舒血宁注射液对COPD患者血液HMGB1及血清C反应蛋白含量的影响
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【摘要】目的：观察舒血宁注射液对copd患者血液高迁移率族蛋白B1（high mobility group protein box-1，hmgb1）水平、血清脂质过氧化反应程度及C反应蛋白(Creactive protein，CRP)含量的影响。方法：将23例COPD患者随机分为对照组11例和治疗组12例，对照组给予COPD常规治疗，治疗组在此基础上给予舒血宁注射液20 ml稀释后静脉注射，每天1次，共21天，另选10例正常志愿者为正常组。观察治疗前后患者肺功能变化，免疫印迹法（WB）、酶联免疫吸附法和比色法检测外周血液HMGB1、血清CRP含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性、丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量。结果：治疗组肺功能较治疗前有显著改善，较对照组明显改善，治疗组患者血液HMGB1及CRP水平较对照组显著降低，血清脂质过氧化水平显著降低。结论：舒血宁注射液可改善COPD患者肺通气功能，降低血液HMGB1水平及血清CRP和脂质过氧化水平。
【关键词】舒血宁；慢性阻塞性肺疾病；高迁移率族蛋白B1；C反应蛋白；脂质过氧化
文章编号：1009-5519（2008）01-0017-03 中图分类号：R5 文献标识码：A
Effect of shuxuening parenteral solution on the changes of HMGB1 and C response protein in the blood of COPD patients
LI Ying1，Dai Xiao-tian2
（1.Department of Internal Medicine Ⅱ，Chinese Medicine Hospital of Pixian，Sichuan 611730，China；2.Department of Respiratory，Southwest Hospital，The Third Military Medical University，Chongqing 400038，China）
【Abstract】Objective：To investigate the effect of shuxuening parenteral solution on the changes of HMGB1 and C response protein and lipid peroxidation in the blood of COPD patients. Methods：23 COPD patients were divided into 2 groups at random，11 in the control group and 12 in the experimental group. Patients in the control group received COPD routine treatment. Patients in the experiment group were given shuxuening parenteral solution in addition to COPD routine treatment. 21 days were one treatment course. 10 healthy people were included in the normal control group.The pulmonary function and the level of HMGB1，CRP and lipid peroxidation in the blood were detected. Results：The pulmonary function of patients in the experimental group became better than that in the control group. Compared with the control group the content of HMGB1 in the blood and CRP in the serum decreased significantly in the experimental group,the content of lipid peroxidation in the serum decreased too.Conclusion：The usage of shuxuening parenteral solution can improve pulmonary ventilation function and decrease the level of HMGB1 in the blood，CRP and lipid peroxidation in the serum of COPD patients.
【Key words】Shuxuening parenteral solution；COPD；HMGB1；CRP；Lipid peroxidation
慢性阻塞性肺病（Chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一种危害老年患者的严重疾病[1]，呈进行性发展，与肺部组织对有害气体或有害颗粒的异常炎症反应有关，最终导致患者肺功能进行性下降，发展成肺心病[2]。高迁移率族蛋白B1（high mobility group protein B1，HMGB1）是目前研究的一种广泛存在于真核细胞核中的非组蛋白，在基因表达调控中起重要作用，特别是作为细胞因子广泛参与炎症反应[3]。本研究观察舒血宁注射液对COPD患者血液HMGB1和血清C反应蛋白（C reactive protein，CRP）及脂质过氧化反应水平的影响。
