分析，探讨测量不确定度评定在临床检验常规测量中的应用。

1 资料与方法

1.1一般资料 日本株式会社日立公司7600全自动生化分析仪，德赛诊断系统（上海）有限公司试剂和试剂配套的LDH校准液，购自德赛诊断系统（上海）有限公司的LDH质控品，分别为水平1和水平2。

1.2方法

1.2.1 LDH检测原理 IFCC和德国临床化学学会（DGKC）推荐的紫外检测法，该法简单快速、精确度高、重复性好，适宜于常规检验。

L-乳酸+NAD+？圮LDH 丙酮酸+NADH+H

1.2.2规定被测量物 用双波长（主波长：340nm，次波长：405nm）速率法检测LDH。测量过程严格按照湖南省妇幼保健院检验科生化室编制的作业指导书，其中分析参数由德赛诊断系统（上海）有限公司提供，仪器操作遵循日本株式会社日立公司的用户手册。结果计算公式如下：LDH（u/l）=测定（E/min[S-BI]）/校准（E/min[S-BI]）×标准液活性（u/l）（公式1）。本次实验在1d 内完成，重复测定样本15次，结果均在控，将测定结果记录后进行统计学分析。

1.2.3识别不确定度来源 经过分析，测定LDH的测量不确定度主要来源于分析前和分析中两个阶段。分析前的不确定度主要来自受试者的准备和标本采集、储存与制备过程，在临床检验实践中，个体间的生物学变异也是分析前不确定度的重要来源。但是分析前过程存在很多临床实验室无法控制的情况，且这些情况各异，故对于这一部分不予评定。关于分析中阶段由公式1可知，如果校准品赋值不准确，或校准品所携带的值不确定度过大，故分析中阶段带来的不确定度可根据厂家溯源性报告进行评定。

1.2.4评定不确定度分量

1.2.4.1评定A 类不确定度（UA） 通过实验和适当的统计学处理，对估计值的不确定度进行评定。前面识别的各分量中，总不精密度所致的不确定度为A类，为平均值的一倍标准差，即UA=■■=■S■ （公式2） （其中■=■，S■=■）。■是与测量次数n、置信概率P有关的量，可从专门的数据表中查得。在P=0.95时，■的部分数据可从表1查得：

1.2.4.2评定B类不确定度（UB） 利用相关信息对估计值的不确定度进行评定。

1.2.5合成标准不确定度（UC） 评定各不确定度分量后，各分量以方差的形式合成。合成不确定度为合成方差的正平方根。在本研究中，各分量互不相关，且为相对数，计算公式应为： UC=■。

1.2.6 计算扩展不确定度（U） 扩展不确定度等于合成不确定度与包含因子（κ） 的乘积，根据临床检验专业的需要，一般取κ = 1.96，置信概率P为0.95。所以U = 1.96 × UC 。

2 结果

2.1 A类不确定度评定 见表2。

2.2 B类不确定度评定

2.2.1制造商提供的定标液LDH浓度的扩展不确定度为6.5，按正态分布，置信概率为0.95，K取1. 96，则标准品的相对标准不确定度为Urel（Ccal）=6.5/1.96 =3.32。

2.2.2标准品复溶时由刻度吸管容积误差引入的不确定度：5mL刻度吸管校正时的容量不确定度为0.005mL，按矩形分布，其标准不确定度为：U1=0.005/■=2.887×10-3mL。相对标准不确定度为Urel（V1）= 2.887×10-3/3=0.10%。

2.2.3温度变化引入的相对标准不确定度Urel（V2）：假设实验温度为（25±2）℃，水在25℃时的溶胀系数为2.57×10-4，按矩形分布，则Urel（V2）=5×2.57×10-4/■= 0.07%。

B类不确定度分量：UB=■=3.32

2.3计算合成不确定度及拓展不确定度 当LDH浓度为水平1时：合成不确定度 UC= ■=3.49

拓展不确定度 U=k×UC=6.84。当LDH浓度为水平2时：合成不确定度 UC=■=3.37，拓展不确定度 U=k×UC=6.61。

3 讨论

临床检验是一个受多因素制约，也是实验室内部不可控因素较多的实践活动。关于检测系统的偏倚问题，引用本室参加卫生厅临床检验中心的室间质评回报结果进行评定。在分析过程中，涉及到多个步骤的不确定度分量，一般可分为两类。其中A类不确定度是用统计学方法评定的不确定度，本实验中即样品或标液吸光度测定引入的不确定度，包括仪器的加样、加试剂、搅拌、水浴温度、光学检测、仪器修约等诸多因素。B类不确定度是用非统计学方法评定的不确定度，其主要来源于以下几个方面：①制造商根据标准参考物质并通过参考方法所测得的定标液中LDH浓度的不确定度；②定标液复溶时引入的不确定度；③试验温度变化引入的不确定度。

本实验按照《测量不确定度评估和报告的通用要求》的要求通过常规方法对人血清LDH不确定度进行评定，深入了解临床实验室不确定度评定的方法、评定程序及注意事项，只能反映本实验室对人血清乳酸脱氢酶测定的不确定度。对连续监测法检测血清中LDH整个测量过程的各种因素所引入的不确定度分别进行A类和B类评定，结果由仪器本身所引入测量不确定度（A类）小于或等于1.09，而由标准品浓度所引入的测量不确定度达3.37，故选购质量好的标准品是保证连续监测法检测血清中LDH结果准确性的关键。

根据笔者查阅相关文献可知，医学实验室的测量不确定度与传统用准确度表示的误差相比，更能反映测量的水平，且对检测结果的临床应用有实际指导意义。

参考文献：

[1]王立志，柳盛典.不确定度关系的广义表达式[J].鲁东大学学报（自热科学版），2009，25（4）：337-340.

[2]Yao Feng-Mei， LIN Erda， Boken Vijendra ect. Uncertainties in assessing the effect of climate change on agriculture using model simulation and uncertainty processing methods[J].Chinese Science Bulletin，2011，56（8）：729-737.

[3]U.S.Department of Health and Human Services.medicare，medicaid and CLIA program：regulations implementing the clinical laboratory improvement amendment of 1988（CLIA）.Final Rule Fed Regist，1992，57（40）：7002-7186.

[4]Turner TT， Bang HJ， Lysiak JL， et al.The molecular pathol-ogy of experimental testicular torsion suggests adjuncttherapy to surgical repair [J].J Urol，2004，172（6）：2574-2578.