葛花水提取液对蚕豆根尖细胞微核率的影响

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摘要：目的探讨葛花水提取液对蚕豆根尖细胞微核率的影响。方法用不同浓度的葛花水提取液处理未添加或添加环磷酰胺溶液的蚕豆根尖样品，经镜检测算细胞微核率。结果葛花水提取液浓度为1.0 gmL-1时，由自然诱导或环磷酰胺诱导的蚕豆根尖细胞微核率最低，分别为4.40 ‰和11.11 ‰；对蚕豆根尖细胞微核的抑制率达到最高，分别为79.07%和53.90%。结论葛花水提取液可有效地抑制蚕豆根尖细胞微核的产生，且抑制作用随着葛花水提取液浓度的增大而增强，表明葛花水提取液具有抑制遗传毒性的作用。

关键词：葛花；提取液；蚕豆；微核率

中图分类号：S529文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)07-0013-03

Effect of Water Extract of Flos Puerariae on Micronucleus Formation in Vicia faba Root Tip Cells

XIA Ling, CHEN Jing, DING Xiao-wen

(College of Food Science, Southwest University, Chongqing 400716, China)

Abstract：Objective To approach the effect of water extract of Flos Puerariae on micronucleus formation in Vicia faba root tip cells. Methods The root tips of Vicia faba with cyclophosphamide or without cyclophosphamide were treated with different concentrations of water extract of Flos Puerariae and the microscope was used for the examination of micronucleus formation. Results When the concentration of water extract of Flos Puerariae was 1.0 gmL-1, the micronucleus formation(MCN‰)in root tip cells which was created naturally or induced with cyclophosphamide was lowest, 4.40‰ and 11.11‰ respectively; the inhibition rate on micronucleus formation was tallest, 79.07% and 53.90%, respectively. Conclusion The water extract of Flos Puerariae can effectively inhibit the creation of root tip cells micronucleus of Vicia faba and the inhibitory action of the water extract of Flos Puerariae can be strengthened along with the increasing concentrations of itself, which indicates the water extract of Flos Puerariae has an inhibitory effect on hereditary toxicity.

Key words：Flos Puerariae; water extract; Vicia faba; micronucleus rate

葛花（Flos Puerariae）为豆科植物野葛［Pueraria lobata (Willd.) Ohwi］、甘葛藤（Pueraria thomsonii Benth.）的花，异名葛条花[1]，具有解酒醒脾的功能，能有效抑制伤酒发热烦渴、不思饮食、呕逆吐酸、吐血、肠风下血等症状[2]。现代药理研究表明，葛花可降低血液中的乙醇浓度[3]。国内学者曾开发了以葛花为主要材料的醒酒保健品“葛花露”。葛花还具有保护肝脏以及调节血糖、血脂的作用，兼具抗肿瘤、抗诱变、抗幽门螺杆菌、抗过敏等功效。

目前对葛花的研究多为其解酒功能及其黄酮、葛花苷等化学成分，对其水提取液遗传毒性的研究很少。我们通过蚕豆根尖微核实验，研究了葛花水提取液对环磷酰胺诱导及自然诱导的蚕豆根尖微核率的影响，揭示了葛花水提取液抑制遗传毒性方面的功能，此研究结果将使此传统药物在防病治病中起更大的作用。

1材料和方法

1.1材料与试剂

葛花（重庆市北碚中医院药房）；蚕豆（重庆市天生桥市场，无洞无虫害）。无水乙醇、冰醋酸、碱性品红、环磷酰胺、偏重亚硫酸钠等试剂均为分析纯。

1.2仪器

XSN-3G型显微镜（购自重庆光电仪器有限公司）。

1.3实验方法

1.3.1葛花水提取液的制备[4]称取葛花100 g，加入蒸馏水约700 mL，100℃煮沸浸提0.5～1 h，过滤；重复提取3次，合并滤液浓缩、定容到100mL，得1 mL溶液中含葛花1.0 g的葛花水提取液，冷冻贮存备用。

1.3.2蚕豆根尖细胞微核率的测定[5]选择饱满、大小均匀的蚕豆种子置入蒸馏水浸泡1 d， 25 ℃恒温保温，12 h换水1次。待根长至2～3 cm时，将５根蚕豆分作1组，放入培养皿。实验1组分别加入0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 g・mL-1 6种浓度的葛花水提取液，实验2组在分别加入上述6种浓度葛花水提取液的基础上，再向每个样品中加入10μg・mL-1环磷酰胺溶液5 mL；空白组为蒸馏水，对照组为10μg・mL-1环磷酰胺溶液5 mL，待测液能浸泡住根尖即可。盖上一层用蒸馏水润湿过的脱脂棉，处理4～6 h。染毒后，用蒸馏水洗涤3次，经固定、染色、取根尖制片，镜检，统计细胞微核率（micronucleus，MCN）。

