HPLC法同时测定消炎片中绿原酸和秦皮乙素的含量

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇HPLC法同时测定消炎片中绿原酸和秦皮乙素的含量范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

[摘要] 目的：建立反相高效液相色谱法同时测定消炎片中绿原酸和秦皮乙素的含量。方法：采用Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈-0.04%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱；检测波长为328 nm；流速1.0 ml/min；进样量10 μl；柱温35℃。结果：绿原酸和秦皮乙素的线性范围分别为2.515~30.18 μg/ml(r=0.999 9，n=5)和6.388~76.65 μg/ml (r=1.000 0，n=5)；提取回收率分别为98.99%(RSD为0.2%，n=6)和98.93%(RSD为0.5%，n=6)。结论：本法操作简便、快速、结果准确，可用于消炎片的质量控制。

[关键词] 消炎片；含量测定；绿原酸；秦皮乙素；hplc

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A[文章编号]1673-7210（2011）04（b）-054-03

Simultaneous determination of chlorogenic acid and esculetin in Xiaoyan Tablets by HPLC

SUN Fei, CHEN Lizhu

Jixi Institute for Drug Control, Heilongjiang Province, Jixi158100 ,China

[Abstract] Objective: To establish RP-HPLC method for simultaneous determination of chlorogenic acid and esculetin in Xiaoyan Tablets. Methods: Column packed with Agilent Eclipse XDB-C18 (250 mm×4.6 mm , 5 μm) was used; the mobile phase was acetonitrile-0.04%H3PO4 by gradient elution and the detection wavelength was 328 nm; the flow rate was 1.0 ml/min, the injection volume was 10 μl, the column temperature was 35℃． Results: The linear response of chlorogenic acid ranged from 2.515 to 30.18 μg/ml, r=0.999 9 (n=5); the linear response of esculetin ranged from 6.388 to 76.65 μg/ml, r=1.000 0 (n=5); the average recovery of chlorogenic acid was 98.99%, with RSD of 0.2% (n=6). The average recovery of esculetin was 98.93% with RSD of 0.5%(n=6)． Conclusion: The method is convenient, quick and accurate, and can be used for the quality control of Xiaoyan Tablets.

[Key words] Xiaoyan Tablets; Determination; Chlorogenic Acid; Esculetin ; HPLC

消炎片由蒲公英、紫花地丁、野、黄芩4味中药加工、提取制成，具有抗菌消炎之功效[1]。现行质量标准[1]无含量测定方法。目前有多篇文献[2-4]关于HPLC法测定消炎片中绿原酸、秦皮乙素含量的报道，未见采用HPLC法同时测定两组分的报道，本文建立了同时测定消炎片中野的有效成分绿原酸和紫花地丁有效成分秦皮乙素的含量测定方法，本方法简便、准确、重现性好，可用于消炎片的质量控制。

1 仪器与试药

1.1仪器

HP1100高效液相色谱仪，HP1100工作站（自动进样，紫外检测器），Sartorius电子天平（CP225D），KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器，TU-1901双光束紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。

1.2试药

绿原酸对照品（110753-200413，中国药品生物制品检定所），秦皮乙素对照品（110741-200506，中国药品生物制品检定所），蒲公英（20091102，安徽省万生中药饮片有限公司），黄芩（20090106，安徽海鑫中药饮片有限公司），消炎片[批号：20090103，云南玉溪望子隆生物制药有限公司；批号：100106，修正药业集团儿童制药有限公司；批号：20090205，云南金不换（集团）有限公司药业分公司]，其他试剂均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性实验

采用Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈（A）-0.04%磷酸溶液(B)为流动相，线性梯度洗脱：5%A（0 min）；12%A（40 min）；20%A（50 min）；5%A（70 min）；5%A（80 min）；检测波长为328 nm；流速1.0 ml/min；进样量10 μl；柱温35℃。理论板数以秦皮乙素计不低于10 000，绿原酸峰与秦皮乙素峰的分离度大于1.5。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液制备精密称取样品适量（约3片重）置50 ml量瓶中，加50%甲醇溶液40 ml，超声提取30 min，放置至室温，加50%甲醇溶液至刻度，摇匀，滤过，备用。

2.2.2 对照品溶液制备分别精密称取经P2O5干燥过夜的绿原酸、秦皮乙素对照品10.06、10.22 mg，分别置10 ml量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，用甲醇稀释至刻度，作为对照品贮备液。

