输血前不规则抗体筛查与直接抗人球蛋白试验的意义

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[摘要] 目的 探讨对输血患者在输血前实施直接抗人球蛋白试验以及不规则抗体筛选的检查结果，并总结检查临床意义。 方法 输血前患者2000例，实施不规则抗体筛选以及直接抗人球蛋白试验（DAT）两种辅助检查，分析结果以及研究性别、既往妊娠史和输血史对结果的影响。 结果 不规则抗体筛查检查阳性率为0.20%，直接抗人球蛋白试验结果阳性率为1.05%；既往输血史或者妊娠史是影响不规则抗体筛查以及直接抗人球蛋白试验结果的相关因素。 结论 不规则抗体筛查以及直接抗人球蛋白试验可以针对检查结果实施输血，避免溶血反应，临床上对患者安全以及治疗有很大帮助。

[关键词] 输血；直接抗人球蛋白试验；不规则抗体筛查；微柱凝胶法

[中图分类号] R446.6 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）30-0137-03

现阶段的文献资料显示引起溶血反应的最主要原因是红细胞不规则抗体（irregular antibodies）[1，2]，而不规则抗体产生原因不一，可能是妊娠免疫产生，也可能是多次以及大量的输血产生[3]，红细胞不规则抗体因缩短了红细胞存活时间，严重的导致威胁生命的免疫溶血性输血反应，因此目前对输血患者要事先进行不规则抗体的检查以及筛选，以此保证患者临床输血安全性[4]。

实施直接抗人球蛋白试验（DAT）的目的是验证不完全抗体是否导致了红细胞过敏[5]，而DAT的工作原理是体内由于不完全抗体（或补体）引起红细胞致敏因此发生凝集。检查结果阳性的患者的配血将会难度增加，国外的实施方法微柱凝胶技术已经广泛使用[6]。

本研究选择2010年12月～2012年12月间浙江省嵊州市人民医院住院部输血前患者共2000例，检查方法具体为微柱凝胶法，具体实施不规则抗体筛选以及DAT两种辅助检查，检查结束后对结果显示阳性的标本进一步实施抗体特异性鉴定检查。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2010年12月～2012年12月间浙江省嵊州市人民医院住院部输血前患者共2000例，其中男1102例，女898例，年龄1～87岁，中位年龄（56.45±6.29）岁；包括643例孕产妇、手术需血712例、住院部治疗645例。

1.2 检查仪器

西班牙戴安娜公司提供卡式专用离心机、孵育箱（37℃）以及微柱凝胶抗人球蛋白检测卡；上海血液生物医药有限公司提供不规则抗体检测试剂，包括人工细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，16种抗原，分别为D、C、E、c、e、M、N、s、P1、Lea、Leb、k、Jka、Jkb、Fya、Fyb；上海血液生物医药有限公司提供鉴定谱细胞1～10号。

1.3 辅助检查方法

①不规则抗体筛查方法：检查操作严格按照《全国临床检验操作规程》，患者于检查当日清晨取静脉血5 mL（促凝管抽取），在常温下静置30 min直至标本完全凝固，置于离心机实施离心操作120 s，对分离出的血清剔除纤维蛋白。根据抗人球蛋白微柱凝胶筛检卡的使用说明将不同对象做好标记，取3个不同的微柱凝胶管，分别加入50 μL 0.8% Ⅰ型、50 μL 0.8% Ⅱ型、50 μL 0.8% Ⅲ型不规则抗体筛查细胞试剂，同时分别加入50 μL检验血清与三个凝胶管；完毕后将检测卡置于孵育箱，在37℃环境下孵育15 min；此后置于卡式离心机进行离心操作，离心操作分为两阶段，第一阶段离心转速900 r/min，离心120 s，第二阶段离心转速1500 r/min，离心180 s；结果分为阴性与阳性，阴性结果判别标准为检测细胞不出现凝集现象，游离筛检红细胞沉降至凝胶柱底部，阳性结果判别标准为与检测细胞发生凝集现象，处于凝胶柱上端或中部悬浮状态；对于结果显示阳性标本进一步检测，实施谱细胞鉴定不完全抗体特异性。②直接抗人球蛋白试验方法：检查前取试验患者红细胞悬液（0.5%～0.8%）50 μL；取微柱凝胶抗人球蛋白检测卡，卡抗IG+C3d，加入所采集悬液，立即置入卡式离心机进行离心操作，离心时间维持5 min；记录试验结果，对显示阳性的标本进一步实施分型操作，具体实施抗IgG、抗C3d、抗IgG+C3d分型操作。

1.4 统计学方法

对结果使用统计学软件SPSS 13.0进行分析，计数资料采用χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 检查结果

本研究患者共2000例，不规则抗体筛查检查结果显示有4例阳性结果，阳性率为0.20%，直接抗人球蛋白试验结果显示阳性结果21例，阳性率为1.05%。不规则抗体筛查检查结果中，抗-s、抗-c、抗-C、抗-Jka均为1例患者；直接抗人球蛋白试验结果中，IgG+C3d分型抗体患者有11例，占52.38%；IgG分型抗体患者6例，占28.57%；此外C3d分型抗体患者有4例，占19.05%。

