HPLC法测定苦甘颗粒中盐酸麻黄碱的含量

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【摘要】目的:建立高效液相色谱法测定苦甘颗粒中盐酸麻黄碱的含量。方法:用C18柱(Hypersil ODS柱,4.6mm×250mm,5μm)。流动相为:乙腈-0.1%磷酸溶液(5∶95)为流动相;流速1.0mL・min-1;检测波长210nm。结果:盐酸麻黄碱进样量为0.03～0.32μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9990),平均回收率为99.8%,RSD为2.8%。结论:该法准确、可靠、重复性好,为苦甘颗粒的质量控制提供了依据。

【关键词】苦甘颗粒;盐酸麻黄碱;高效液相色谱法

doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.09.396文章编号:1006-1959(2010)-09-2622-02

苦甘颗粒系由麻黄、黄芩、苦杏仁、黄芩、甘草等组成的中药制剂,具有疏风清热、宣肺化痰、止咳平喘等功效。此产品收载于卫生部药品标准中药成方制剂第10册,原质量标准只有两个简单的理化鉴别,无法进行有效的质量监控,为了更好地控制该药品质量,研究将对该制剂中的主药麻黄作为含量测定对象,根据文献[1-2]现采用高效液相色谱法对该药中盐酸麻黄碱进行含量测定。

1.仪器与试药

1.1仪器:美国高效液相色谱仪(Waters510泵,Waters484紫外检测器,WatersU6k-037378进样阀,Echrom98色谱数据处理工作站一大连依利特科学仪器有限公司。

1.2试药:盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号:171241-200803),供含量测定用;乙腈为色谱纯、磷酸为分析纯;水为重蒸馏水;苦甘颗粒样品由河北恒祥药业提供,规格4g/袋;其余试剂均为分析纯。

2.方法和结果

2.1色谱条件:色谱柱:HypersilODSC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(5∶95);检测波长:210nm;柱温:室温;流速1.0mL/min-1,进样量10μL。在此条件下,盐酸麻黄碱保留时间约为20min,理论板数按橙皮苷计算不低于2000。

2.2溶液制备:

2.2.1对照品溶液:精密称取盐酸麻黄碱对照品适量,加甲醇制成每1mL含8μg的溶液,摇匀,作为对照品溶液。吸取10μL检测。

2.2.2供试品溶液:取装量差异项下本品适量,研细,取细粉约4g,精密称定,加0.1mol/L的盐酸溶液约20mL,超声(150w,40kHz)30min,取出,放冷,用氨试液调pH值至12-13,用乙醚提取3次,每次20mL,合并乙醚液,加1%盐酸甲醇溶液2mL,摇匀,挥干,残渣加甲醇,使溶解并转移至10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。吸取10μL测定,各个组分分离良好。

2.2.3阴性对照品溶液:精密称取阴性对照品约4g,同上法制成盐酸麻黄碱阴性对照溶液,精密量取10μL,注入液相色谱仪,(见图1-图3)。阴性对照液在盐酸麻黄碱峰位置无色谱峰,故定量不受其他色谱峰干扰。

图1盐酸麻黄碱对照品图谱

图2苦甘颗粒中不含盐酸麻黄碱的阴性图谱

图3苦甘颗粒图谱

2.3标准曲线的制备:精密称取盐酸麻黄碱对照品,加甲醇制成浓度依次为:0.003、0.006、0.008、0.016、0.032mg/mL的溶液,各精密吸取10μl,依次进样,记录色谱图,以进样量(μg)对峰面积进行线性回归,得回归方程Y=13302X+12197,r=0.9990。盐酸麻黄碱在进样量0.03～0.32μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.4方法重复性:同一批样品,精密称取5份,按2.2.2的方法依法操作,结果RSD(%)=1.86%(n=5),符合规定。2.5精密度试验:精密吸取上述对照品溶液,重复进样5次,测定峰面积分别为676039、682592、690081、685424和659125,RSD为1.54%(n=5)。

2.6稳定性试验:取苦甘颗粒(批号080612),按2.2.2项下方法制备供试液,按2.1色谱条件分析于0、1、2、4和6h,分别精密吸取供试液10μL进样。测定峰面积依次为421266、425080、426012、426986和427507,RSD为0.58%。表明样品在6h内稳定。

2.7加样回收率试验:称取已知盐酸麻黄碱含量的本品,研细,取细粉适量(约为含量测定的1/2量)精密称定,共6份,分别置于锥形瓶中,精密加入一定量的盐酸麻黄碱对照品溶液(16μg/mL),按照含量测定供试品处理方法制备供试品溶液,测定,计算总量,结果平均回收率为99.8%,RSD为2.8%,均符合规定。

2.8样品含量测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定,以面积外标法计算盐酸麻黄碱含量。结果样品(080612、081003、081202)中,盐酸麻黄碱含量分别为37.7、34.9、34.9?g/袋。RSD=3.8%,符合规定。

3.讨论

3.1选用乙腈-0.1%磷酸溶液(5:95)为流动相,使盐酸麻黄碱峰的保留时间较短(20min),且分离度好。

3.2含量限度的计算根据样品测定结果,按投料药材计算平均转移率为62%,考虑到投料药材不同及工艺的波动,以此限度计算,应将制剂中盐酸麻黄碱限量暂定为不低于上述平均转移率80%,即盐酸麻黄碱总量每袋不得低于28.5mg。为此4g/袋规格的苦甘颗粒质量标准提供了可行的量化指标。

参考文献

[1]卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂(第10册)[S].北京:人民卫生出版社,1995,82.

[2]王玉安,徐国庆,王卫峰,冯一凡.hplc法测定咳喘宁颗粒中盐酸麻黄碱的含量[J].陕西中医,2006,27(10):1288.