逆灸对心肌缺血再灌注损伤大鼠HSP70的影响

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摘要：目的：观察逆灸对心肌缺血再灌注损伤大鼠hsp70表达的影响，并与缺血预处理的效果进行比较。探讨逆灸有效性和对心肌的保护机制。方法：①选用健康Wistar大鼠30只，雄性，体重(250±20)g，随机分成5组：正常对照组、假手术组、心肌缺血再灌注组(m组)、心肌缺血预处理组(1P组)、逆灸组，每组6只。②免疫组织化学法检测大鼠心肌组织HSP70表达。③计量资料差异比较采用spss16.0软件统计。结果：逆灸“内关”“膻中”穴可明显增加心肌缺血再灌注损伤型大鼠心肌组织中HSP70的表达，与IR组比较差异显著(P＜0.05)，且与IP组无显著差异(P＞0.05)。结论：逆灸与缺血预处理均可增加HSPT0的表达，减轻心肌缺血再灌注对心肌造成的损伤，丰富了“治未病”理论。

关键词：心肌缺血；逆灸；HSP70；缺血预处理

中图分类号：R－33　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)07－1382－02

“逆灸”一词首次出现在东晋范汪的《范汪方》，明代高武在其著作《针灸聚英》中提到：“无病而先针灸日逆。逆，未至而迎之也。”逆灸作为灸法保健防病的一种方法，是针灸“治未病”的重要内容。缺血预处理被认为是迄今最为有效的内源性保护措施，心肌缺血预处理是指一次或多次短暂的心肌缺血及再灌注能够有效地调动心肌自身保护机制，提高对随后长时间缺血的耐受力。现代医学已证实机体具有内源性适应机制，故利用预处理方法使机体产生适度应激，启动机体内源性适应机制预防或减轻随后损伤。逆灸与缺血预处理方法有相似之处。本实验观察“逆灸”对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织中HSP70的变化表达，探讨“逆灸”的有效性和心肌保护机制，为针灸“治未病”理论在临床的应用提供实验依据。

1　材料与方法

1．1　材料和动物分组采用健康雄性Wistar大鼠30只，体重(250±20)g，随机分成5组，每组6只。正常对照组：常规饲养；假手术组：暴露心脏90rain，不作其他处理；心肌缺血再灌注组(IR)：开胸后缺血20min，再灌注40min；心肌缺血预处理(IP)：开胸后缺血5rain再灌注5rain，反复3次共30rain，然后缺血20min，再灌注40rain；逆灸组(PM)：艾灸7天，每天2次，每次艾灸30min。

1．2　动物模型的制作 10％乌拉坦1mL/kg腹腔注射麻醉，四肢接上心电图电极，记录心电图。气管插管，连呼吸机，按1－1.5mL/100g潮气量，70－80次/min的频率给与呼吸来维持正压呼吸。呼：吸=2：1。沿胸骨左缘约0.5cm处剪断第3、4肋骨，暴露胸腔。用0号医用缝合线在左冠状动脉下缝一针。采用推管法行左冠状动脉缺血再灌注。以左室前壁发绀并向外膨胀及心电S－T段抬高为缺血标志。

1．3　标本采集及检测方法 采用计算机病理图像分析系统，根据阳性细胞分布情况，计算HSP70表达的平均光密度值。

1．4　统计学处理 实验数据应用SPSS16.0统计软件处理，采用均数±标准差(x±s)表示。各组组间差异采用单因素方差分析(One－way ANOVA)，组间比较用检验分析；P＜0.05表示有统计学意义。

2　结果

逆灸对心肌组织中HSP70表达影响见表1。

表1中可以看出正常对照组与假手术组无显著差异(P＞0.05)，假手术组、IP组、IR组，组之间均有显著差异(P＜0.05)，逆灸组与IR组比较差异显著(P＜0.05)，逆灸组与IP组比较无显著差异(P＞0.05)。

3　讨论

逆灸是指在机体健康无病、疾病未发生或病情尚浅的情况下，预先运用艾灸的方法，激发经络之气，增强机体抗病及应激能力，防止疾病发生或减轻疾病随后带来损伤的传统方法，是根据《内经》“治未病”的原则，结合腧穴经络理论而设置的针灸治未病方法。现代应激学说认为，逆灸是通过刺激相关腧穴，激发机体自身潜能，激发和调节内在抗病能力的一种方法，应激可以调动内源性保护机制，属于防御性反应。

近年来在心肌保护作用的研究领域人们多注重调动心脏内源性保护机制。1986年Murry等提出缺血预处理对心脏有保护作用以后，人们开始通过各种预处理来调动脏器内源性保护作用。逆灸以其使用简便、价格低廉、无毒副作用而具有这种适宜性。

有研究表明针刺“内关”可以减轻心肌缺血再灌注对心肌的损伤。临床报道证实，针刺膻中穴可以改善心肌缺血，元疤痕灸膻中穴也可以达到同样的效果。针刺内关、膻中穴对于心肌缺血再灌注具有保护心肌的作用。逆灸两穴对于心肌缺血具有预防作用。

目前人们已经关注到热休克蛋白(HSPT0)同心肌缺血预处理保护作用之间的密切。HSPT0对细胞具有保护作用，逆灸作为一种预处理手段，可以诱导HSP70的表达与合成，对损伤的心肌组织产生保护作用。有研究发现，全身热休克诱导HSPT0产生，能够改善缺血后心脏机械功能的恢复，缩小心肌梗塞的面积，减轻氧自由基及钙超载所致的心肌损伤，而且Hurter等发现HSPT0合成增加量与心肌缺血预适应的心肌保护呈正相关。研究证实：艾灸刺激可以直接诱导局部组织产生热休克蛋白。故本实验采用逆灸诱导心肌组织产生HSPT0。

本试验观察缺血再灌注心肌组织中HSP的表达。心肌缺血预处理组(IP)高于心肌缺血再灌注组(IR)，两组差异明显(p＜0.05)，说明缺血预处理对心肌具有保护作用。逆灸组(PM)与心肌缺血再灌注组(1R)比较差异明显(p＜0.05)，说明逆灸增加了HSPT0的大量表达。逆灸组与缺血预处理组组间无差异(p＞0.05)，具有相似效果，说明逆灸具有缺血预处理的效果，证明逆灸的客观存在性及有效性。

以上结果说明逆灸“内关”、“膻中”可上调HSPT0蛋白表达，有保护心肌的作用。逆灸作为一种安全且创伤小的预处理方法，丰富了中医“治未病”，对防治心血管病有重要的理论和实用价值，具有广泛的临床预防及治疗的应用前景!