茜草与茜草炭对大鼠急性血瘀模型的影响比较研究
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇茜草与茜草炭对大鼠急性血瘀模型的影响比较研究范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
摘要： 目的：观察茜草与茜草炭对急性血瘀模型大鼠的影响，揭示两者在功效方面的异同。方法：皮下注射肾上腺素加冰水浸泡复制大鼠急性血瘀模型，以云南白药为阳性对照，连续给药7 d，利用此模型观察茜草与茜草炭高、中、低各3个剂量组对血液流变学、凝血酶活性及血小板系统的影响。结果：茜草能够显著改善不同切变率下血瘀模型大鼠的全血黏度及血浆黏度，在止血方面体现了一定的双向调节，对由ADP诱导的血小板聚集率表现出一定的影响，但弱于茜草炭。茜草炭主要通过影响内、外源性凝血酶以及纤维蛋白原来达到促凝效果，能明显提高血瘀模型大鼠血小板聚集率（P
关键词： 茜草；茜草炭；大鼠急性血瘀模型
[收稿日期] 2013-06-19
[基金项目] 国家中医药管理局中医药行业科研专项（20110700708）；2015年版《中国药典》项目；江苏高校优势学科建设工程项目（ysxk-2010）
[通信作者] *丁安伟，教授，博士生导师，Tel：（025）85811523，E-mail：
[作者简介] 单鸣秋，副教授，Tel：（025）85811519，E-mail：
茜草为茜草科植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根及根茎。本品味苦性寒，具有凉血，祛瘀，止血，通经等功效，用于吐血，衄血，崩漏，外伤出血，瘀阻经闭，关节痹痛，跌扑肿痛等[1]。炒炭后寒性降低，性变收涩，止血作用增强，也是组成传统止血中药“十灰散”的主要药味之一。从两者的性味、功效、主治等方面来看，茜草偏于化瘀止血，而茜草炭则长于收涩止血，可以称其为“生行熟止”。但是，由于茜草与茜草炭均具有良好的止血作用，再加上对两者功效异同的认识不清和处方应付不明确，临床上存在很多混用的现象，在一定程度上影响了它们各自疗效的发挥。为了规范茜草、茜草炭在临床上的合理应用，本实验复制了急性大鼠血瘀模型，研究比较了茜草与茜草炭对模型血液流变学、凝血酶活性和血小板系统的不同影响，阐述对凝血不同途径的影响，来进一步说明茜草、茜草炭在活血、止血方面的异同，以期合理地解释茜草“生行熟止”的炮制理论。
1 材料
1.1 动物 SD雌性、雄性大鼠各半，体重（200±20） g，由南通大学实验动物中心提供，合格证号SCXK（苏）2008-0010。
1.2 药品与试剂 茜草购自安徽丰原铜陵中药饮片有限公司，经南京中医药大学吴启南教授鉴定为茜草科植物茜草R. cordifolia的干燥根和根茎。茜草炭为南京中医药大学丁安伟教授将上述茜草饮片按照2010年版《中国药典》（一部）有关规定炒制而成。云南白药（云南白药集团股份有限公司，批号ZI11023）；盐酸肾上腺素注射液（上海禾丰制药有限公司，批号H31021062）；羧甲基纤维素钠（CMC-Na，国药集团化学试剂有限公司，批号F20101222）；枸橼酸钠（国药集团化学试剂有限公司，批号F20110506）；乙二胺四乙酸钠（EDTA，国药集团化学试剂有限公司，批号T20090224）；水合氯醛（天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20080329）；甲醛（国药集团化学试剂有限公司，批号20110517）。
试剂盒：凝血酶原时间（PT，批号STY20101-56B）、凝血酶时间（TT，批号STG20301-35A）、活化部分凝血活酶时间（APTT，批号ST20201-58）、血浆纤维蛋白原（FIB，批号STY20401-42），均为北京世帝科学仪器公司生产。ADP（北京中勤世帝科学仪器公司，ADP粉剂1瓶，ADP缓冲液10 mL/瓶），ELISA试剂盒：血栓素（TXB2，批号CK-E30421R）和6-酮-前列腺素（6-keto-PGF1α，批号CK-E30144R）均购自南京建成生物科技有限公司。
1.3 仪器 血小板聚集凝血因子分析仪（北京世帝科学仪器公司，LG-PABER）；血液流变仪（北京中勤世帝科学仪器有限公司）；离心机（上海安亭科学仪器厂）。
1.4 供试品的制备 用0.5%CMC-Na溶液将云南白药粉末、茜草粉末与茜草炭粉末研匀并稀释至实验所需浓度。
2 方法与结果
2.1 大鼠分组及给药方法 取SD大鼠，雌、雄性各半，90只，体重（200±20） g，随机分为9组，每组10只，分为空白对照组、模型对照组、云南白药组（0.36 g・kg-1）、茜草高、中、低剂量组（5，2.5，1.25 g・kg-1）、茜草炭高、中、低剂量组（5，2.5，1.25 g・kg-1）。对照组与模型组灌胃0.5%CMC-Na溶液，其余各组灌胃等体积的相应药物，每日2次，连续7 d。
