HPLC法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量

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【摘要】目的：建立小儿氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的高效液相色谱（hplc）含量测定方法。方法：采用Agilent HC-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），以流动相为甲醇-磷酸缓冲液（称取磷酸氢二钾3.4g,加0.05%三乙胺，加水1000ml，磷酸调PH=4.0）（10:90）为流动相，紫外检测波长为210nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，进样量为10μl。结果:对乙酰氨基酚在10μg/ml～140μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为：A=28.51C+31.13 r=0.9998，平均回收率为99.74%，；马来酸氯苯那敏在1μg/ml～8μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为：A=23.617C+0.1903r=0.9999，平均回收率101.73%。结论：该方法简便、快速、准确，为对乙酰氨基酚与马来酸氯苯那敏含量测定提供了一种方法。

【关键词】HPLC法;小儿氨酚黄那敏颗粒;对乙酰氨基酚;马来酸氯苯那敏;含量测定

【中图分类号】R969.1【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)12-0018-02

Determinate the content of Paracetamol and Chlorphenamine Maleate in Xiao'er

Anfen Huang Namin Kernel by HPLC

SHI Meng,YAN Ling,GU Rongbin

(Guangzhou HaiRui Pharmaceutical Co., Ltd.,Guangdong,Guangzhou,510663)

【Abstract】 objective:To establish a method for the determination of Paracetamol and Chlorphenamine Maleate in Xiao'er Anfen Huang Namin Kernel by HPLC。method:The chromatographic column was Agilent HC-C18（4.6mm×250mm，5μm）.The Mobile phase was made up of acetronitrile- anhydrous di-potassium hydrogen phosphate- triethylamine(10：90：0.05).The UV detection wavelength was set at 210 nm.The flow rate was 1.0ml•min-1 .The column temperature was 30℃。results:The calibration curves were linear in the range of 10μg/ml～140μg/ml for Paracetamol(r=0.9998)，1μg/ml～8μg/ml for Chlorphenamine Maleate (r=0.9999)，The average recoveries were 99．73% with RSD of 0.94%;101.73% with RSD of 0.96%。Conclusion:The proposed method appeared to be simple，rapid，sensitive and accurste．It is available to the quality control of Xiao’er Anfen Huang Namln Granules。

【Keywords】HPLC；Xiao'er Anfen Huang Namin Kernel；Paracetamol；Chlorphenamine Maleate；Determination

小儿氨酚黄那敏颗粒是一种适用于缓解儿童普通感冒及流行性感冒引起的发热、头痛、四肢酸痛、打喷嚏、流鼻涕、鼻塞、咽痛等症状常用的复方制剂。现行标准[1]中仅采用紫外-可见分光光度法测定对乙酰氨基酚的含量，专属性不强，结果重现性差，且未控制马来酸氯苯那敏的含量，因此产品质量可控性差。为更有效地控制产品检验过程，本文建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）对小儿氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏含量进行测定，结果准确有效，为该产品的质量控制提供实验依据。

1仪器与试药

1.1仪器Agilent 1100高效液相色谱仪（G1311A四元梯度泵，G1367A自动进样器，G1316A柱温箱，G1379A真空在线脱气机，工作站Chemstation for LC，美国安捷伦公司），分析天平（XS205，梅特勒-托利多仪器上海有限公司），KQ-250B型超声波清洗器。

1.2试药对乙酰氨基酚对照品（100018-200408，中国药品生物制品检定所）；马来酸氯苯那敏对照品（100047-200305，中国药品生物制品检定所）；甲醇（色谱纯）（Fisher Scientific公司）；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯；小儿氨酚黄那敏颗粒（09010502、09011501、09020701，扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司）。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Agilent HC-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-磷酸缓冲液（称取磷酸氢二钾3.4g,加0.05%三乙胺，加水1000ml，磷酸调PH=4.0）（10：90）；溶剂：流动相；紫外检测波长：210nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：10μl。以峰面积外标法定量，理论塔板数以对乙酰氨基酚计算不得低于3000。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品贮备溶的制备①精密称取对乙酰氨基酚对照品100.06mg于100ml量瓶中，加流动相适量，超声溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。②精密称取马来酸氯苯那敏对照品25.63mg于250ml量瓶中，加流动相适量，超声溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2供试品溶液的制备精密称取装量差异项下的样品适量（约相当于对乙酰氨基酚40mg）置50ml量瓶中，加流动相适量，超声溶解，加流动相稀释至刻度，过滤，取续滤液，得样品（1）；精密移取续滤液5ml至100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，得样品（2）。【样品（1）用于测定马来酸氯苯那敏含量，样品（2）用于测定对乙酰氨基酚含量】

