通冠胶囊治疗冠心病作用机制的实验研究
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郑连冬 张 丽
摘 要：目的：通过动物实验观察通冠胶囊对实验性兔急性心肌缺血内皮功能及血脂的影响，以期阐明该方药治疗冠心病的药效学机制。方法：实验动物随机分为5组，通过结扎麻醉兔的冠状动脉左前降支中段，造成急性心肌缺血模型。采用比色法测定NO、NOS，直接法测定LDL－C。结果：急性心肌缺血时。血清NO、NOS水平下降，LDL明显升高。通冠胶囊可以提高血清NO、NOS浓度，降低LDL-C水平。结论：通冠胶囊有提高血清NO、NOS。拮抗LDL―C的作用，保护血管内皮细胞，降低血脂，改善心肌缺血。从而达到防治冠心痛的作用。
关键词：通冠胶囊；心肌缺血；一氧化氮(NO)；一氧化氮合成酶(NOS)；低密度脂蛋白(LDL)
现代医学的冠心病是指冠状动脉粥样硬化使血管腔狭窄或闭塞导致心肌缺血缺氧而引起的心脏病以及冠状动脉功能性改变(痉挛)。是心血管内科最常见的多发病，在我国，随着人民生活水平的提高，冠心病的发病率呈逐年增高趋势，成为死亡的重要原因之一。中医学认为，冠心病属“胸痹”、“心痛”等范畴，病机总属本虚标实，本虚为阴阳气血的亏虚。标实以血瘀痰阻为多见，均可以导致气血运行失畅而发胸痹证。中医治疗主要有活血化瘀、泄浊豁痰、温阳补气、益气养阴等法。临床以气虚血瘀为多见，治则以益气活血，化瘀通络为主。通冠胶囊即根据以上治则，基于临床验方经反复实践、筛选化裁而来，其颗粒剂已临床应用3年经378例冠心病心绞痛中医辨证为气虚血瘀型胸痹证患者观察，疗效显著，而且无毒无副作甩。
研究发现冠脉急性缺血的发病与病理形成过程与内皮功能障碍和脂质沉积关系密切，本实验在此基础上，结扎兔冠状动脉，造成急性心肌缺血模型，测定血浆一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)和低密度脂蛋白(LDL)水平，旨在观察通冠胶囊对冠心病急性心肌缺血内皮功能及血脂的影响，探讨该药治疗冠心病的作用机制，为中药防治冠心病提供实验资料和理论依据。现将结果报道如下。
1 实验材料
1．1 动物健康新西兰大耳白兔，雌雄各半，共40只，体重(2．5±0.1)kg。由辽宁中医药大学动物试验中心提供。
1．2 药物①中药：通冠胶囊组成及制备方法：赤芍、川芎、当归、红花、鸡血藤、党参、元胡、地龙等。由江阴天江药业有限公司提供用喷雾干燥法制成胶囊，温水口服。②西药：合心爽由天津田边制药厂提供，批号：0512099。
1．3 试剂 NO、NOS试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。LDL－C试剂盒由上海风汇医学科技有限公司生产。
1．4 仪器 6511型心电图记录仪，日本光电公司。Hemens Bifugezs型低温离心机。德国海尔公司生产。SANYO MDF-382E超低温冰箱，日本三洋公司生产。日立7170型自动分析仪，日立(苏州)有限公司。
2 实验方法
2．1分组实验前将动物常规饲养1周，然后随机分为5组：①空白对照组8只；②模型心肌缺血组8只；③通冠胶囊低剂量组8只；④通冠胶囊高剂量组8只；⑤西药组8只。
2．2给药方法给药量根据实验动物与人体体表面积换算表换算。①空白对照组，用生理盐水3mL/kg不结扎不灌药；②模型心肌缺血组，用生理盐水3mL/kg，结扎不灌药；③通冠胶囊低剂量组，相当于生药量9.03g/kg；④通冠胶囊高剂量组，相当于生药量18.06g/Kg；⑤西药组：合心爽6.3mg/Kg，上述药物在试验前用生理盐水制成等体积(3mL/kg)混悬液备用，然后对动物进行灌胃给药，中药组、西药组连续给药5天，于第6天，对动物进行造模，复制急性心肌缺血模型。
2．3造模方法进行：取家兔称重，用20％乌拉坦腹腔麻醉后仰位固定于手术台，将针状电极插入四肢皮下，并调节心电图灵敏度至1mV=15mm，纸速为50mm/s，记录结扎前5min导联心电图，然后剪毛、消毒、铺巾，无菌操作，(必要时可用利多卡因局麻)，在胸骨左缘旁纵行切开3根肋软骨，用小开胸器撑开胸腔切口，可见波动之心脏，剪开心包膜，暴露心脏，用止血钳将左心耳提起，用持针器将小弯针在左冠状动脉前降支起始下3-5mm处穿一丝线，结扎之。正常对照组不结扎，检查无出血，逐层关闭胸腔，造成急性心肌缺血，记录结扎后5min心电图，并于结扎后30min抽血，离心，取血清，冰冻，备用，以作NO、NOS、LDL-C测定。
