心舒滴丸中丹参水溶性成分提取工艺研究

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摘要：目的优选提取心舒滴丸中丹参水溶性成分的工艺条件。方法高效液相色谱法测定水煎煮液、醇渗漉液中丹酚酸B的含量；单因素试验法优选最佳提取工艺。结果最佳提取心舒滴丸中丹参水溶性成分的工艺为：渗漉法，14倍量30%乙醇浸渍12 h。结论所选取的提取工艺条件合理、可行，丹酚酸B提取率高。

关键词：心舒滴丸；丹参；丹酚酸B；提取工艺

中图分类号：R972文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)06-0009-02

Study on Extraction Technology of Water-soluble Active Principles of Salvia miltiorrhiza in Xinshu Dripping Pills

LI Yong, HE Wei, YUAN Wan-rui, XU De-jian

（Institute of Pharmaceutical Science, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China）

Abstract：Objective To optimize the extraction technology of water-soluble active principles of Salvia miltiorrhiza in Xinshu Dripping Pills. Methods The content of salvianolic acid B was determined in decoction liquid and percolate by HPLC, and the optimal extraction technology was defined by single factor test. Results The optimal extraction technology of water-soluble active principles of Salvia miltiorrhiza in Xinshu Dripping Pills was as follows: percolation method with 14 times volume of 30% ethanol and percolating for 12 h. Conclusion The extraction technology of salvianolic acid B with a high extraction rate is rational and feasible.

Key words：Xinshu Dripping Pills；Salvia miltiorrhiza；salvianolic acid B； extraction technology

丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge．的干燥根及根茎，其水溶性成分主要是酚酸类成分，包括丹参素、原儿茶醛、丹酚酸等。现代研究证明，其水溶性成分的药理作用广泛，具有改善微循环、抗血栓、促进组织恢复、抗肝脏损伤、抗动脉粥样硬化及细胞凋亡等多种药理作用[1]，其中丹酚酸B是含量高、活性强的成分之一。我们以丹酚酸B为指标对经超临界CO2提取的丹参药材中水溶性成分的提取工艺进行了实验研究。

1材料

Dionex ultimate 3 000高效液相色谱仪（在线脱气、自动进样、光电二极管阵列检测器、Chromeleon色谱工作站）；丹酚酸B（批号 111562-200403，供测定含量用，中国药品生物制品检定所）；丹参药材（广州致信中药饮片有限公司，本实验所用药材为超临界CO2提取脂溶性成分后的丹参药材粉末）。实验室所用甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯。

2方法

2.1色谱条件

Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇-乙腈-1.7%甲酸（30：7：63）；检测波长：286 nm；流速：1.0 mL・min-1；在此条件下，供试品中丹酚酸B与其它组分峰能达到基线分离，丹酚酸B峰保留时间约20.5 min。

2.2标准曲线的制备

精密称取丹酚酸B对照品11.59 mg，加75%甲醇制成每毫升含1.159 mg的溶液，精密量取1 mL，加75%甲醇定容至10 mL，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液2，5，10，15，20μL注入液相色谱仪，按上述条件测定丹酚酸B色谱峰面积，以丹酚酸B微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。丹酚酸B的回归方程为 y=17.734x－0.401 3，r=0.999 9。表明丹酚酸B在0.231 8～2.318 μg范围内峰面积积分值与丹酚酸B的微克数呈良好的线性关系。

2.3提取方法选择

2.3.1水煎煮法精密称取丹参药材粉末25 g，加6倍量水煎煮3次，每次1 h，滤过，合并滤液，定容至500 mL。精密量取2 mL，水浴蒸干，残渣用75%甲醇溶解并定容于25 mL容量瓶，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，按照上述色谱条件测定丹酚酸B含量，结果见表1。

2.3.2渗漉法精密称取丹参药材粉末25 g，用50%乙醇20倍量渗漉提取，渗漉液定容至500 mL，按照2.3.1项下方法操作，结果见表1。

注：按中国药典2005年版一部丹参项下含量测定方法，丹参药材丹酚酸B含量为49.79 mg・g-1

由表1可见，渗漉法提取率明显高于水煎煮法，因此，确定用渗漉法提取心舒滴丸中丹参水溶性成分。

2.4渗漉法工艺条件考察

2.4.1溶剂用量考察精密称取丹参药材粉末25 g，平行2份，按照中国药典2005年版一部附录IO流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用50%乙醇作溶剂，浸渍12 h，渗漉，依次收集6，10，14，18，20，24倍量的渗漉液，分别定容至200，100，100，100，50，100 mL，测定各部分渗漉液中丹酚酸B的含量，结果见表2。比较表2数据，确定醇用量为14倍量。

2.4.2乙醇浓度考察精密称取丹参药材粉末25 g，分别用30%，50%，70%乙醇，按照中国药典2005年版一部附录IO流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，浸渍12 h，渗漉，分别收集14倍量的渗漉液，定容至500 mL，测定各样品中丹酚酸B的含量。结果见表3。由表3可见，所用溶剂乙醇浓度为30%和50% 时，丹酚酸B含量几无差异，但稍高于70%乙醇渗漉液含量，考虑工业生产的成本，确定渗漉液醇浓度为30%。

2.4.3浸渍时间的考察 精密称取丹参药材粉末25 g，平行3份，用30%乙醇装筒分别浸渍0，12，24 h后渗漉，收集14倍量的渗漉液，均定容至500 mL，稀释后，测定各供试品中丹酚酸B含量，见表4。结果表明，药材浸渍12 h和24 h的差别不大，而未浸渍丹酚酸B的提取率较低，故确定浸渍时间为12 h。

3讨论

本实验所用丹参是经超临界CO2提取其脂溶性成分后的药材粉末，颗粒较细，水煎煮时易糊化，一定程度上降低了丹酚酸B的提取率。另据文献报道[2]，丹酚酸B加热时稳定性较差，这也是水煎煮法丹酚酸B提取率低的重要原因。

影响渗漉法提取效率的因素主要包括溶剂种类、溶剂用量、浸渍时间、渗漉速度等，较适用单因素试验法进行考察。本实验通过对渗漉条件进行单因素试验，最终确定最佳提取心舒滴丸中丹参水溶性成分的工艺条件，通过验证表明此提取工艺简便可行。

测定丹酚酸B含量，采用药典法甲醇-乙腈-甲酸-水（30:10:1:59）为流动相进行分离时，丹酚酸B色谱峰前面有2个干扰组分峰不能分开，调整甲醇-乙腈-1.7％甲酸比例为30:7:63，分离度较好，丹酚酸B色谱峰与其它组分峰达到基线分离。

参考文献

[1]李朝霞，王地．丹参水溶性成分的研究进展[J]．北京中医，2004，23（3）：176-178．

[2]王凤美，李磊，柳先平，等．丹参药材中丹酚酸B的提取及其HPLC法测定[J]．现代中药研究与实践，2004，18（z1）：62-64．