CTHRC1和NFE2L3在结直肠癌组织中的表达及相关性

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[摘要] 目的 探讨cthrc1和nfe2l3在结直肠癌早期诊断的意义。 方法 收集本院2005～2011年经过病理组织学检查诊断结直肠癌的手术标本51例与非癌症的经过病理组织学检查为正常结肠和直肠组织20例，应用免疫组化检测人结直肠中CTHRC1和NFE2L3蛋白的表达情况。 结果 癌组织中CTHRC1表达阳性47例（92.16%），正常组织中阳性1例（5.00%），两组比较差异有统计学意义 （χ2=30.13，P ＜ 0.01）；NFE2L3的瘤组织阳性43例（84.43%），正常组织中6例（30.00%），两组比较差异有统计学意义（χ2=23.22，P ＜ 0.01）。CTHRC1阳性表达组中，NFE2L3的阳性表达率为72.55％（37/51)；在CTHRC1阴性表达组中，NFE2L3阳性表达率为1.96%（1/51），差异有统计学意义（χ2=36.54，r：0.510；P ＜ 0.01），两者表达呈正相关。 结论 CTHRC1是结直肠癌发展过程中的重要因素，而NFE2L3可以直接调节CTHRC1基因的表达，这说明通过抑制NFE2L3的活性可以减少CTHRC1的表达，进而延缓结直肠癌的进展，从而发挥其抗肿瘤的作用。

[关键词] 结直肠癌；三螺旋重复胶原蛋白1；核因子（网织红细胞衍生2）样3；癌症生物标记

[中图分类号] R735.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）06（a）-0008-02

CTHRC1 and NFE2L3 expression in colorectal cancer tissues and correlation

CHEN Enbi ZOU Jibin HUANG Yongbo HUANG Wei GAO Xiang LAI Dexin

Department of General Surgery, Zhanjiang Center People''s Hospital in Guangdong Province, Zhanjiang 524023, China

[Abstract] Objective To explore the significance of the CTHRC1 and NFE2L3 in the early diagnosis of colorectal cancer. Methods Collected our hospital''s 51 cases of colorectal cancer''s surgical specimens which were diagnosed by the histopathological and 20 cases of non-cancer colorectal''s normal tissue which were tested by histopathological during 2005 to 2011. Results CTHRC1 expressed positive for 47 cases (92.16%) in cancer tissues, but only 1 case (5.00%) expressed positive in normal tissues, the difference of them was extremely significant (χ2 = 30.13, P ＜ 0.01); the positive of the NFE2L3 which in tumor tissue was in 43 cases (84.43%), but only 6 cases (30.00%) in normal tissue, and the difference was significant too(χ2 = 23.22, P ＜ 0.01). The positive expression rate of the NFE2L3 was 72.55% (37/51) in the CTHRC1''s positive expression group; in CTHRC1''s negative expression group, NFE2L3 positive expression rate was 1.96% (1/51), the difference was significant (χ2 = 36.54, r : 0.510; P ＜ 0.01), and the two expression was positively correlated. Conclusion In the progress of colorectal cancer, CTHRC1 is an important factor. NFE2L3 can directly regulate the expression of the CTHRC1 gene. It explained that, it can reduce the expression of CTHRC1 by inhibited activity of the NFE2L3, thus delay the progress of colorectal cancer, and play its anti-tumor role.

[Key words] Colorectal cancer; Collagentriple helix repeat containing1; Nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 3; Cancer biomarker

结直肠癌（Colorectal cancer，CRC） 是常见的恶性肿瘤之一。CRC早期可无症状，而晚期手术效果差。因此对结直肠癌的诊治最重要的是早期诊断及早期手术治疗。目前临床上用于CRC分子标记诊断的是CEA，其灵敏度和可靠性较低[1]。由此CRC的临床诊疗上需要研究一种新型分子标记作为CRC早期诊断的标志物。三螺旋重复胶原蛋白1（collagentriple helix repeat containing1，CTHRC1）是一种分泌蛋白，主要的生物学作用是抑制胶原基质的合成。在已有的研究中表明，CTHRC1在结直肠癌中高表达[2-4]。在最近的研究中提出，抑制CTHRC1可以减少黑色素瘤[5]。核因子（网织红细胞衍生2）样3[nuclear factor （erythroid-derived 2）-like 3，NFE2L3]是NF-E2家族的第三个家族成员，主要的生物学作用是诱导抗氧化作用基础基因的表达[6]。在已有的研究表明NFE2L3在卵巢浆液性状癌、固体肿瘤干细胞、精原细胞瘤中表达。本文主要是通过免疫组化等检测技术探讨CTHRC1和NFE2L3在结直肠癌早期诊断的意义。

1 材料与方法

1.1 标本

收集本院2005～2011年经过病理组织学检查诊断结直肠癌的手术标本51例为实验组，男40例，女11例，平均年龄（59.4±12.5）岁；因外伤及其他非癌症的经病理组织学检查为正常结肠和直肠组织标本20例为正常组，男14例，女6例，平均年龄（58.2±11.6）岁。

