对两种浓度腺嘌呤诱导肾阳虚不育大鼠的评估

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摘要：目的 对两种浓度（200 mg/Kg/d与300 mg/Kg/d）腺嘌呤诱导肾阳虚不育大鼠的评估。方法 将18只成年雄性SD大鼠随机分成三组，正常对照组、模型A组（200 mg/Kg/d）和模型B组（300 mg/Kg/d），每组6只。对照组与模型组分别予以蒸馏水和腺嘌呤灌胃21 d。观察大鼠体征、血清性激素、血清肌酐、血清尿素氮、与肾脏重量及密度的变化。结果 与正常对照组相比，2个模型组睾酮、雌二醇、体重、重量与密度明显降低（P0.05），血清肌酐、血清尿素氮与肾脏重量明显升高（P

关键词：腺嘌呤；肾阳虚；不育；大鼠

中图分类号：R285.5 文献标识码：A

祖国医学对治疗不育症有其独特优势，腺嘌呤诱导肾阳虚不育动物模型是研究不育最常用的动物模型。本研究探讨两种常用腺嘌呤浓度（200 mg/Kg/d与300 mg/Kg/d）对肾阳虚不育大鼠建模的评估。

1资料与方法

1.1一般资料

1.1.1实验动物 SD雄性大鼠，体重280～300 g，18只，清洁级（由广西中医药大学动物实验中心提供）。

1.1.2药品及试剂 腺嘌呤（Sigma公司），睾酮（testoterone，T）、黄体生成素（luteotrophic hormone，LH）、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）、雌二醇（estradiol，E2）放射免疫分析试剂盒（北京北方生物技术研究所）。

1.2方法

1.2.1分组及建模 大鼠适应性喂养1 w后，随机分成三组：正常对照组、模型A组（200 mg/Kg/d）和模型B组（300 mg/Kg/d），每组6只。正常对照组按2 mL/d剂量予以蒸馏水灌胃，模型组每次给药前称体重，A、B组分别按200 mg/Kg/d与300 mg/Kg/d计量并用蒸馏水制成2 mL混悬液灌胃，灌胃21 d。停止灌胃后第2 d处死动物，期间或建模后做下列检测。

1.2.2指标检测 ①每天测量体重（确定腺嘌呤用量）、饮食量及尿量，观察动物一般情况。②性激素及肾功能的检测：戊巴比妥麻醉后，腹主动脉取血7～8 mL，血标本凝集后取血清2～3 mL，用放免法检测T、LH、FSH与E2，生化检测技术检测血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）与血清肌酐（serum creatimine，SCr）含量。③与肾脏器官称重。④的提取和分析：将附睾取出，在其头和尾各沿纵向垂直剪2次，用营养液2 mL孵育10 min，进行密度分析。

1.2.3统计学分析 计量资料用（x±s）表示，数据统计采用SPSS13.0 for Windows软件进行统计学分析。

2结果

2.1一般状态观察 正常对照组大鼠发育正常，体重不断增加，对外界刺激反应灵敏、活动正常，毛发润泽光滑。2个模型组灌胃1 w后，大鼠都出现畏寒肢冷，蜷缩拱背；2 w起活动减少，反应迟钝，饮食差，体毛枯疏，失去光泽，并开始出现脱毛，阴囊皱缩，回升，肛周污染。模型B组在灌胃第3 d出现多尿，模型A组在灌胃第9 d出现多尿。两组模型组体重明显减少，持续到死亡或结束实验。正常对照组无死亡，模型A组在第3 w内死亡2例，模型B组在第1 w内死亡1例、第2 w内死亡1例、第3 w内死亡2例，见表1，图1。实验中死亡的动物经尸体解剖检查，肺组织中未发现药液及出血点，排除因灌胃操作失误造成死亡。而每只死亡大鼠均出现大白肾，有的肾表面有出血点。