1 临床资料
1.1 一般资料：23例患者均符合我国《慢性阻塞性肺疾病诊治方案》中的COPD诊断标准，并按就诊顺序随机分为两组。治疗组12例，男8例，女4例，年龄（56.8±5.1）岁，病程（9.3±2.3）年，其中伴高黏滞血症患者8例占66.7％（8/12）；对照组11例，男7例，女4例，年龄（55.7±5.9）岁，病程（8.9±2.1）年，其中伴高黏滞血症患者7例占63.6％（7/11）。两组患者在性别、年龄、病程、伴高黏滞血症比例上无显著性差异。另选10例门诊查体健康自愿者为正常组。
1.2 治疗方法：两组均予COPD常规治疗。去除病因、抗感染、康复锻炼疗法等，具有呼吸困难症状者应用β2受体激动剂或茶碱制剂，对支气管舒张试验有反应者给予强的松口服。治疗组在COPD常规治疗基础上给予舒血宁注射液（北京双鹤高科天然药物有限责任公司，国药准字Z11021351，5 ml含总黄酮醇甙4.2 mg、银杏内酯A 0.30 mg）20 ml用5%葡萄糖250 ml稀释静脉注射治疗，每日1次，用21天。
1.3 观察指标
1.3.1 肺功能相关检查：治疗前后均做肺通气功能检查包括用力肺活量（FVC）、第一秒用力呼气量（FEV1）、第一秒用力呼气容积占肺活量的百分率（FEV1%），应用阻抗法通过日产光电6000型多道生理记录仪记录和推算平均肺动脉压（mPAP）。
1.3.2 外周血标本获取：患者晨8时空腹采静脉血，部分全血保存，部分离心取血清，置-20℃冰箱保存待测。
1.3.3 免疫印迹法（WB法）测定血液HMGB1水平：提取全血总蛋白，Lowry法测蛋白含量，1∶1体积与上样缓冲液混合，取20 μl上样。浓缩胶电泳电压为100 V，分离胶电泳电压为130 V，电泳4 h后PVDF膜转印，15 V常温作用20min。PVDF膜5％牛血清白蛋白PBS液封闭1h，然后加入兔抗人抗体HMGB1抗体（1∶1000 Santa Cruz）4℃过夜，TBS洗膜10 min×4，HRP标记山羊抗兔IgG（1∶5000）室温反应1h，化学发光法显色，凝胶分析系统分析条带光密度。
1.3.4 血清CRP含量检测：采用酶联免疫吸附法（ELISA法）测定（试剂盒购自晶美生物工程公司），严格按操作说明书进行。
1.3.5 血清SOD活性、MDA水平测定：采静脉血2.5 ml，采用比色法测定血清中SOD活性和MDA水平，按试剂盒说明书（南京建成生物工程研究所）进行操作。
1.4 统计学处理：所得数据以表示，采用SPSS10.0软件包进行t检验分析。
2 结果
2.1 治疗后肺功能测定结果：治疗组患者 FEV1及FEV1%均显著上升，mPAP显著下降并低于对照组。结果见表1。
2.2 免疫印迹法检测患者血液中HMGB1水平结果：正常组患者血液HMGB1水平较低，对照组患者血液HMGB1水平显著升高，治疗组患者治疗后血液HMGB1水平较对照组显著降低。见图1和表2。
2.3 血清CRP水平测定结果：正常组患者血清CRP水平较低，对照组患者血清CRP水平显著升高，治疗组患者治疗后血清CRP水平较对照组显著降低，见表3。
2.4 血清SOD活性及MDA水平测定结果：COPD患者血清SOD活性显著下降、MDA水平显著上升，治疗组患者治疗后血清SOD活性上升，MDA水平显著下降。见表3。
3 讨论
COPD发病率高，已成为世界性医学问题，随着病情加重、饮食摄入不足及免疫调节能力下降，患者经常容易发生呼吸道疾病和继发性感染，从而引起病情的反复和加重。HMGB1是高迁移率族蛋白超家族成员之一，分子质量小，序列高度保守[4]。近年来发现，HMGB1生物学功能复杂，它可以被分泌到胞质内或胞外，诱导细胞分化，在机体炎症反应中起重要作用[5]。在炎症反应中，坏死组织细胞崩解以及脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和细胞因子TNF-a（tumor necrosis factor a）、白细胞介素1等刺激活化单核/巨噬细胞都可以促进HMGB1释放[6]。释放入血的HMGB1通过内分泌和旁分泌形式作用于单核细胞、内皮细胞等多种细胞，引起一系列炎症因子释放、黏附分子表达及HMGB1进一步释放，导致炎症反应进一步扩大[7]。本实验结果表明，COPD患者血液HMGB1水平显著高于正常人，说明血液HMGB1变化参与了COPD的发生发展，是COPD的发病机制之一，治疗组血液HMGB1水平显著降低，较对照组降低程度大，说明舒血宁注射液治疗对COPD患者具有显著的辅助抗炎作用。
CRP属于结构高度保守的穿透素蛋白家族成员，研究表明，CRP作为炎症标志物与COPD发生发展具有十分密切的关系[8]。CRP浓度升高可以表示COPD炎症发生程度及预后。本研究中血循环中的HMGB1水平和CRP水平均显著升高，均可反映COPD的病况及预后。银杏叶具有重要的药用价值，其主要成分银杏黄酮苷具有降低体循环压力、改善血液流变学、清除氧自由基等广泛的药理学效应，可拮抗血小板活化因子，能降低血黏度，改善血液流动特性，阻止血小板激活因子PAF引起气道炎症和支气管痉挛的炎性递质作用，还具有抗菌消炎的作用，此外还能通过蛋白激酶C信号通道下调肺动脉压，进而改善肺通气功能。治疗组COPD患者肺功能FEV1、FEV1%有明显提高，肺平均动脉压显著下降，提示 舒血宁注射液治疗可以明显改善COPD患者呼吸道症状及肺通气功能，结合患者HMGB1和CRP含量显著下降，可推测其作用和两种炎性因子的变化有显著的关系。有文献报道，RAGE（receptor for advanced glycation end products）是目前已知的HMGB1的高亲和力受体，它是一种跨膜蛋白，能结合多种配体。HMGB1与RAGE在细胞表面结合，激发细胞内p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases）、细胞外信号调节激酶1和2（ERK1/2）、NF-κB等多种信号转导机制，从而使细胞释放其他因子[9]。除RAGE外，TLR2（Toll like receptor 2）和TLR4亦能作为HMGB1的受体，与其相互作用诱导细胞活化。HMGB1介导的免疫应答，能刺激多种细胞合成促炎细胞因子，如TNF-?琢、IL-1、IL-6 、IL-8等[10]，大量的体内试验表明，HMGB1能诱导多个器官系统的免疫应答，将HMGB1注入小鼠脑室内可导致ANF（atrial natriuretic factor，心房钠尿因子）及IL-6表达的升高，小鼠同时表现为摄食量减少，体重下降，该作用与内毒素所致的效应相当。用抗HMGB1抗体能改善内毒素所致的小鼠摄食量减少，体重下降等症状。推测舒血宁注射液治疗COPD机制与阻止以上炎性因子的产生及与受体的结合有关。
