不同形态、用量培养基对黄皮洋葱试管苗生长的影响
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摘 要：以黄皮洋葱鳞茎为试材，以MS+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L为基础，White+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基为对照，研究了培养基的形态（固态和液态）及用量对洋葱试管苗生长的影响。试验结果表明，MS液体培养基优于MS固体培养基，其用量以50 mL三角瓶中放15 mL培养液最佳。
关键词：洋葱；培养基；试管苗
中图分类号：S633.2 文献标识码：A 文章编号：1001-3547（2013）16-0041-03
洋葱学名Allium cepa L.，别名葱头、圆葱、胡葱、玉葱，是百合科葱属草本植物，具有极高的营养价值和药用价值，它不仅能够改善食物风味，而且具有杀菌、抗肿瘤、降血压、抗血栓及动脉硬化等生理功能，耐寒，喜温，适应性强，产量高，易栽培，耐贮运且供应期长，对调节淡季蔬菜供应具有重要作用[1]。茎尖培养是进行洋葱脱毒、生产无毒种苗、恢复优良种性的有效手段[2，3]。姜璐琰等[4]研究了洋葱胚状体的诱导及再生系统的建立。徐启江等[5]对分蘖洋葱试管鳞茎微繁技术进行了研究。但对洋葱鳞茎快繁环节中培养基形态和用量的研究鲜有报道，特进行了此次试验，以期获得洋葱鳞茎的最佳培养体系。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验材料为黄皮洋葱鳞茎，购自甘肃省张掖市甘州区某蔬菜超市；50 mL三角瓶。
1.2 试验处理
设3组试验，每组试验设4个处理。第一组MS固体培养基不同用量试验，处理A1为50 mL三角瓶放入培养基10 mL，处理B1为15 mL，处理C1为20 mL，处理D1为25 mL。第二组MS液体培养基不同用量试验，处理A2为50 mL三角瓶放入培养液10 mL，处理B2为15 mL，处理C2为20 mL，处理D2为25 mL。第三组White固体培养基不同用量试验，处理A3为50 mL三角瓶放入培养基10 mL，处理B3为15 mL，处理C3为20 mL，处理D3为25 mL。
1.3 试验方法
调整培养基pH值至5.8，消毒灭菌后于无菌条件下用茎盘切割方式切取0.3～0.5 mm洋葱鳞茎为外植体，接种到MS+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基（固体或液体）和White+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基（固体）上，鳞茎每一处理接种10瓶，每瓶接种6个切段，然后放置在相同条件下培养。培养10、20、30 d时分别随机抽取每处理5瓶30株调查，观察植株生长发育动态，记载叶片数、茎节数、株高、发根数、小苗长势、叶片状态、小苗状态等。
①无菌材料的获得、接种 剥去洋葱葱皮，用自来水冲洗10 min左右，采用茎盘切割的方式切取外层鳞茎上半部0.3～0.5 mm为外植体，将外植体放入75%酒精消毒灭菌30 s，再放入0.1% HgCl2消毒灭菌10 min，用无菌水认真冲洗4次。在超净工作台接种到培养基上，进行无菌培养。
②培养条件 培养温度（25±2）℃，光照强度
2 000～3 000 lx，光照培养16 h，暗培养8 h。
2 结果与分析
2.1 MS固体培养基不同用量对试管苗生长的影响
由图1可知，MS固体培养基不同用量对洋葱试管苗的生长影响比较明显，鳞茎在MS固体培养基上前期生长无差异，叶片数、茎节数、株高、发根数都基本一致；后期试管苗差异很大，从10～20 mL范围内试管苗叶片数、茎节数、株高、发根数都随培养基用量的增加而增加，20 mL时达到最大值，
20 mL以后试管苗生长无明显变化。表明MS固体培养基用量过多会超过洋葱试管苗生长所需的营养而造成浪费。由此可见，50 mL三角瓶放入20 mL是MS固体培养基的最佳用量。