2.2血清检测指标变化比较 与正常对照组比较，两组模型组E2、T显著降低（P0.05），见表2。

2.3密度与与肾脏器官称重 2个模型组的肾脏重量明显高于正常对照组，重量与密度明显低于正常对照组（P0.05），模型B组的密度明显低于模型A组（P

3讨论

不育症是临床上常见的疾病，世界卫生组织已将该疾病与心血管病、肿瘤并列，成为当今影响人类生活和健康的3大主要疾病。不育原因涉及男女双方，据欧美国家统计，不育困扰着世界范围内10%～15%的夫妇，其中有50%与男性因素相关。基于祖国医学"肾为先天之本"、"肾主生殖"的理论基础，从肾论治男性不育是该研究领域同行的共识。Adachi Y等[1]发现腺嘌呤可直接降低17β-羟类固醇脱氢酶的活性导致睾酮合成减少，或通过肾素-血管紧张素-固酮系统影响血液循环而损害性腺。袁源等[2]认为腺嘌呤模型，可使参与代谢的酶及参与形成过程的酶活性下降，生精功能低下，组织病理发生改变，皮质醇及血浆促性腺激素含量下降。腺嘌呤诱导所致的不育大鼠表现为肾阳温煦生化功能不足，水液代谢异常，生殖机能衰退证候，即：日益消瘦，畏寒肢冷，倦缩拱背，精神萎顿，体毛脱落，基础体温降低，多尿，排泄尿素和肌酐能力降低。血中酮、雌二醇等激素含量降低。肾组织中与糖、脂肪、蛋白质代谢有关的各种酶活性明显减弱。组织退行性变，产生减少或缺如等[3]。因此，腺嘌呤诱导模型是目前证候特征吻合较理想的一种"肾阳虚"模型。

本研究用两种浓度（200 mg/Kg/d与300 mg/Kg/d）腺嘌呤灌胃大鼠，2个模型组大鼠都出现畏寒肢冷，蜷缩拱背，反应迟钝，饮食差，体毛枯疏，失去光泽，脱毛；阴囊皱缩，体重减轻，尿量增多等体征；实验检测发现睾酮、雌二醇、体重、重量与密度明显降低，血清肌酐、血清尿素氮与肾脏重量明显升高，说明2种浓度腺嘌呤均可成功诱导大鼠出现肾阳虚不育症。在本研究中2个模型组都有死亡例数，两组之间腺嘌呤致死率无差别。实验中死亡的动物经尸体解剖检查，肺组织中未发现药液及出血点，排除因灌胃操作失误造成死亡。而每只死亡大鼠均出现大白肾，有的肾表面有出血点，提示肾损伤可能是动物死亡的主要因素之一。尽管两个模型组之间E2、T、BUN、SCr、FSH与LH无明显差异，但模型B组在灌胃第3 d出现多尿，模型A组在灌胃第9 d才出现多尿，说明较高浓度腺嘌呤对肾功能的影响更明显，可致动物较早出现肾阳虚的症状。密度可直接反映大鼠的生殖能力，本研究中两个模型组的密度明显低于正常对照组，并且较高浓度的腺嘌呤对发生的抑制作用更明显。影响发生的因素很多，包括特异性生化酶，如：乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）和谷氨酰基转移酶（Gamma-glutamyltransferase，γ-GT）。其中LDH 可参与生精上皮的成熟；γ-GT 可促进的成熟[4]。因此，腺嘌呤抑制发生的作用机制还需做进一步的研究。

参考文献：

[1]Adachi Y， Nakada T. Effectof experimentally induced renal failure on testicular testosterone synthesis in rats[J]. Arch Androl，1999，43（1）：37-45.

[2]袁源，曹贵珠，卞慧敏.补肾法治疗男性不育症的实验研究概况[J].时珍国医国药，2003，14（5）：306-307.

[3]郑平东，朱燕俐，丁名城，等.腺嘌呤制作慢性肾功能不全动物模型[J].中华肾脏病杂志，1989，5（6）：342-343.

[4]黄天伦，夏明珠，任开明.腺嘌呤致雄性不育和慢性肾衰大鼠模型的相关性研究[J].中国男科学杂志，2003，17（3）：171-173.编辑/肖慧