COPD多见于中老年人，而老年人代谢率低下，体内各种抗氧化成分减少，且患者多有长期吸烟及反复肺部感染史。感染时中性粒细胞可释放大量自由基，加上烟中含有的自由基使脂类形成脂质过氧化物沉淀，引起自由基含量增加，而自由基又可趋化白细胞活性产生更多的氧自由基，导致病情不断加重[11]。MDA是反映体内氧自由基活性的重要指标，测定MDA可间接反映体内氧自由基的生成速率和脂质过氧反应程度。实验结果显示，治疗组MDA含量低于对照组，证明氧自由基减少，脂质过氧化反应减弱，表明舒血宁注射液治疗可显著减少氧化物的生成，进而改善肺动脉高压，同时改善呼吸功能。也说明常规治疗清除氧自由基的能力有限，而治疗组治疗后，SOD活性提高及MDA水平降低同时，肺功能显著恢复，说明实验组清除自由基、上调抗氧化物酶失衡的作用与肺功能恢复有显著关联作用。
参考文献：
[1] Casaburi R. Combination therapy for exercise intolerance in COPD[J].Thorax，2006，61(7): 551.
[2] Peters MM，Webb KA，Donnell DE. Combined physiological effects of bronchodilators and hyperoxia on exertional dyspnoea in normoxic COPD[J]. Thorax，2006，61(7): 559.
[3] Grasser M，Lentz A，Lichota J，et al.The Arabidopsis genome encodes structurally and functionally diverse HMGB-type proteins [J]. J Mol Biol，2006，358(3)：654.
[4] Mantell LL，Parrish WR，Ulloa L. Hmgb-1 as a therapeutic target for infectious and inflammatory disorders[J]. Shock，2006，25(1)：4.
[5] Hussein MH，Kato T，Sugiura T，et al. Effect of hemoperfusion using polymyxin B-immobilized fiber on IL-6， HMGB-1， and IFN gamma in a neonatal sepsis model[J].Pediatr Res，2005，58(2)：309.
[6] Dai Y，Wong B，Yen YM，et al. Determinants of HMGB proteins re-quired to promote RAG1/2-recombination signal sequence complex assembly and catalysis during V(D) J recombination[J].Mol Cell Biol，2005，25(11)：4413.
[7] Mitkova E，Ugrinova I，Pashev IG，et al.The inhibitory effect of HMGB-1protein ontherepairofcisplatin-damaged DNA is accomplished through the acidic domain[J].Biochemistry，2005，44(15)：5893.
[8] Broekhuizen R，Wouters EF，Creutzberg EC，et al.Raised CRP levels mark metabolic andfunctionalimpairmentinadvancedCOPD[J].Thorax，2006，61(1)：17.
[9] Lindersson EK，Hojrup P，Gai WP，et al. alpha-Synuclein filaments bind the transcriptional regulator HMGB-1[J].Neuroreport，2004，15(18)：2735.
[10] Pallier C，Scaffidi P，Chopineau PS，et al. Association of chromatin proteins high mobility group box (HMGB) 1 and HMGB2 with mi-totic chromosomes[J]. Mol Biol Cell，2003，14(8)： 3414.
[11] Wehlin L，Lofdahl M，Lundahl J，et al. Reduced intracellular oxygen radical production in whole blood leukocytes from COPD patients and asymptomatic smokers[J].Chest，2005，128(4): 2051.
收稿日期：2007-08-14