2.2 血瘀大鼠模型的复制[2] 第7天给药后禁食，对照组于背部两侧皮下注射等量生理盐水，其余各组背部皮下注射盐酸肾上腺素，注射剂量为1 mL・kg-1，共2次，中间间隔4 h，并在第1次皮下注射4 h后将大鼠浸入0～2 ℃冰水浴5 min，复制急性血瘀大鼠模型。
2.3 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件对数据进行双样本t检验及方差分析，实验数据以±s表示，P
2.4 血液流变学指标及内、外源性凝血指标的测定 第8天，各组正常给药40 min后，将各组大鼠以10%水合氯醛麻醉，颈动脉取血，3.8%枸橼酸钠1∶9抗凝，1 mL全血分装测定全血高、中、低切黏度，剩余全血以3 500 r・min-1离心10 min，取血浆，测定血浆黏度及内外源性凝血功能指标（TT，APTT，PT，FIB）。TT，APTT，PT，FIB各指标按照试剂盒的操作步骤进行测定。血液流变指标按血液流变仪操作流程进行测定。
与对照组相比，模型组全血黏度和血浆黏度均升高（P
茜草低、中剂量组，茜草炭低、中、高剂量组能作用于内外源性共同途径而显著缩短模型大鼠TT（P
2.5 血小板聚集率及血浆中TXB2，6-keto-PGF1α含量的测定 大鼠采血结束后，将取得的全血以800 r・min-1离心10 min，取上层液即为富血小板血浆（PRP）；余下部分再以3 500 r・min-1离心10 min，取上清液即为贫血小板血浆（PPP）[3]。按Born比浊法[4]测定血小板最大聚集率。将取得的全血以3 500 r・min-1离心10 min，分离血浆，于-20 ℃保存待测。ELISA法测定TXB2，6-keto-PGF1α的含量。
茜草高、中剂量组能显著提高由ADP诱导血瘀模型大鼠的血小板聚集率，而茜草炭高、中、低剂量组均能显著提高由ADP诱导血瘀模型大鼠的血小板聚集率（P
3 讨论
血液流变学[5-6]是专门研究血液流动及血球变形规律的一门新型的医学分析学科。全血黏度和血浆黏度是反映了血液最基本的流变特性，测定这些指标对疾病的发生、发展及预后都有重要的参考价值。模型组与空白相比，高、中、低切变率下全血黏度、血浆黏度都有不同程度的增加，能够反映红细胞有一定程度的聚集性和变形性的改变。茜草能够显著改善不同切变率下血瘀模型大鼠的全血黏度及血浆黏度，说明其充分发挥了活血化瘀的作用，能够显著地改善血瘀模型大鼠异常的血液流变性。
本实验选择了PT，TT，APTT，FIB 4个指标来研究茜草与茜草炭对凝血系统的作用。其中PT是外源性凝血途径的常用实验指标，TT反映了内、外源凝血途径的共同途径，APTT主要反映内源性凝血因子的活性和含量的变化，FIB主要反映是否有足够纤维蛋白原来生成纤维蛋白。茜草炭可以显著缩短PT，TT，APTT，并显著增加FIB的含量；茜草能够显著延长PT，中剂量组还能够缩短TT，APTT，FIB的含量显著增加，说明茜草炭主要通过影响内、外源性凝血酶以及纤维蛋白原来达到促凝效果，而茜草在止血方面体现了一定的双向调节，这与其用于化瘀止血，炒炭后主要用于止血，即“生行熟止”应当有一定的内在联系。
本实验通过对由ADP诱导的血小板聚集率的测定，探讨茜草与茜草炭从血小板途径对止血作用的意义。ADP对于内源性凝血有着尤其重要的作用。茜草炭能明显提高血瘀模型大鼠血小板聚集率，进一步说明其通过多种凝血途径来发挥其止血作用。茜草对由ADP诱导的血小板聚集率表现出一定的影响，但弱于茜草炭，这体现了茜草既能化瘀，又能止血的功效。
生理情况下，TXA2及PGI2的产生与释放处于动态平衡，前者主要是由血小板微粒体合成、释放，具有强烈促进血管收缩和血小板聚集的作用，而后者则是由血管内皮细胞合成、释放，具有抗血小板聚集和舒张血管的功能。由于TXA2与PGI2不稳定，因而绝大多数情况下以测定其代谢产物TXB2和6-keto-PGF1α的含量来反映体内TXA2及PGI2的水平[4]。血瘀模型大鼠血浆中TXB2的含量急剧升高，同时6-keto-PGF1α的含量明显降低，符合血瘀模型的特征。茜草各剂量组均可显著降低TXB2的含量，升高6-keto-PGF1α的含量，以此来发挥化瘀作用。茜草炭虽然也能够显著降低TXB2的含量和升高6-keto-PGF1α的含量，但趋势不如茜草明显。说明茜草炭主要发挥其止血作用，进一步论证了茜草、茜草炭“生行熟止”的传统炮制理论。
本实验通过对大鼠急性血瘀模型中多个与凝血机制有关的因子或指标的测定，从血液流变学、血小板系统及内、外源性凝血系统的角度，对茜草、茜草炭“生行熟止”的传统炮制理论做出了合理的解释，为两者在临床上的生熟异用提供了一定的依据。但是，对于两者不同功效的物质基础，物质基础与功效的相关性，这些物质基础对相应功效的贡献度，以及在炒炭前后物质基础的改变转化与“生行熟止”的相关性等还需进一步深入探讨。
