高效液相色谱法的发展和应用探究

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摘 要：在对高效液相色谱法进行了解以后，概述了高效液相色谱的组成结构、操作原理和方法，分析了高效液相色谱的分类方法和它的优势和劣势，最后得出高效液相色谱的应用和发展。

关键词：高效液相色谱法 发展 优势 劣势 发展 应用

高效液相色谱法使用的流动相是液体，应用高压输液装置，将具有不同极性的单一溶剂或者不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相压进装有固定相的色谱柱中，各种成分在柱内分离以后，然后进入检测器被检验，最后对试样进行分析。

一、高效液相色谱法的发展

1.高效液相色谱法的历史

色谱分析法的一个分支就是高效液相色谱法，在20世纪60年代末期，以气相色谱法和经典液相色谱发为基础，形成的一种新的分离和分析技术。到了1960年，随着气相色谱法理论和实践的不断发展，同时光学、机械、电子等技术也在不断发展，液相色谱法逐渐被相关学者使用。到了20世纪60年代末，高效液相色谱发就应用高压泵和化学键合固定相。

2.高效液相色谱法和其他色谱法的比较

2.1高效液相色谱法和经典液相色谱的比较

经典液相色谱法使用的是粗粒多孔固定相，将固定相装在口径大、较长的玻璃柱管内，流动相只能通过重力流过色谱柱，溶质在固定相的传质和扩散的速度都很慢，因为柱的入口压力很小，导致柱子的效果很差，在很大程度上增加了分析时间。而高效液相色谱法使用的固定相是全多孔微粒，将固定相装在口径小、短的不锈钢的柱子内，流动相通过高压输液泵进入了柱压很大的色谱柱中，在固定相中，溶质的传质和扩散速度都很快，所以在很多的时间内，柱子的效率和分离能力都很好。

2.2和气象色谱法的比较

高效液相色谱法和气象色谱法相比有很多的类似之处。气象色谱法的选择性很高、分析效率也不低，同时还具有很高的灵敏度和分析速度，可是这种分析方法只能对那些蒸气压低和沸点低的样品进行分析，对于那些高沸点的有机物、具有不高稳定性的化合物、高分子物质和生物活性物质来说，这种方法就行不通了。经过分析，只有20%的有机化合物可以使用气象色谱法进行分析。可是对高效液相色谱法来说，就能分离和分析剩余的80%的有机化合物。

二、高效液相色谱法的综合分析

1.高效液相色谱法的有适合劣势

高效液相色谱法和其它分析方法相比具有很高的分辨率，为了达到最佳的分离效果可以选择流动相和固定相；同时它的分析速度很快，一般只需要几分钟或者即使分钟；它还具有很高的重复性，使用的样品还可以回收；它使用的色谱柱还可以重复使用，非常环保；具有较高的自动化程度，在进行分析时，分析的精确度也很高。所以高效液相色谱法被广泛应用，尤其是对大部分的有机化合物进行分离和分析，在分离和分析高沸点、极性强、大分子、热稳定差的化合物时有很大的优势。

可是高效液相色谱法需要很高的压力，一般要达到150～350×102 KPa。同时如果流动相的配比在进样器、柱接头、连接管和检测池等发生任何变化，或者被分离的物质发生扩散或者滞留的现象都会加宽色谱峰，降低柱效率。

2.对高效液相色谱法的分类

由于分离机制不同，高效液相色谱法可分为以下几类。（1）吸附色谱。这种方法的固定相是固体吸附剂，流动相是不同极性溶剂，根据各个组分在吸附剂上的吸附能力不同对其进行分离。（2）分配色谱。这种方法的固定相是液体。因为每一个组分在固定相中的溶解能力不同，对试样中的组分进行分离。（3）亲和色谱。这种方法主要是对固定相的结合特性进行利用，然后将分子分离。亲和色谱在凝胶过滤色谱柱上连接和有待分离的物质有一定结合能力的分子，同时这种结合是可逆的，在对流动条件进行改变时，也能对其进行分离。（4）离子交换色谱。这种色谱的固定相是离子交换剂，将离子交换树脂上可电离的离子和流动相中的具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，因为这些离子和交换剂的亲和能力不同，就会分离开来。（5）体积排阻色谱。这种色谱的固定相是具有化学惰性的多孔性凝胶，固定相对各组分的体积阻滞作用不同，这样各组分就会发生分离。因为流动相的不同又可分为凝胶过滤色谱和凝胶渗透色谱。

三、高效液相色谱法的应用

1.高效液相色谱法的应用范围

对于那些高沸点不易挥发、热稳定性差的、高分子的、具有不同极性饿有机化合物，生物活性物质和各种天然的物质，高效液相色谱法都能对其进行分离和分析。这些物质在食品、合成药物、石油化工产品、生物化工产品等方面都有应用，其中在这些方面应用的无机物中占20%，在这些方面应用的有机物中占80%，特别是那些永久性气体、易挥发的、具有中等分子量的化合物都能进行分析。

2.高效液相色谱法应用的限制

首先高效液相色谱法使用的流动相是多种溶剂，同时使用这种方法进行分析需要的成本比气象色谱法高，对环境也会产生污染。特别是在进行不同浓度的操作时，还要对其进行洗脱，操作起来比气象色谱法复杂。同时，这种方法使用的检测器不是通用的，和气象色谱相比就处于劣势了。可是这几年蒸发激光散射检测器逐渐被应用，很有可能成为高效液相色谱法分析时一种通用的检测器。还有就是，高效液相色谱法是不可能取代气象色谱法的，因为对于组成复杂、具有多种沸程的石油产品来说，它需要柱效达到10万块塔板和毛细管气相分析发分析。最后，这种方法也无法取代中、低压柱色谱法。在柱压从200千帕升到到1兆帕时，具有生化活性的生化样品收到压力容易分解、变性。

四、结束语

高效液相色谱法是在气象色谱和液相色谱的基础上发展的，同时发展也很快，因为这种方法操作简单，结果准确、效率高，当前，在各个方面的应用也非常广泛。可是这种方法也有缺陷，所以要不断的对其进行完善，使其变得更加快捷精准。

参考文献

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作者简介：性别 女 出生年月1985/08/12 籍贯 江苏连云港新浦区 汉族 职称 助理工程师 学位 学士学位 研究方向 仪器分析（液相、气相类）