消炎痛、Hp联合复制小鼠胃炎模型的实验研究
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【摘要】目的探讨以消炎痛、幽门螺杆菌（hp）联合应用的方法建立小鼠胃炎动物模型。方法BALB/c小鼠，小鼠断食断水12h后给予模型组小鼠皮下注射5mg/ml消炎痛NaHCO3溶液0.3mg/10g，12h后再给予HP新鲜混悬菌液（109CFU/ml）0.4ml灌胃，1h后恢复正常饮食。每2天重复1次，连续6次。结果与对照组相比，胃炎模型组小鼠胃粘膜损伤严重，有炎症细胞浸润及Hp定植。结论采用消炎痛、幽门螺杆菌（Hp）联合应用的方法建立的胃炎小鼠模型，其病理变化持续、稳定，方法简单易行，发生率高，适合于实验细菌学研究。
【关键词】胃炎；消炎痛；幽门螺杆菌
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.04.490文章编号：1004-7484（2013）-04-1994-01
幽门螺杆菌（Helicobacter pylori Hp）可以引起胃炎、十二指肠溃疡等胃肠道疾病，并与胃癌的发生密切相关 [1]。为进一步探讨感染性胃炎发病机制，寻求有效的治疗方法，需建立一种实用的胃炎动物模型。根据胃炎的发生约半数是由于药物或化学因素的理论，联合生物因素的内在影响，采用消炎痛、Hp联合应用的方法建立胃炎小鼠模型，所造模型通过各种胃炎指标的印证均取得良好的收效。
1材料与方法
1.1实验材料近交系BALB/c小鼠60只，雌雄各半，8-12周龄，体重17-22g，未曾，由大连医科大学提供。Hp国际标准菌株（ACTT43504/NCTC11637），由大连医科大学中山学院微生物教研室提供。消炎痛，25mg/片，修正制药有限公司生产，用时溶于5%NaHCO3，浓度为5mg/ml。
1.2模型建立采用完全随机数字表法将BALB/c小鼠均分为对照组和模型组。小鼠断食断水12h后给予模型组小鼠皮下注射5mg/ml消炎痛NaHCO3溶液0.3mg/10g，12h后再给予HP新鲜混悬菌液（109CFU/ml）0.4ml灌胃，1h后恢复正常饮食。每2天重复1次，连续6次。对照组小鼠实施流程同模型组，用等量生理盐水灌胃及相应部位注射。
1.3动物处理试验第8周处死动物，处死前断食断水。无菌取出胃腔，去除前胃，沿大弯侧剪开，去除内容物，取胃组织，以备病理切片、粘膜涂片及分离培养使用。
1.4Hp的细菌学鉴定取部分小鼠胃粘膜于Hp选择培养基中反复涂抹后分区划线，微需氧培养3-4天。根据菌落特点、姬姆萨染色、尿素酶试验、氧化酶试验、触酶试验、马尿酸水解试验结果鉴定Hp。
1.5胃的病理学观察将小鼠部分胃粘膜组织置于10%福尔马林溶液中固定，依次经过脱水、石蜡包埋切片、姬姆萨染色，显微镜观察胃组织细胞的形态结构。
1.6统计学分析所有数据均用SPSS12.0软件进行统计分析。数值均以χ±s表示，根据方差齐或不齐用t或t’检验。*p
2结果
2.1动物表现与对照组相比，胃炎模型组小鼠精神状态渐显不佳，食量减少，便溏。胃炎模型组小鼠体重（16.23±1.69g）与对照组（19.35±2.06g，*p
2.2胃液pH酸度计测定胃液pH值显示，胃炎模型组小鼠pH值（3.63±0.34）明显高于对照组（2.99±0.21，p>0.05）。
2.3胃组织Hp感染及病理检查试验以Hp培养阳性为感染指标，经尿毒酶试验、组织切片检查及姬姆萨染色结果均显示胃粘膜内有Hp定植。姬姆萨染色、尿素酶试验、氧化酶试验、触酶试验、马尿酸水解试验结果鉴定Hp。
胃炎模型组小鼠出现慢性浅表性胃炎改变，胃体组织主细胞和壁细胞缩小，胃粘膜单个核细胞数平均为30个/HP，胃粘膜充血，甚至有出血及条索状糜烂。胃内有大量Hp定植，感染率为94.6%。而正常对照组小鼠胃窦及胃体粘膜未见异常。
3讨论
胃炎小鼠模型建立的过程中，消炎痛能降低胃粘膜的分泌，减少其对胃粘膜保护作用，导致胃粘膜损伤和炎症。与之联合应用的Hp则含有大量的尿素酶，可分解尿素产生氨气，并分泌产生细胞毒素，引起细胞损伤，致使胃粘膜及细胞完整性受损。同时，Hp可分泌磷酯酶A和G，削弱细胞膜磷酯双层结构，明显减少胃粘膜GAM的含量，降低胃粘膜PGE2和SS的含量，削弱胃粘液屏障，可使胃粘膜环境的损伤进一步加重，致使病变持续存在。
采用消炎痛、Hp联合应用的方法复制的胃炎小鼠模型，其病理变化持续、稳定，符合胃炎的临床表现。造模过程操作简单，实验条件要求较低，复制周期短，成功率高，维持时间长。诱发小鼠胃炎发生同时又不至于使其过早死亡，是支持实验观察的全过程、实验标本的采集和后续实验研究的较佳选择。
参考文献
[1]LeeA，Rourke Jo，Corazon M，et al.AtropHic gastric changes in both Helicobacter felis.Introducing the Sydney strain[J].Gastroenterology，1997，112：1386-1397.