微波提取蜂胶总黄酮的工艺研究

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[摘要]目的：确定微波提取蜂胶总黄酮的最佳工艺。方法：采用LG MG-5062TV2微波炉进行提取，以蜂胶总黄酮为筛选指标，按L9（34）正交表进行实验。结果：蜂胶总黄酮最佳提取工艺为取蜂胶粗粉用80%的乙醇进行微波提取，微波功率为360 W，用40倍(V/W)的溶剂提取3次，每次为6 min。结论：得到了微波提取蜂胶总黄酮的最佳工艺，该工艺稳定，提取率高。

[关键词]蜂胶总黄酮；提取工艺；微波

[中图分类号]R284.2 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）07（c）-127-02

蜂胶是蜜蜂从植物幼芽及树干采集的树脂，并混入其上鄂腺分泌物和蜂蜡等加工而成的一种具有芳香气味的胶状物，它具有抗菌、消炎、增强免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤等多种功能，有广泛的医疗和保健作用，现已成为各国科学研究的热点[1]。现代研究表明，蜂胶的主要有效成分是黄酮类化合物，目前文献报道中对蜂胶总黄酮的提取方法有不同溶剂冷浸法、温浸法、回流提取法，这些方法提取时间长，提取率低。近几年微波提取法在中药的提取中应用越来越广泛，具有选择性好、提取纯度高和提取快速的特点[2]，本实验首次系统研究了微波提取蜂胶总黄酮的工艺并总结如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

UV754紫外分光光度计（上海精密科技有限公司）；LG MG-5062TV2微波炉（韩国LG公司）；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所），蜂胶生蜂胶(广州市园田蜂产品有限公司提供)；其它试剂均为分析纯。

1.2 蜂胶总黄酮的比色法含量测定[3]

1.2.1 最大吸收波长的确定精密称取干燥至恒重的芦丁对照品适量，加乙醇稀释至浓度为0.5 mg/ml，精密移取芦丁对照品溶液0.4 ml于25 ml容量瓶中，加入0.3 ml 5%NaNO2溶液，摇匀，静置10 min，0.3 ml 5%Al(NO3)3溶液，摇匀，静置10 min，最后加入4 ml 4%NaOH溶液，摇匀，乙醇定容，静置10 min，进行全波长扫描，在505 nm处有最大吸收峰。

1.2.2 标准曲线的绘制分别精密移取浓度为0.5 mg/ml芦丁对照品溶液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 ml于25 ml容量瓶中，按标准曲线下的处理方法进行显色和吸光度的测定，以吸光度（A）为纵坐标，对照品浓度（C）为横坐标，进行线性回归。

1.2.3 样品中蜂胶总黄酮的含量测定精密吸取样品液2 ml，置25 ml容量瓶中，以下按照标准曲线制备方法进行操作，测定吸光度，由得到的回归方程计算样品中总黄酮的含量。

1.3 蜂胶总黄酮提取工艺的正交试验[4]

本实验采用微波法提取蜂胶中的总黄酮，根据预试验的结果，选定微波功率、提取时间、提取次数、溶剂体积四个因素，每个因素选定三个水平，按L9（34）表进行实验，每组实验取20 g蜂胶，采用80%乙醇为溶剂，最后提取液浓缩定容到150 ml，具体正交设计见表1。

1.4 蜂胶总黄酮提取工艺的验证试验

按照正交试验筛选的最佳工艺，进行3批验证试验，分别测定提取液中蜂胶总黄酮含量。

2 结果

2.1 总黄酮含量测定标准曲线

以吸光度（A）为纵坐标，对照品浓度（C）为横坐标，进行线性回归，得到总黄酮含量测定标准曲线回归方程为：A=0.065C+0.004，r=0.999 2，说明芦丁对照品在8.0~40.0 mg/L浓度范围内与吸光度有良好的线性关系。

2.2 提取工艺正交试验结果

按照正交试验表头设计进行实验，以蜂胶总黄酮为筛选指标，进行工艺优化，直观分析见表2，方差分析见表3。由表3方差分析可知，A、C因素即微波功率和提取次数具有显著性意义（PC>D>B，且以A2B3C2D3为较佳的工艺，结合直观分析与方差分析，选择A2B3C2D3为最佳工艺，即取蜂胶粗粉用80%乙醇进行微波提取，微波功率为360 W，用40倍的溶剂提取3次，每次为6 min。

2.3 最佳提取工艺的验证结果

按照最佳工艺，即A2B3C2D3进行三批验证试验，每批取表3方差分析表

50 g蜂胶进行提取，最终得到三批验证工艺的蜂胶总黄酮含量分别为30.16%、29.43%和30.97%，提取率较高，并且工艺比较稳定。

3 讨论

3.1 由于芦丁和黄酮类化合物都是以2-苯基色原酮为母核的结构，具有相同的吸光度测试性质，均在505 nm附近

有最大吸收，所以采用芦丁为对照品测定蜂胶总黄酮的含量。

3.2 实验中发现，微波提取功率360 W的提取效率比540 W效果好，每次提取时间6 min时比8 min提取效果好，可能是因为蜂胶总黄酮受热稳定性不好，过高的温度与过长时间提取反而会使部分的黄酮分解。

[参考文献]

[1]潘娅, 郑德俊, 周莉玲,等. 蜂胶生理活性与药理作用研究浅释[J]. 中医药学刊,2004,22(2):381-384.

[2]韦藤幼,赵钟兴,梁必琼,等.微波预处理提取银杏叶黄酮的工艺研究和机理探讨[J].中成药,2005, 27(6):637-640.

[3]唐玉莲,黎海妮,刘海花,等.芒果叶总黄酮的提取及含量测定[J].右边民族医学学报,2006,28(1):8-10.

[4]郭锦棠,李伶,杨俊红,等.微波提取山楂中总黄酮的正交实验研究[J].中国药学杂志,2005,40(2):112-115.

（收稿日期：2007-05-21）

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