2.2 MS液体培养基不同用量对试管苗生长的影响
由图2可知，随着培养液用量的增加，洋葱试管苗叶片数、茎节数、发根数、株高先增大后逐渐减小，至15 mL时洋葱试管苗叶片数、茎节数、发根数、株高达到最大值；20 mL以上时洋葱试管苗的各项指标逐渐减小。表明液体培养基用量过多会使接种的切段浸没于其中，因缺氧而不易发芽，导致试管苗生长势弱。因此，50 mL三角瓶放入15 mL是MS液体培养基的最佳用量。
2.3 White固体培养基不同用量对试管苗生长的影响
由图3可知，鳞茎在White固体培养基上生长差异较小，随着培养基用量的增加，叶片数、茎节数、株高、发根数都随着培养基用量的增加而增加，25 mL时达到最大值。White固体培养基为低浓度盐培养基，其营养元素与前两组基本相同，pH值和培养条件也相同，至25 mL时洋葱试管苗的各项指标达最大值，这与营养元素的浓度有关，因此，50 mL三角瓶放入25 mL是White固体培养基的最佳用量。
由图4可知，B2处理（MS液体培养基）明显优于C1处理（MS固体培养基）和D3处理（White固体培养基），其表现在叶片数多、植株高、发根数多、茎粗壮、长势强、苗壮、发芽生长快。同时处理B2培养成苗（达到4～6片有效叶的植株称为成苗株）时间要比处理C1和处理D3提早5 d左右。因此50 mL三角瓶放入15 mL MS液体培养液是洋葱鳞茎快繁的最佳用量及方式。
3 小结与讨论
Phillips等[6]在BDS+毒莠定0.75 mg/L+BA
2 mg/L固体培养基上诱导出愈伤组织和体细胞胚。Fridborg[7]在MS+NAA 1 mg/L+KT 1.5 mg/L固体培养基上把洋葱鳞片直接诱导成芽，此试验与本试验的MS固体培养基相同，均能获得小植株；不同之处是培养基激素种类及其配比和外植体不同，表现为对洋葱试管苗生长的影响效果不同。徐启江等[5]对分蘖洋葱试管鳞茎微繁技术进行研究，以洋葱鳞茎茎尖为外植体，以25 mL MS+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L固体培养基为起始培养基，培养40 d后获得试管苗，再诱导获得微鳞茎，此试验与本试验的不同之处在于培养基的形态和外植体的选取，本试验选用洋葱外层鳞茎上半部，可能由于不同形态培养基对洋葱试管苗的生长影响不同。本试验得出液体培养基有利于洋葱试管苗的生长。
综上所述，在洋葱鳞茎快繁阶段，MS液体培养基优于MS固体培养基，其用量以50 mL三角瓶中放15 mL培养液最佳。但洋葱鳞茎快繁过程中易产生遗传性变异，特别是染色体倍性的变化有待进一步研究。
参考文献
[1] 郭玉华，李钰金，殷诗强.洋葱食品的研究进展[J].中国调味品，2009，34（11）：35-37.
[2] 徐启江，陈典，张云修.分蘖洋葱茎尖培养脱毒苗技术研究[J].北农林科技大学学报：自然科学版，2002（2）：6-11.
[3] 陈典，徐启江.分蘖洋葱茎尖愈伤组织诱导及植株再生[J].园艺学报，2001，28（4）：359-360.
[4] 姜璐琰，杨建平，张松，等.洋葱组织培养研究进展[J].山东农业大学学报：自然科学版，2003，34（2）：299-302.
[5] 徐启江，杨守志，池春玉，等.分蘖洋葱试管鳞茎微繁技术研究[J].植物学学报，2003，20（1）：80-84.
[6] Phillips G C， Luyten J. Effects of picloram and other auxious ononion tissue cultures[J]. J Amer Soc Hort Sci， 1987， 108（6）： 948-950.
[7] Fridborg G. Growth and organogenesis in tissue cultures of Allium cepa var. proliferum[J]. Physiologia Plantarum， 1971， 25（3）： 436-440.