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[摘要] 目的:建立四物胶囊中芍药苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法。以Kromasail C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,甲醇-异丙醇-醋酸-水系统(25∶2∶2∶71)为流动相,检测波长为230 nm,流速为1.0 ml/min,柱温35℃。结果:芍药苷在0.288~2.880 mg/ml浓度范围内线性关系良好,r=0.999 9(n=5);平均加样回收率为98.32%(n=9),RSD=0.96%。结论:本法简便、快捷、准确,可用于四物胶囊中芍药苷的含量测定。
[关键词] 高效液相色谱法;四物胶囊;芍药苷
[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2008)05(b)-031-02
The content determination of paeoniflorin in Siwu Capsules by hplc
HUANG Liang1, HUANG Yong-bin1, ZHANG Le-jia2
[1.Traditional Chinese Medical Hospital of Zhuhai, Zhuhai 519015,China;2.Tianda Pharmaceuticals(Zhuhai) Ltd., Zhuhai 519000,China]
[Abstract] Objective:To establish a HPLC method for the content determination of paeoniflorin in Siwu Capsules.Methods:The Kromasail C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) was used;the methanol-dimethylcarbinol-acetic acid-water (25∶2∶2∶71) as mobile phase ,the flow rate was 1.0 ml/min,the detection wavelength was at 230 nm.Results:The liner range was 0.288~2.880 mg/ml, r=0.999 9(n=5),the average recovery was 98.32%(n=9),RSD=0.96%.Conclusion:This method for the content determination of paeoniflorin in Siwu Capsules is accurate and quick with good reproducibility.
[Key words] HPLC; Siwu Capsules; Paeoniflorin
四物胶囊具有养血调经的功能。用于血虚所致的面色萎黄、头昏眼花、心悸气短及月经不调。处方中熟地为君药,但熟地中未含含量测定指标成分,故本文参照《中国药典》2005年版四物合剂质量标准选择白芍,对白芍中的主要活性成分芍药苷建立了含量测定方法[1,2]。该方法精密度高、重现性好、专属性强、阴性对照无干扰,可有效控制四物胶囊的质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器
惠普1100型高效液相色谱仪;四元梯度泵;自动进样器;二级管阵列检测器;HP化学工作站(美国);梅特勒-托利多AG204电子天平(瑞士)。
1.2 试药
芍药苷(中国药品生物制品检定所提供,批号:0736-200014)。四物胶囊(规格:0.5 g/粒,上海汉殷药业有限公司)。甲醇为色谱纯,重蒸馏水,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:Kromasail C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-异丙醇-醋酸-水系统(25∶2∶2∶71);检测波长:230 nm;柱温:35℃;流速:1.0 ml/min;进样量:10 μl;理论塔板数以芍药苷峰计算,应不低于2 000。
在此色谱条件下,测得供试品中芍药苷色谱峰可以完全达到基线,保留时间为17.869 min,拖尾因子(T)为1.01,与相邻峰的分离度大于1.5。见图1。
2.2 对照品溶液的制备
取芍药苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 ml含芍药苷约0.1 mg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品30粒,倾出内容物,研细,取约0.5 g,精密称定,置索氏提取器中,加甲醇适量,加热回流3 h,过滤,滤液蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至25 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
2.4阴性样品溶液的制备
取处方中药品(缺白芍)按四物胶囊制备工艺同法制得阴性样品胶囊,按“2.3”项下方法制成阴性样品溶液。
2.5线性关系考察
取芍药苷对照品适量,精密称定,加甲醇溶解并稀释制成0.144 mg/ml的对照品溶液;分别吸取对照品溶液2,4,6,8,20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,以浓度作横坐标(C),以峰面积作纵坐标(A),作线性回归,得回归方程:A=791.89C+10.704(r=0.999 9),表明芍药苷在0.288~2.880 mg/ml浓度范围内具有良好的线性关系。
2.6 精密度试验
精密吸取上述芍药苷对照品溶液10 μl,按上述色谱条件重复进样5次,依法测定芍药苷峰面积,RSD为0.42%(n=5),表明仪器的精密度符合要求。
2.7 稳定性试验
分别取上述对照品溶液(0.144 mg/ml)和供试品溶液,置于室温下,分别于第0,2,8,12,24小时吸取10 μl测定。结果表明,对照品和供试品测定溶液在24 h内峰面积值基本一致,对照品溶液的RSD为0.37%(n=5),供试品溶液的RSD为1.23%(n=5),说明对照品和供试品测定溶液24 h内稳定。
2.8 重现性实验
取批号为200609018的样品制成供试品溶液,共5份,按选定色谱条件和方法分析,计算芍药苷含量,结果其平均含量为4.37 mg/粒,RSD为1.19%,表明本含量测定方法重现性好,满足分析要求。
2.9加样回收率试验
取已知芍药苷含量(芍药苷含量为4.37 mg/粒)的同一批四物胶囊样品(批号:200609018),倾出内容物,研细,精密称定9份,分别精密加入含芍药苷为0.144 mg/ml的对照品溶液0.2,0.4,0.6 ml各3份,按“2.3”项下方法制成供试品溶液。精密吸取对照品溶液(0.144 mg/ml)、供试品溶液各10 μl注入液相色谱仪,依法测定,计算回收率及RSD值。结果见表1。
2.10样品含量测定
精密称取不同批号的四物胶囊,按“2.3”项下方法制成供试品溶液,按选定的色谱条件和方法分析计算,结果见表2。
表2结果显示,平均含量为4.776 mg/粒,故取其80%值,暂将本品含量限度定为含白芍以芍药苷(C23H28O11)计,不得少于3.8 mg/粒。
3 讨论
3.1提取时间及检测波长的选择
在供试品溶液的制备过程中,根据胶囊中浸膏粉的物料性质和芍药苷的化学性质选择甲醇加热回流提取。取本品适量,倾出内容物,研细,取约0.5 g,精密称定,平行称取3份,置索氏提取器中,加甲醇适量,分别加热回流2,3,4 h,过滤,滤液蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至25 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。精密吸取上述样品各10 μl注入液相色谱仪,依法测定,结果见表3。选择提取3 h,可以保证胶囊浸膏粉中的芍药苷被完全提出,这个环节如何正确操作,可直接影响含量测定结果。参照《中国药典》2005年版(一部)四物合剂中白芍含量项进行测定,选择最大吸收波长230 nm作为含量测定波长。
3.2流动相的选择
曾选择甲醇-异丙醇-醋酸-水系统(25∶2∶2∶71)、甲醇-0.1%磷酸系统(25∶75)、甲醇-醋酸-水系统(26∶3∶71)。结果甲醇-异丙醇-醋酸-水系统(25∶2∶2∶71)能使芍药苷和其他杂质峰达到更好的分离。
本法测定芍药苷的含量简便、准确、快速、重现性好,可为四物胶囊质量控制提供依据。
[参考文献]
[1]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005.68,422.
[2]蒋国强,杨水新,叶勇.RP-HPLC法测定生白芍免煎饮片中芍药苷[J].中草药,2007,38(8):1190-1191.
(收稿日期:2008-03-31)
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