Folin-Ciocaileu比色法测定刺槐花中的多酚含量

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摘要：目的测定刺槐花中的多酚含量。方法以没食子酸为标准品，用folin-ciocaileu比色法测定刺槐花中的多酚含量。结果标准曲线的回归方程为：y=0.005 7 x―O.003 5(R2=0.999 6)。用比色法测定其稳定性、精密度、重现性、加样回收率，RSD在0.20％～4.67％范围内，刺槐花中多酚含量为1.083％，RSD=-3.2I％。结论用Folin-Ciocaileu比色法测定刺槐花中的多酚含量方法简便、快速、准确可靠。

关键词：刺槐花；总多酚；Folin-Ciocaileu比色法

中图分类号：R282.71

文献标识码：A

文章编号：1672-979X(2010)09-0332-04

刺槐花富含蛋白质、氨基酸、微量元素等营养成分，还含有芦丁、木犀草素、槲皮素、酚酸等多酚类成分。多酚具有清除自由基、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射，以及保护心血管系统等重要的生物活性。刺槐花是主要野生食用花之一，已成为当前功能性食品研究的热点。

我们用乙醇提取了刺槐花中的多酚化合物，以没食子酸为标准品，用Folin-Ciocaileu比色法测定了刺槐花中多酚类物质的含量，为开发利用刺槐花提供了科学依据。

1材料与方法

1.1材料与试剂

刺槐花(山东师范大学校园)；没食子酸标准品(中国药品生物制品检定所)；乙醇、钨酸钠、钼酸钠、硫酸锂、无水碳酸钠、磷酸、溴等均为分析纯。

1.2仪器与设备

UV-17000紫外分光光度计(岛津)；恒温水浴锅(上海森信)：电子天平(北京赛多利斯)；移液器(1 000ul，200ul)；JY92-2D超声波细胞粉碎机(宁波新芝)

1.3方法

1.3.1 Folin-Ciocaileu显色剂的配制　参照文献。称取50 g钨酸钠和12.5 g钼酸钠置入1 L磨口圆底烧瓶中，用350 mL蒸馏水溶解，缓慢加A.85％磷酸25 mL，浓盐酸50 mL，充分混匀，放入数粒玻璃珠，连接回流冷凝装置，文火回流10 h(回流不一定连续)。用25 mL蒸馏水冲洗冷凝管上的附着物，拆开冷凝管后加入75 g无水硫酸锂和几滴溴水(边加边振摇)，开口继续加热沸腾15 min，直至溴水完全挥发，终点颜色为黄绿色。冷却后定容至500 mL，过滤，储存于棕色瓶中，放入冰箱保存备用。

1.3.2标准贮备液的配制精密称取干燥的没食子酸标准品0.014 g，蒸馏水溶解并定容至100 mL，浓度为140ug／mL。

1.3.3标准曲线的建x,rt61　精密吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL 140~tg／mL没食子酸标准贮备溶液，分别定容于10 mL量瓶内。然后从各溶液中吸取1 mLJJll／N.25 mL量瓶内，先加10 mL蒸馏水摇匀，再加1.5 mL Folin-Ciocaileu试剂，充分摇匀30 s后，加入10％碳酸钠溶液6 mL(前后时间间隔不应超过8 min)，混匀，加水定容，再混匀，然后30℃下避光放置反应2 h，在765 nm处测吸光度。以吸光度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。刺槐花样品中的多酚含量以没食子酸标准品计。

1.3.4样品溶液的制备取鲜槐花2 g，用60％乙醇40 mL，35℃，110w，超声提取30min~,3次，合并提取液，过滤，待测。

1.3.5样品的测定用移液管精确量取样品溶液1.0 mL置入25 mL量瓶中，先加lO mL蒸馏水，摇匀，再加Folin-Ciocaileu试剂1.5 mL，充分摇匀30 s后，加入10％碳酸钠溶液6 mL，混匀，加水定容，继续摇匀，然后30℃下避光放置反应2 h，在765 nip.波长处测吸光度，代入回归方程，得多酚浓度(ug／mL)。

1.3.6多酚含量的测定

1.3.7分析方法的评价稳定性实验：取刺槐花酚类提取样品液按上述处理及测定方法，分别在样品液与显色剂反应完全0.5，1，2，3，4 h后测吸光度，以评价该比色分析方法在一定时间内的稳定性。

重现性实验：取刺槐花样品5份，依上述制备及分析方法，分别测定其多酚含量，并计算测定结果的相对标准偏差(RSD)，以评价该方法的重现性。

精密度实验：用Folin―Ciocaileu比色法测定同一刺槐酚类样品液5次，计算测定结果的RSD，以评价该方法的精密度。

加样回收率实验：刺槐酚类样品液中加入不同量的没食子酸标准贮备液，分别测定其多酚含量，并计算回收率和RSD，以评价该方法的准确度和可靠性。

2结果与分析

2.1标准曲线的建立

没食子酸在0～70ug／mL浓度范围内与其吸光度值呈良好的线性关系，在此范围内线性回归方程为y=0.0057x-0.003 5(R2=0.999 6)。

2.2比色方法的稳定性、重现性和精密度

验证Folin―Ciocaileu比色法测定刺槐花中酚类含量的稳定性、重现性和精密度，结果见表1。

由表1可见，该方法在体系反应完全后放置4 h内测定的吸光度值变化较小，RSD=0.42％，表明方法稳定性较好；重现性实验测得5个不同刺槐样品中多酚含量值较接近，RSD=0.20％，表明该方法重现性较好：精密度实验，同一样品5次测定的多酚含量值相差较小，RSD=0.74％，表明该方法精密度较高，完全能满足样品分析的要求。

2.3加样回收率实验

按照1.3.6的方法进行加样回收率的测定，结果见表2。

由表2可见，6次加样回收实验的最低回收率为94.2％，最高回收率为107.3％，平均回收率为99.73％，RSD=4.67％。表明此法有很高的准确性和可靠性。

2.4刺槐花中多酚的含量

精密称取2 g鲜槐花6份，按1.3.4方法制备供试品溶液，精密量取1.0 mL，按1.3.5方法操作，并设空白管。为消除供试品溶液本身颜色的干扰，同时制备不加显色剂的对照管。于765 m波长处测定吸光度。结果见表3。

结果表明，本方法测得的刺槐花中多酚含量平均为1.083％，RSD=3.21％。

3　结论

以刺槐花为原料，以没食子酸为标准品，建立了Folin-Ciocaileu比色法测定刺槐花中多酚含量的方法。显色后溶液在4 h内稳定，标准曲线在0～70ug／mL范围内线性关系良好，方法的精密度高，重现性好，加样平均回收率为99.73％，RSD=4.67％。测得刺槐花60％乙醇提取物中多酚平均含量为1.083％，RSD=3.21％。方法操作简便，可用于测定刺槐花中多酚的含量。