蜂胶配伍西洋参调节免疫功能的实验研究
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关键词 蜂胶 西洋参 调节免疫 协同作用 实验研究
蜂胶是蜜蜂从植物芽孢或树干上采集的树脂，混入自身分泌物形成的一种胶状物质，具有多种保健功能，目前社会上习惯将其与西洋参配伍，用来滋补身体。为观察两者对调节免疫功能的协同作用，笔者进行了小鼠血清溶血素测定、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验、二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应试验(DTH)、NK细胞活性测定刀豆球蛋白A（ConA）诱导的小鼠脾淋巴细胞转化测定的实验研究，现将结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 实验动物和检测条件：实验动物用昆明种小鼠由浙江省实验动物中心提供，清洁级，雌性，体重20±2g。饲料由浙江省实验动物中心提供，执行标准GB14924-1994。检测环境条件：温度91～93℃，相对湿度60%～65%。动物于试验前在动物房环境中适应3天。
1.2 实验药物和剂量设计：蜂胶: 采自养蜂场原胶,由杭州天厨蜜源保健品有限公司提供。给药前将蜂胶加入粉碎机中打成200目蜂胶粉，冷贮备用。西洋参：购自吉林省宏久生物科技有限公司的西洋参提取物。受试药的配制：将蜂胶粉与西洋参提取物以3∶1的比例混合均匀，临用时用蒸馏水配制成5g/ml、2.5g/ml、1.25g/ml浓度。实验设三个剂量组：低剂量组、中剂量组、高剂量组和一个给予蒸馏水的阴性对照组。低、中、高三个剂量分别为0.5、1.0、2.0g/kg体重(相当于人体临床拟用量的7.5、15和30倍)，阴性对照组每日灌胃蒸馏水20ml/kg体重。
1.3 实验方法：分述如下。
1.3.1 小鼠血清溶血素测定(血凝法)：各组灌胃给样品，每天1次，连续30天。在试验第25天，每鼠腹腔注射0.2ml 2%(V/V)压积绵羊红细胞(SRBC)悬液，进行免疫。5天后，取血离心，收集血清，用生理盐水将血清倍比稀释，37℃温箱孵育3小时，观察血球凝集程度，计算抗体积数。
1.3.2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法)：各组灌胃给样品，每天1次，连续30天。动物处死前40分钟，每鼠腹腔内注射20%(V/V)鸡红细胞悬液1ml，处死后再注入2ml生理盐水，取腹腔液滴片，37℃温箱孵育30分钟，固定染色，镜检，计数100个巨噬细胞，计算吞噬率及吞噬指数。
1.3.3 二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应试验(耳肿胀法)：各组灌胃给样品，每天1次，连续30天，在试验第25天，每鼠腹部涂50μl二硝基氟苯溶液(涂皮前24小时脱毛，面积约3cm×3cm)。5天后用二硝基氟苯溶液10μl涂抹于小鼠右耳进行攻击，24小时处死动物，剪下耳壳，用打孔器取下直径8mm的耳片，称重。
1.3.4 NK细胞活性测定（LDH测定法)：各组灌胃给样品，每天1次，连续30天。在试验第30天，每鼠无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用镊子轻轻撕碎，制成单细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤，计数，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为5×106个/ml。试验前24小时将YAC-l细胞(靶细胞)传代培养，应用前用Hanks液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为1×105个/ml。取靶细胞和脾细胞悬液(效应细胞)各100μl(效靶比50∶1)，加入U型96孔培养板中，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各1000μl，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100μl。上述各项均设3个复孔，于37℃、5%CO2培养箱中培养4小时，离心，每孔吸取上清100μl置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μl，反应3分钟，每孔加入1mol/L的HCI30μl，测光密度(OD)值，计算NK细胞活性。
1.3.5 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的测定：各组灌胃给样品，每天1次，连续30天。动物颈椎脱臼处死，取脾脏，制成脾细胞悬液，调整细胞浓度为2×106个/ml，将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加50μlConA液（相当于5μg/ml），另一孔作为对照，于5%CO2，37℃培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的PRM1640培养液，同时加入MTT（5mg/ml）50μl/孔，继续培养4h，培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解后，以570nm波长进行比色。
1.3.6 统计学处理：计量数据采用x±s表示，采用方差分析，P＜0.05为有统计学差异。
2 实验结果
2.1 对小鼠血清溶血素影响：结果见表1。与阴性对照组(蒸馏水)比较，中、高2个剂量组能提高小鼠血清溶血素抗体积数水平，差异均有显著性(P＜0.05)。
2.2 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响：结果见表2。中、高2个剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率、吞噬指数和阴性对照组(蒸馏水)比较，差异均有显著性(P＜0.05)。
2.3 对二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应的影响：结果见表3。中、高剂量组小鼠左耳重及肿胀度和阴性对照组(蒸馏水)比较，差异均有显著性(P＜0.05)。
2.4 对小鼠NK细胞活性的影响：结果见表4。与阴性对照组(蒸馏水)比较，中、高2个剂量组均能提高小鼠NK细胞活性，差异均有显著性(P＜0.05)。
2.5 对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响：结果见表5。中、高剂量组ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化和阴性对照组(蒸馏水)比较，差异均有显著性(P＜0.05)。
3 讨论
文献报导蜂胶能够增强免疫功能低下小鼠的抗体生成细胞功能，提高溶血素含量，增强单核吞噬细胞功能，提示蜂胶有促进和调节机体体液免疫功能的作用，并增加机体吞噬细胞的吞噬作用［1］。用MTT法、耳肿胀法、Jerne改良玻片法、血凝法、半体内法、乳酸脱氢酶测定法等多种方法，观察蜂胶提取物对小鼠脾淋巴细胞转化、迟发型变态反应、血清溶血素、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、NK细胞活性状况，结果蜂胶提取物具有增强小鼠细胞免疫功能和体液免疫功能的作用［2］。而蜂胶与西洋参配伍进行免疫功能观察报导甚少。本文将蜂胶与西洋参配伍成混合粉进行对小鼠免疫功能影响的观察，结果表明蜂胶西洋参粉以1.0g/kg和2.0g/kg灌胃小鼠，可明显提高小鼠的血清溶血素水平（P＜0.05 ）、巨噬细胞吞噬能力（P＜0.05 ）、迟发型变态反应（P＜0.05 ）、脾淋巴细胞增殖反应（P＜0.05 ）。结果提示，蜂胶配伍西洋参可明显增强机体的细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫功能，其具体机理尚有待于进一步研究。
4 参考文献
［1］于晓红,李淑华,李树伟,等.蜂胶对小鼠免疫功能影响的实验研究［J］.中医药信息,2001,18（4）:53-54.
［2］邵艳,浦锦宝.蜂胶调节小鼠免疫功能实验研究［J］.浙江中西医结合杂志,2005,15（2）:90-92.
收稿日期 2011-01-12