RASSF1A基因在膀胱癌中的表达及意义

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467000河南省平顶山市郏县人民医院

泌尿外科

摘要目的：研究rassf1a基因在膀胱移行细胞癌（BTCC）中的表达，探讨RASSF1A在BTCC发生、发展中的作用。方法：采用鼠抗人RASSF1A单克隆抗体及免疫组化检测8例正常膀胱组织及37例膀胱移行细胞癌组织中的RASSF1A蛋白表达。结果：RASSF1A蛋白的表达率在正常膀胱组织中为100%（8/8），在膀胱癌组织中为24.3%（9/37）。两组间表达率差异具有统计学意义（P＜0.05）。其中在表浅型（Ta~T1）组表达率为25%（4/16），浸润型（T2~T4）组表达率为23.8%（5/21），二组中表达率差异无统计学意义（P＞0.05）。其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级表达率分别为27.3%（3/11）、22.22%（4/18）、25.0%（2/8）。该三组之间表达差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：RASSF1A基因的失表达或低表达，可能与膀胱移行细胞癌的发生有关，而与其临床分期、病理分级无关。该基因有望作为早期诊断膀胱肿瘤发生的肿瘤学标记物。

关键词 膀胱肿瘤 癌 移行细胞 RASSF1A基因 免疫组化

采用免疫组织化学方法对8例正常膀胱组织及37例膀胱肿瘤组织中RASSF1A蛋白的表达进行检测，以探讨RASSF1A基因的表达与膀胱肿瘤的发生、临床分期及病理分级的关系，现报告如下。

资料与方法

一般资料：收集我院泌尿外科2005年10月~2006年6月住院病人的膀胱移行细胞癌病理标本37例及癌旁正常膀胱组织8例。男31例，女6例，年龄37~81岁，平均68.4岁。所有患者术前均未行化疗或放疗。临床分期：浅表型（Ta~T1）16例，浸润型（T2~T4）21例。其中Ⅰ级11例，Ⅱ级18例，Ⅲ级8例。

方法与试剂：抗体为英国生产的鼠抗人RASSF1A单克隆抗体，采用SABC法常规微波抗原修复3分钟，阻断内源性过氧化物酶活性；滴入RASSF1A抗体30μl，放入湿盒过夜。

DAB显色、苏木素复染、梯度酒精脱水、二甲苯透明，封片后进行结果判定。

对照实验：正常对照组为癌旁正常膀胱组织；阴性对照为PBS代替抗体的空白对照。

结果评定：无阳性反应细胞，或阳性反应细胞率＜20%为阴性，阳性细胞呈棕黄色。阳性细胞数介于20%~40%为弱阳性（+），介于40%~60%为阳性（++），阳性细胞数＞60%者为强阳性（+++）。

统计学处理：统计RASSF1A蛋白阳性标本例数，计算阳性率X2检验。以P＜0.05为有统计学意义。

结果

RASSF1A阳性着色定位于细胞浆，显弥漫性均质状。正常膀胱黏膜上皮细胞显阳性反应，着色较重，呈弥漫性分布，膀胱肿瘤组织少数呈阳性反应，着色较浅。部份呈局灶性。

RASSF1A蛋白在正常膀胱组织表达率为100%，在TCC组织中的表达率为24.3%（9/37），两者间的表达有显著性差异（P＜0.05），各病理分级间、临床分期间的表达无显著性差异（P＞0.05）（见表）。

讨论

RASSF1A基因是2000年报道的从3号染色体短臂克隆出来的新型候选抑癌基因，因其表达产物中含有与Ras蛋白结构区域，因而得名RASSF1A。已有研究显示，RASSF1A基因在正常组织中广泛表达，并认为RASSF1A基因是人类肿瘤中经常失活的抑癌基因。近年来对RASSF1A的研究中证实，RASSF1A在正常组织中100%表达，但在肺癌、乳腺癌、鼻咽癌、肾癌、前列腺癌和膀胱癌等中却出现了较高频率的表达缺失，并经甲基化特异性PCR检测发现RASSF1A的启动子的CPG岛被高甲基化，却较少出现突变。因此，目前认为，由于RASSF1A启动子的异常甲基化，引起了RASSF1A表达的缺失，导致了肿瘤的发生。

RASSF1A基因含有6个外显子，在启动子区域存在16个CPG位点。其DNA全长1873bp，含340个氨基酸的开放读框，编码产物相对分子量为38800的蛋白多肽，为可溶性胞质蛋白。酵母双杂交实验表明，该蛋白能与DNA修复蛋白XPA发生相互作用，表明该蛋白内含有与XPA相互作用的位点。在缺失RASSF1A表达的肿瘤细胞中使其再表达，可抑制肿瘤细胞克隆的形成和非贴壁肿瘤细胞的生长。Lee等在对膀胱移行细胞癌的研究中发现，80%的膀胱癌细胞系测不到RASSF1A的表达，有60%的原发性膀胱癌中有RASSF1A表达的减少，在97%未表达的原发性膀胱癌中发现了RASSF1A启动子甲基化。本研究中8例正常膀胱黏膜均有RASSF1A蛋白的表达，在膀胱癌组织中的表达率分别为表浅型25.0%（4/16）、浸润型23.8%（5/2），说明RASSF1A的低表达可能参与了膀胱癌的发生，其低表达与膀胱癌的分级、分期无显著相关性。提示RASSF1A与肿瘤的发展、演进关系不甚密切。作为新发现的候选抑癌基因，RASSF1A基因的功能及作用机制仍未完全明确，能否作为判断早期膀胱肿瘤发生的有效肿瘤学标记物，值得进一步研究。