[参考文献]
[1] 高学敏.中药学[M].北京： 中国中医药出版社， 2007： 298， 371.
[2] 和岚，蒋文跃，毛腾敏.注射肾上腺素模拟“气滞”复制急、慢性血瘀模型初探[J]. 中国中西医结合杂志， 2004， 24 （3）： 244.
[3] 徐叔云，卞如镰，陈修.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2002：1271.
[4] Born. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal[J]. Nature， 1962， 194（6）： 927.
[5] 李毅，刘壮志.临床血液流变学检测与指标变化[J].黄石理工学院学报，2006，22（1）： 19.
[6] 孙朝晖，李林海，石玉玲，等.血液流变学检测中血浆纤维蛋白原浓度对血浆黏度的影响[J]. 实用医学杂志， 2006， 22（23）： 2798.
Comparative study on effects of Rubiae Radix et Rhizoma and carbonized
Rubiae Radix et Rhizoma on acute blood stasis rat model
SHAN Ming-qiu， CHEN Xing， LI Juan， YU Bin， DING An-wei*
（Jiangsu Provincial Key Laboratory for High Technology Research of Traditional Chinese Medicine Formulae，
Nanjing University of Chinese Medicine， Nanjing 210023， China）
[Abstract] Objective： To observe the effects of Rubiae Radix et Rhizoma （RRR） and carbonized Rubiae Radix et Rhizoma （CRRR） on the acute blood stasis rat model， and reveal their differences in efficacy. Method： The acute blood stasis model was induced by subcutaneously injecting adrenaline hydrochloride and soaking in ice water. Yunnan Baiyao was used as the positive control drug， and administered for consecutively seven days. This model was adopted to observe the effect of high， middle and low dose RRR and CRRR groups on hemorheology， thrombin activity， and blood platelet system. Result： RRR could significantly reduce the whole-blood viscosity and plasma viscosity of blood stasis rats under different shear rates， and showed certain two-way regulating function in hemostasis. It also showed certain effect on ADP-induced platelet aggregation rate， but which was lower than CRRR. CRRR achieved the main hemostatic mechanism by stimulating intrinsic and extrinsic blood coagulation and fibrinogen， and could significantly enhance the platelet aggregation rate of rats in the acute blood stasis model （P
[Key words] Rubiae Radix et Rhizoma； carbonized Rubiae Radix et Rhizoma； acute blood stasis rat model
doi：10.4268/cjcmm20140325