2.2 性别及既往输血妊娠史影响

由表1所示，男性以及女性患者在不规则抗体结果以及直接抗人球蛋白试验结果中差异不大，性别不是主要因素；有无既往输血史或者妊娠史是影响不规则抗体筛查以及直接抗人球蛋白试验结果的相关因素。

3 讨论

输血安全直接关系到患者后续治疗甚至患者生命安全，因此针对输血之前的检查工作十分重要[7]。针对输血安全性检查的文献较多，资料显示不规则抗体在普通人群中的筛查阳性率比较低，文献提示检出率在0.2%～2.4%之间[8]，不规则也就是意外抗体，是血清中除了抗-A、抗-B以外的血型抗体。人类血型抗体有两种类型，即IgG以及IgM，现阶段认知的ABO血型系统分型IgM型包括抗-A以及抗-B，除此以外的类型均为IgG型。不规则抗体将会引起免疫溶血性输血反应，这种情况很有可能造成输血死亡，占输血死亡总数的55%以上[9]。

对输血前患者实施不规则抗体筛查的主要目的在于：①对于输血用于治疗目的的患者，实施不规则抗体筛查利于选择血液，根据筛查结果选择无针对特别抗体的响应抗原血液，这样就可以避免因为选择血液不当造成溶血性输血反应，既提升了用血安全性又避免了血液使用浪费；②对孕产妇实施不规则抗体筛查，根据检查结果对新生儿溶血病进行有效的防治，早期诊断早期干预，提升新生儿出生时的健康状态以及免疫力；③对进行献血的人员实施不规则抗体筛查，可对血液进行分类分型，在后续用血过程中根据分型避免错误用血，大大减少了血液使用浪费。对于筛查性质的工作，量大时间短，因此需要一种快速准确的筛查辅助方法，微柱凝胶法是常用的不规则抗体筛查方法，其优势在于灵敏度高且快速准确，敏感程度高于聚凝胺法，因此应用更多。在微柱凝胶法中，微柱孔径控制得很小，实施温育且离心操作之后，红细胞每次只能单个通过微柱孔径，因此红细胞凝集成块的现象会导致其悬浮于凝胶上部，表现为阳性结果。相反的，通过微柱孔径的单个红细胞可通过凝胶颗粒，沉于凝胶下部，表现为阴性。

直接抗人球蛋白试验是针对自身免疫性溶血性贫血的常用诊断参照工具[10]，是患者自身免疫性溶血性贫血的常用辅助检查诊断指标之一。直接抗人球蛋白结果显示阳性的可能性较多，血液病、癌症、自身免疫性疾病、药物诱导等都是潜在的因素，而上述患者血清中往往含有自身抗体，因此导致红细胞致敏或者说处于被吸附状态，特别的对于此类患者，需要使用血液的时候，会在交叉配血检验里出现很大难度，尤其在部分患者血浆里存在同种不规则抗体，将会使得交叉配血工作十分困难[11，12]。因此对输血前实施直接抗人球蛋白试验的意义在于检查被检红细胞上是否存在有不完全抗体，直接法相比于间接法对于自身免疫性溶血性贫血更有参考价值[13]。患者在可以不输血的情况下尽量不输血，输血是唯一选择时应选择凝集反应最小的血液成分输注，输注过程中要控制输注速度缓慢，护理人员要随时观察，谨防不良现象出现。

本研究患者共2000例，不规则抗体筛查检查阳性率为0.20%，直接抗人球蛋白试验阳性率为1.05%。针对性别以及既往输血史、妊娠史对于检查结果的影响做了调查研究，根据研究结果判断，既往输血史或者妊娠史是影响不规则抗体筛查以及直接抗人球蛋白试验结果的相关因素，出现这种情况的可能原因是患者既往反复输血，自身免疫受到较大刺激。

随着医学水平的提升，是否实施交叉配血应该根据实际情况进行，在确定需要输血的情况下，应该尽量提前2～3 d进行不规则抗体检测以及直接抗人球蛋白试验，根据结果选择血液，一旦出现适合血液短缺的现象，可以有时间缓冲、改自体输血等。而使用微柱凝胶法进行检测可以有效提升筛查效率，可以列为输血前的常规检查项目。

综上所述，对需要实施输血的患者输血前进行不规则抗体筛查以及直接抗人球蛋白试验，可以对患者血清抗体进行明确，不但可以避免出现溶血性输血反应，提升用血的安全性，还可以大大减少因为错误用血造成的浪费，临床意义重大。

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[13] 孔祥骞. 柱凝胶技术在输血前抗体筛检中的应用分析及方法学探讨[J]. 中国现代医生，2012，50（28）：111-113.

（收稿日期：2013-05-30）