冲和凝胶有效成分的体外透皮行为研究

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[摘要] 冲和凝胶源自古方，可用于糖尿病足的治疗。该实验以芍药苷、蛇床子素为指标，考察冲和凝胶体外透皮特性，探索冲和凝胶透皮机制。实验采用Franz扩散池法，以大鼠腹皮为模型，用HPLC测定。实验筛选了接收液的种类，并比较冲和凝胶、冲和油膏内指标成分的透皮特性，考察药物累积透皮率、皮肤内滞留率以及皮肤外残率。结果显示，乙醇-生理盐水（2∶8）更适于作为接收液；冲和凝胶给药0.5 g，芍药苷、蛇床子素透皮速率分别为78.07，7.08 μg·cm-2·h-1，其24 h累积透过率分别为（31.51±1.33）%，（12.38±1.28）%，皮肤滞留率分别为（0.92±0.45）%，（4.81±1.03）%。蛇床子素能在皮肤中形成贮库。冲和凝胶释药性优于油膏。芍药苷、蛇床子素透皮行为分别符合Weibull方程与Higuchi方程。

[关键词] 冲和凝胶；芍药苷；蛇床子素；透皮吸收

[收稿日期] 2013-03-14

[基金项目] 国家自然科学基金面上项目（81073057）；国家科技重大新药创制专项（2012ZX09103201-046）；北京中医药大学校级课题项目（2011JYB22XS-052）；天津市高校双五科技计划项目（SW20080007）

[通信作者] *杜守颖，教授，博士生导师，主要从事中药新剂型与制剂关键技术研究，Tel：（010）84738615，E-mail：

[作者简介] 王艳明，博士研究生，主要从事中药新制剂研究，E-mail： 冲和膏源于明代陈实功《外科正宗》，具有行气疏风、活血定痛、散瘀消肿、祛冷软坚、祛寒逐湿之功效。其作为治疗脱疽初期的有效经典方剂，由紫荆皮、赤芍、独活、白芷、石菖蒲组成，临床多以冲和油膏使用。近年来，冲和膏在治疗以缺血性疼痛、麻木、皮肤发凉等为主要表现的糖尿病足早期病变方面日益引起重视，具有很好的开发应用前景。本课题组将冲和膏改进，制成冲和凝胶，患者可直接涂在患处。其具有不油腻、涂布性好、易清洗、不污染衣物等特性，在一定程度上方便患者的用药。本研究以芍药苷、蛇床子素为指标，考察冲和凝胶体外透皮特性，探索冲和凝胶透皮机制，为新制剂的开发提供数据支持。

1 材料

Agilent 1200高效液相色谱仪；ALC-1104电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；KQ-300B型超声波清洗器（功率250 W，频率40 kHz，昆山市超声仪器有限公司）；TK-20A型透皮扩散试验仪（上海锴凯科技贸易有限公司）；TD24-WS低速台式离心机。

芍药苷、蛇床子素对照品（质量分数均≥98.8%，天津中新药业研究中心）；冲和凝胶（自制，批号20110317，芍药苷质量分数8.96 mg·g-1，蛇床子素2.68 mg·g-1）；冲和膏（天津中医药大学第一附属医院，批号20110421）；无水乙醇（分析纯）、乙腈（色谱纯）购于天津市康科德科技有限公司；去离子水由MILLIPORE超纯水系统（M3LL3Q/30L）制备。

Wistar大鼠，雄性，200 g左右，天津市放射医学研究所提供，实验动物许可号SCXK（津）2005-0001。

2 方法与结果

2.1 含量测定方法的建立

2.1.1 色谱条件 参照本课题组已建立的方法[1]，芍药苷选用230 nm、蛇床子素选用330 nm波长进行检测。该色谱条件下芍药苷、蛇床子素的HPLC图见图1。皮肤组织浸出液中各组分均不干扰测定。

A. 空白透皮液；B. 对照品；C. 样品；1. 芍药苷；2. 蛇床子素。

图1 不同样品的高效液相色谱图

Fig.1 HPLC chromatograms of different samples

2.1.2 线性关系考察 用流动相配制系列质量浓度的芍药苷和蛇床子素的混合对照品溶液，进样量20 μL。以峰面积 A 对浓度 C 进行线性回归，芍药苷、蛇床子素的回归方程分别为 A =26.465 C-0.875， r =0.999 8； A =34.365 C-6.591， r =0.999 9。线性范围分别为0.947 6～947.63，0.191 6～191.6 mg·L-1。

2.1.3 精密度试验 在线性范围制备芍药苷/蛇床子素低、中、高3个浓度的芍药苷和蛇床子素混合对照品溶液各3份，每个浓度用HPLC连续重复进样6次，考察分析方法的日内精密度，计算RSD。芍药苷日内和日间RSD分别为1.9%，1.3%，蛇床子素日内和日间 RSD 分别为0.23%，0.54%。精密度良好。

2.1.4 稳定性试验 取冲和凝胶24 h的透皮接收液样品，在0，2，4，8，12，24，48 h分别进样测定，记录峰面积。以峰面积计算芍药苷和蛇床子素的RSD分别为0.99%，1.7%，结果表明，48 h内透皮接收液中芍药苷、蛇床子素稳定。

2.1.5 加样回收率试验 取24 h空白皮肤浸泡液，精密加入一定量的芍药苷和蛇床子素对照品，测定质量浓度，计算回收率。芍药苷和蛇床子素回收率分别为100.9%，98.59%，RSD分别为1.1%，1.3%。透皮接收液加样回收率合格。

精密称取冲和凝胶0.10，0.50，1.50 g，置50 mL量瓶中，精密加入一定量的芍药苷和蛇床子素对照品，50%乙醇-生理盐水溶解[1]，超声30 min，冷却定容，测定质量浓度，计算加样回收率。结果显示各组芍药苷和蛇床子素的回收率均在101.2%～98.36%，RSD均小于2.0%。冲和凝胶含量测定加样回收率合格。

3. School of Chinese Pharmacy， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100102， China）

[Abstract] Chonghe gel originated from the Chinese ancient prescription， can be used for the treatment of diabetic foot. This experiment was to study the transdermal absorbability of paeoniflorin and osthole in Chonghe gel . Franz diffusing cells method was adopted for the in vitro model of rat belly skins. Paeoniflorin and osthole in the receiving liquid， skins and gel were determined by HPLC. The receiving liquid were screened， and Chonghe gel and Chonghe ointment were compared by transdermal absorbability. Result showed that ethanol-normal saline （2∶8） solution was the appropriate receiving liquid. The penetration rates of paeoniflorin and osthole were 78.07， 7.08 μg·cm-2·h-1 respectively. In 24 h， the accumulated penetration rates were （31.51±1.33）%， （12.38±1.28）%， respectively. The retention rates of paeoniflorin and osthole in skin were （0.92±0.45）%， （4.81±1.03）%， respectively. The retention of osthole in skins was a drug reservoir. Transdermal behavior of effective constituents in Chonghe gel was more efficient than that in ointment. In vitro ， the transdermal behavior of paeoniflorin in Chonghe gel was close to a Weibull process， while the behavior of osthole was close to Higuchi process.

[Key words] Chonghe gel； paeoniflorin； osthole； transdermal absorption

doi：10.4268/cjcmm20131616