1.4数据分析处理

实验数据为5次测得的平均值。方差分析由Excel （2003）统计分析软件得出。

2结果与分析

2.1不同浓度葛花水提取液对蚕豆根尖细胞微核率的影响

用不同浓度的葛花水提取液处理蚕豆根尖细胞，分析葛花水提取液对蚕豆根尖细胞微核有无诱导作用及对微核的抑制率。见表1、图１。

由表1可见，不同浓度的葛花水提取液处理的蚕豆根尖细胞微核率与阴性对照组之间有极显著性的统计学差异（P

表1葛花水提取液浓度对蚕豆根尖细胞微核率的影响

葛花水提取液浓度/g・mL-1

图1 葛花水提取液浓度与抑制率的关系

由图1可见，抑制率随葛花水提取液浓度升高而增强，浓度为0.1～0.6 g・mL-1时，抑制率升高程度最大，为12.07 %～63.33 %，几乎呈线性上升变化趋势；浓度在0.6～1.0 g・mL-1时，抑制率随葛花水提取液浓度升高而增强的趋势有所延缓， 1.0 g・mL-1时，抑制率为79.07％。

以上结果表明，葛花水提取液对蚕豆根尖细胞微核的产生没有诱导作用，反而具有显著的抑制作用。

2.2不同浓度葛花水提取液对环磷酰胺诱导的蚕豆根尖细胞微核率的影响

环磷酰胺是一种染色体断裂剂，可使遗传物质损伤产生染色体片段即微核等异常现象。

用不同浓度的葛花水提取液处理环磷酰胺诱导的蚕豆根尖细胞，通过测算细胞微核率及抑制率分析葛花水提取液浓度对遗传毒性的影响，见表2、图2。

由表2可见，不同浓度的葛花水提取液均能使环磷酰胺诱发的微核率显著下降。方差分析表明，各浓度的葛花水提取液与阳性对照组之间均有极显著的统计学差异（P＜0.01），且随着葛花水提取液浓度升高，蚕豆根尖细胞产生的微核率降低，葛花水提取液浓度从0.1 g・mL-1递增到1.0 g・mL-1时，微核率从19.71‰降到11.11‰。

表2 葛花水提取液浓度对环磷酰胺诱导的蚕豆根尖细胞微核率的影响

葛花水提取液浓度/g・mL-1

图2 添加环磷酰胺的葛花水提取液浓度与抑制率的关系

由图2可见，抑制率随葛花水提取液浓度升高而增强，浓度从0.1 g・mL-1递增到1.0 g・mL-1时，抑制率从18.23％上升到53.90％。

以上结果表明，葛花水提取液对环磷酰胺诱导的蚕豆根尖细胞微核均有显著的抑制作用，证明葛花水提取液具有抑制遗传毒性的作用。

3讨论

突变是癌变的前提，研究突变的抑制作用有利于预防癌症的发生。本实验证明了葛花水提取液对蚕豆根尖不但没有致突变作用，反而具有抑制遗传毒性的作用。但葛花水提取液中的何种物质能够抑制突变，尚需进一步研究。

中药葛花一直用于解酒，其中黄酮、皂苷等有效成分有很强的药理活性，但研究尚不够深入。随着实验技术与条件的不断成熟和发展，对葛花化学成分的鉴定、药理作用及临床方面的研究会进一步开展。通过深入探讨其有效成分及其作用机制，评价其质量，将能开发出新的药物剂型和保健品，在医疗、保健等方面开辟更广阔的用途。

参考文献

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会. 中华本草(4)[M]. 上海：上海科学技术出版社，1999：619.

[2]江苏新医学院. 中药学大辞典(下册)[M]. 上海：上海科学技术出版社，1994：2307.

[3]Han Y O, Han M J, Park S H, et al. Protective effects of kakkalide from Flos Puerariae on ethanol-induced lethality and hepatic injury are dependent on its biotransformation by human intestinal mieroflora[J]. J Pharmacol Sci, 2003, 93(3): 331-336.

[4]牟德华，郑建华. 葛根、葛花保健饮料制作工艺[J].农村实用科技，2001，12：29.

[5]孔志明.环境毒理学 [M]. 第２版，南京：南京大学出版社，2004.

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