1.2 试剂

Anti-CTHRC1 antibody（兔抗人类型）是由Abcam提供，产品批号：ab54181；NFE2L3 Antibody（兔抗人类型）购买自anbobio，产品批号：C20959；二抗为福州迈新提供的即用型快速免疫组化MaxVisionTM检测试剂盒（抗兔），产品批号：KIT-5004。

1.3 CTHRC1和NFE2L3的免疫组织化学检测

石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS（pH7.4）冲洗3次，每次3 min。微波修复3 min。每张切片加3%过氧化氢50 μL，室温下孵育10 min，PBS冲洗3次，每次3 min。去PBS液，每张切片加1滴或50 μL的一抗，室温下4℃ 12 h，PBS冲洗3次，每次3 min。去PBS液，每张切片加即用型MaxVisionTM 试剂50 μL，室温下孵育10~15 min。PBS冲洗3次，每次3 min。去除PBS液，每张切片加新鲜配制的DAB溶液100 μL，显微镜下观察3~5 min。自来水冲洗，苏木素复染，PBS或自来水冲洗返蓝，经过梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件分析所得数据，数据以百分比（阳性率）表示，采用χ2检验和Spearman等级进行相关分析。

2 结果

2.1 CTHRC1和NFE2L3蛋白的表达

癌组织中CTHRC1表达阳性47例（92.16%），正常组织中阳性1例（5.00%），两组比较差异极其显著 （χ2=30.13，P ＜ 0.01）；NFE2L3的瘤组织阳性43例（84.43%），正常组织阳性6例（30.00%），两组比较差异有统计学意义（χ2=23.22，P ＜ 0.01）。见表1。

表1 CTHRC1 、NFE2L3表达与结直肠癌组织临床病理特征的关系[n（%）]

注：与正常组比较，*P ＜ 0.01

2.2 结直肠癌中CTHRC1与NFE2L3的相关性

CTHRC1和NFE2L3均阳性表达者37例，均阴性者8例；CTHRC1阳性、NFE2L3阴性者5例；CTHRC1阴性、NFE2L3阳性者1例；CTHRC1阳性表达组中，NFE2L3的阳性表达率为72.55％（37/51）；在CTHRC1阴性表达组中，NFE2L3阳性表达率为1.96%（1/51），差异有统计学意义（χ2=36.54，r：0.510；P ＜ 0.01），两者表达呈正相关。

3 讨论

3.1 CTHRC1的表达与结直肠癌的关系

CTHRC1基因在体外实验中已被证实其过表达能够提高细胞的迁移能力并抑制Ⅰ型胶原的合成[7]， 可以通过限制胶原基质沉积和促进细胞迁移来参与血管的损伤修复， 因此， 其表达可能与肿瘤的侵袭及恶性程度相关。应用抗CTHRC1及其受体的单克隆抗体可封闭已分泌的CTHRC1及CTHRC1R，从而达到干扰、阻断CTHRC1与其受体旁分泌和自分泌作用的目的。目前已有抗CTHRC1及CTHRC1R抗体的抗肿瘤药物应用于临床[8]，其主要是通过阻碍血管的生成从而有效地抑制肿瘤淋巴管的生成和癌症的转移。本研究发现，CTHRC1在大部分的结直肠癌患者中的表达异常增高，只有4例患者少量表达，考虑为患者的年龄较高。结直肠癌的远端的正常组织中CTHRC1的表达极少，与结直肠癌组织的CTHRC1的表达有极显著差异（P < 0.01），并且发现在结直肠癌组织中新生血管周围的肿瘤细胞CTHRC1表达较强，验证了结直肠癌细胞产生的CTHRC1可以促进肿瘤细胞的侵袭和转移。

3.2 结直肠癌中CTHRC1的表达与NFE2L3的关系

CTHRC1的激活首先是由细胞外的IL-6和细胞膜上的gp130受体结合，然后CTHRC1蛋白接收膜受体gp130的信号后，CTHRC1上调NFE2L3的磷酸化水平，促使NFE2L3入核后，反式激活CTHRC1的启动子，促进CTHRC1的表达和分泌[9-10]。这其中Ras-MEK通路和mTOR蛋白也有上调NFE2L3的磷酸化水平的作用[11-12]。本研究结果显示在结直肠癌组织中CTHRC1与NFE2L3的表达呈正相关，表明它们在结直肠癌的发生中可能是很重要的相关因素。

总之，CTHRC1是结直肠癌发展过程中的重要因素，而NFE2L3可以直接调节CTHRC1基因的表达，这说明通过抑制NFE2L3的活性可以减少CTHRC1的表达，进而减缓结直肠癌的进展，从而发挥其抗肿瘤的作用。然而对NFE2L3的调节机制尚未明了，有待进一步的深入研究。

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