2．4观察指标①血清NO的测定：硝酸还原酶比色法，具体操作如下：取0.1mL双蒸水于空白管(B)中，0.1mLKNO3标准液于标准管(S)中，0.1mL血清于样品管(U)中，加试剂1:0.1mL，试剂2:0.1mL，混匀，37℃60min，试剂3:0.5mL，试剂4:0.5mL，置室温10min，530nm波长，0.5cm比色杯，B管调零，测定样品管和标准管消光值(OD)。计算公式：一氧化氮(gmol/L)=(样品管OD/标准管OD)×100。
②血清NOS的测定：化学比色法，具体操作如表1。
540nm波长，0.5cm光径杯，空白管凋零，测定消光度值。
酶活性意义：每毫克组织蛋白每分钟生成的1nmol NO为1个活性单位。
计算公式：NOS(U/mg蛋白质)=(样品消光值/呈色物纳摩尔消光系数)×(总体积/样品体积)×(1/光径×时间)÷(蛋白mg/mL数×103)=(样品消光值/24.5×10-6)×(1.2/0.05)×(1/0.5×15)÷(蛋白质mg/mL数×103)=130612×样品消光值÷(蛋白mg/mL数×103)。
③血清LDL-c测定：直接法，具体操作如下。加样品3.0μL，R1300μL，置37℃5min，加入R2100μL，在置37℃5min，于主波长546nm、副波长660nto测定吸光度。
R1组成：表面活性剂1、4氨基安替比林、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、GOOD'S0R2组成：表面活性剂2、DSBmT/GOOD'S缓冲液。
计算公式：LDL-C(mg/dL)=样品吸光度×标准液浓度(mg/dL)/标准液吸光度。
2．5 数据处理 结果用x±s表示，显著性比较采用SPSS11.5统计软件包，采用t检验。
3 结果与分析
3．1实验兔NO变化见表2。
本组实验结果如表1所示：①模型心肌缺血组与空白对照组比较有显著性差异，P＜0.01，提示缺血心肌存在内皮功能失调(NO水平下降)的病理现象。②低剂量和高剂量中药组与模型组比较均有显著性差异，*P＜0.001，提示通冠胶囊能明显提高急性心肌缺血家兔血清NO水平。③高剂量和低剂量中药组比较有显著性差异，P＜0.05，提示随着药物剂量的增加药效逐渐增强。④西药组与模型组比较有显著性差异，*P＜0.001，提示合心爽能明显提高急性心肌缺血家兔血清NO水平。⑤中药与西药组之间无显著性差异，P＞0.05，提示通冠胶囊与西药合心爽作用相似，二者无显著差别。
3．2实验兔NOS变化见表3。
本组实验结果如表2所示：①模型心肌缺血组与空白对照组比较有显著性差别，P＜0.05，提示缺血心肌存在内皮功能失调(NOS水平下降)的病理现象。②低剂量和高剂量中药组与模型组比较均有显著性差异，**P＜0.001，提示通冠胶囊能明显提高急性心肌缺血家兔血清NOS水平。③高剂量和低剂量中药组比较有显著性差异，P＜0.05，提示随着药物剂量的增加药效逐渐增强。④西药组与模型组比较有显著性差异，*P＜0.01，提示合心爽能明显提高急性心肌缺血家兔血清NOS水平。⑤中药与西药组之间无显著性差异，P＞0.05，提示通冠胶囊与西药合心爽作用相似，二者无显著差别。
3．3实验兔血清LDL-C变化见表4。
本组实验结果如表3所示：①模型心肌缺血组与空白对照组比较有显著性差别，P＜0.05，提示缺血心肌存在脂质代谢失调(LDL-C水平升高)的病理现象。②低剂量和高剂量中药组与模型组比较均有显著性差异，*P＜0.05，提示通冠胶囊能明显降低急性心肌缺血家兔血清LDL-c水平。③高剂量和低剂量中药组比较有显著性差异，P＜0.05，提示随着药物剂量的增加药效逐渐增强。④西药组与模型组比较无显著性差异，P＞0.05，提示合心爽不能降低急性心肌缺血家兔血清LDL-C水平。
3．4分析此结果表明中药通冠胶囊能提高急性心肌缺血家兔血浆NO、NOS水平，降低LDL-c水平，保护血管内皮细胞，降低血脂，改善心肌缺血，从而达到防治冠心病的作用。