2.2.3专属性试验溶液的制备按其工艺处方比例制备不含对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的阴性样品溶液，照上述样品溶液的制备制成专属性试验溶液。

2.3专属性试验精密吸取对乙酰氨基酚对照品贮备液、马来酸氯苯那敏对照品贮备各6ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别吸取配制好的对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏对照品溶液和按上述供试品溶液制备、专属性试验溶液制备好的样品溶液、专属性试验溶液注入液相色谱仪并记录色谱图。结果在专属性试验溶液的色谱图中并没有出现对乙酰氨基酚及马来酸氯苯那敏对应的色谱峰，证明辅料不存在对样品的干扰。（结果见图1、图2）

2.4线性关系考察精密吸取对乙酰氨基酚对照品贮备液溶液1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0m、8.0ml、10.0ml、12.0ml、14.0ml，马来酸氯苯那敏对照品贮备液溶2.0ml、4.0ml、6.0m、8.0ml、10.0ml、12.0ml、14.0ml、16.0ml液置于100ml容量瓶中，加流动相至刻度，定容,摇匀，得对乙酰氨基酚对照品浓度为10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、100μg/ml、120μg/ml、140μg/ml和马来酸氯苯那敏对照品溶液浓度为1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml、7μg/ml、8μg/ml的系列标准溶液，按上述色谱条件进样分析，每次进样均为10μl.，以峰面积A对浓度C进行回归，乙酰氨基酚对照品溶液浓度范围10～140μg/ml.，回归方程为：A= 28.51C +31.13 r=0.9998马来酸氯苯那敏对照品溶液浓度范围1～8μg/ml得回归方程为：A= 23.617C +0.1903r=0.9999

2.5精密度试验分别精密吸取对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏对照品溶液，重复进样6次，其峰面积的RSD%分别为：0.2%、0.5%，结果表明：该仪器精密度良好。

2.6稳定性试验取已处理好的同一供试品溶液，每隔2小时测定1次，共测7次，对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的峰面积的RSD%分别为：0.70%,1.11%，结果表明：本品在12h内稳定性良好。

2.7回收率试验取上述不含对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的阴性对照溶液，按标示量的80%、100%、120%加入对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏对照品溶液适量，进样，在上述色谱条件下测定对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量并分别计算回收率。结果显示马来酸氯苯那敏平均回收率101.73%，RSD为0.96％；对乙酰氨基酚回收率99.74% ，RSD为0.96％，结果表明：两者回收率良好。（分别见表1、表2）。

2.8样品含量测定取上述对照品溶液和样品溶液，按上述色谱条件测定，用峰面积外标法计算含量，结果见表3。

3讨论

本试验通过将对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏在紫外-可见分光光度仪下波长扫描[2] [3]，并对不同波长进行比较，最终选择检测波长210nm。

曾经选用流动相乙腈-0.5%磷酸溶液[4] 、乙腈-0.05mol/L的磷酸二氢钾缓冲溶液为流动相，乙腈、甲醇、流动相为溶剂，结果各组分之间的分离度不理想，有严重的拖尾现象。以甲醇-磷酸缓冲液（称取磷酸氢二钾3.4g,加0.05%三乙胺，加水1000ml，磷酸调PH=4.0）（10:90）为流动相的分离效果较好，样品主峰达到良好的基线分离，峰型良好，在二极管阵列检测器下对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏峰进行了三维图谱扫描[5]，对峰纯度进行检查，结果表明色谱峰的纯度良好，两峰中均不含杂峰。

经过方法学考察，表明该方法具有良好的线性、精密度、稳定性、和准确度。可对小儿氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏的含量进行有效、准确定量，对产品进行有效地质量控制。

参考文献

[1]国家药品监督管理局.WS-10001-(HD-0214)-2002(试行).小儿氨酚黄那敏颗粒试行标准[S].

[2]周静安.高效液相法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中二组分的含量[J].中国现代应用药学杂志,2005，22（5）：416.

[3]翁水旺.高效液相色谱法测定酚麻美敏口腔崩解片中对乙酰氨基酚、氢溴酸右美沙芬、盐酸伪麻黄碱和马来酸氯苯那敏4组分的含量[J].现代食品与药品杂志,2006,16（2）:695-698

[4]黄诺嘉，罗丽娟.HPLC测定扑感片中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量[J].中成药,2007,29(10)：1462-1465

[5]J．D．Foumemn．A Chron～tospectroscopic Method for Analyzing the Signals Generated During High Performance Liquid Chromatography with Diode-Aray Detection．J．Chrom．Sci．，2001，39(4)：160

(收稿日期：2009.03.10)