2.2.3 阴性对照溶液制备按消炎片的处方，不加野和紫花地丁两种药材，依法制备阴性样品，按“2.2.1”供试品溶液制备的方法制备阴性对照溶液。

按上述色谱条件进样，色谱图见图1。

图1对照品溶液(A)、供试品溶液(B)和阴性对照溶液(C)HPLC 色谱图 （1为绿原酸；2为秦皮乙素）

2.3 线性关系

分别精密量取绿原酸和秦皮乙素对照品贮备液1.0、2.5 ml，置同一50 ml量瓶中，用50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，按上述色谱条件，分别进样1.25、2.5、5、10、15 μl，以峰面积Y对应浓度X（μg/ml）进行回归分析得：绿原酸回归方程Y=23.44 X+3.495，r=0.999 9（n=5），绿原酸在2.515~30.18 μg/ml范围内线性良好；秦皮乙素回归方程Y=28.63X-6.085，r=1.000 0（n=5），秦皮乙素在6.388~76.65 μg/ml范围内有良好的线性关系。

本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文

2.4 精密度实验

取对照品溶液（浓度：绿原酸10.06 μg/ml，秦皮乙素25.55 μg/ml），重复进样5次，每次5 μl，测得绿原酸的峰面积值的RSD为0.5%（n=5）；秦皮乙素峰面积值的RSD为0.2%（n=5），结果表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性实验

精密称取样品适量，按“2.2.1”项下的方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、16、24 h，重复进样，每次10 μl，测得绿原酸和秦皮乙素峰面积的RSD分别为0.4%和0.3%（n=7），结果表明样品在24 h内稳定。

2.6 重复性实验

取同一批样品（批号：20090103），按“2.2.1”项下的方法制备5份供试品溶液，分别测定色谱峰面积，绿原酸和秦皮乙素的平均含量分别为0.182 mg/片和0.498 mg/片，RSD分别为0.4%和0.6%（n=5），结果表明本法重复性良好。

2.7 回收率实验

精密称取已知含量的样品（批号：20090103）约0.8 g，6份，分别置50 ml量瓶中，分别精密加入对照品溶液：绿原酸对照溶液（0.136 6 mg/ml）各2.0 ml，秦皮乙素（0.249 2 mg/ml）各3.0 ml，加50%甲醇溶液适量，超声30 min，静置至室温，用50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，进样10 μl，结果绿原酸和秦皮乙素平均回收率分别为98.99%（RSD=0.2%，n=6）和98.92%（RSD=0.5%，n=6），结果见表1。

表1 回收率试验测定结果

2.8 样品含量测定

取3批不同厂家的样品，按“2.2.1”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积，用外标法以峰面积计算，结果见表2。

3讨论

3.1 测定波长的选择

本法通过分别取两种对照品适量，用流动相稀释至一定浓度，照紫外分光光度法，在200~700 nm波长范围内扫描，结果绿原酸和秦皮乙素的最大吸收波长分别是328 nm和353 nm，故将测定波长确定为328 nm。

3.2 色谱条件的考察

为了在相对较短的时间内获得满意的分离效果，故采用梯度洗脱，色谱柱选用250 mm的长柱，流动相开始采用磷酸盐缓冲液-甲醇，绿原酸和秦皮乙素分离效果不理想，采用乙腈和磷酸溶液的梯度洗脱既缩短了分离时间，又取得了较好的分离效果。绿原酸见光易分解[5]，试验中全部使用棕色瓶。

3.3 提取方法的考察

在实验过程中考察了分别以100%、75%、50%甲醇、75%乙醇作溶剂超声提取30 min，结果表50%甲醇提取效果好，与文献报道相同[6]。又以50%甲醇为提取溶剂，考察了超声10、20、30、40、50 min提取情况，结果表明超声30 min提取完全。

本品的现行标准水平较低，仅有鉴别，这给质量监测带来一定的难度，也很难保证中药“安全、有效、质量可控”，本法的建立对现行标准是有效的补充和提高。

[参考文献]

[1]国家药典委员会.卫生部药品标准(中药成方制剂)[S].4册.1991:152.

[2]周玲娜,吴立成,陈宗良.高效液相色谱法测定消炎片中绿原酸含量[J].中国药业,2009,18(10):35.

[3]潘楣.高效液相色谱法测定消炎片中绿原酸含量[J].中国药业,2009.18(12):47-48.

[4]陈逸生,高效液相色谱法测定消炎片中秦皮乙素的含量[J].中国现代药物应用,2008,2(21):27.

[5]顾利红,朱品业.日光和温度对绿原酸供试液稳定性的影响[J].中成药,1999,21(11):568.

[6]谭晓杰,贾英,陈晓辉,等.RP-HPLC法测定野注射液中绿原酸和咖啡酸的含量[J].药物分析杂志,2005,25(6):651-653.

（收稿日期：2011-02-14）

本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文