高效液相色谱―蒸发光散射检测法对健天颗粒中黄芪甲苷含量的测定

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【摘 要】 目的：探究对健天颗粒当中的黄芪甲苷含量应用高效液相色谱-蒸发光散射检测法进行测定的效果。方法：使用Agilent Eclipse XDB-C18柱对健天颗粒进行检测。结果：当健天颗粒中黄芪甲苷进样含量0.98～4.9ug时，和峰面积积分值有良好的线性关系，平均加样回收率达到99.1%。结论：使用高效液相色谱-蒸发光散射检测方法对健天颗粒中黄芪甲苷含量进行测量，能够准确了解其中的数据，有良好的重复性，对健天颗粒的质量控制有重要的临床意义。

【关键词】 高效液相色谱-蒸发光散射检测法；健天颗粒；黄芪甲苷含量

健天颗粒是一种中药制剂，主要成分为灵芝、黄芪以及甘草等中药，在临床上主要应用于肿瘤患者的辅助治疗，自身有着突出的扶正固本效果，最大程度地提高患者自身的免疫功能，降低肿瘤患者在接受相应治疗诸如外科手术治疗、化学药物治疗、放射治疗以及免疫治疗后出现不良反应事件的概率，大幅度提高患者的生存质量并有着减毒与增效的临床效果[1]。健天颗粒的质量直接关系到患者的生命健康，因此，需要对其严格控制。本文对健天颗粒中的黄芪甲苷含量应用高效液相色谱-蒸发光散射检测法进行检测的效果进行分析。现总结如下。

1 仪器与试药

本次研究中所使用仪器为产自美国Dionex公司的UltiMate 3000型高效液相色谱仪器，该仪器主要包括有蒸发光检测器以及液相色谱工作站；产自德国Sartorius公司的BP615型电子天平；产自上海亚荣生化仪器厂的RE-52AA型旋转蒸发仪；产自上海科导超声仪器有限公司的250H型超声波清洗仪。本次健天颗粒药物产自广东省药材公司，经过相关鉴定，结果显示该药物符合《中国药典》标准。

2 方 法

2.1 色谱条件 本次研究色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱，参数具体为（250×4.6）毫米，5um；流动相为乙腈-四氢呋喃-水，之间的比例为27∶4∶69；流速设置为每分钟1毫升；柱温设置在35℃；检测器的温度设置在40℃；氮气压力控制为0.41Mpa。

2.2 溶液制备 取出适量的黄芪甲苷。对照品，称量之后加入剂量为0.5甲醇的溶液1毫升，可以得到对照品溶液。将健天颗粒称量出4g，然后放置在索氏提取器当中，加入甲醇剂量共40毫升，放置一夜之后加入适量甲醇，对其进行加热回流处理，共需4h，将其提取浓缩到粉状，残渣加水10ml，然后微热处理使其溶解。使用水饱和正丁醇振荡提取共4次，每次提取40ml，然后与正丁醇液合并起来。使用氨试液对其进行清洗，每次40ml共需清洗2次。将氨液取出之后蒸干正丁醇液，在残渣中加入纯净水5ml，溶解后放冷，将水液处理掉之后使用30ml的40%乙醇洗脱。处理完洗脱液后，再使用80ml的70%乙醇洗脱，将洗脱液收集起来并蒸干，使用甲醇溶解之后将其转移到5ml量瓶当中，加入甲醇然后摇匀就能够得到供试品溶液。

2.3 方法学考察[2-4] 线性关系考察：使用精密的仪器将对照品溶液吸取出不同剂量，分别为2uL、4uL、6uL、8uL以及10uL，将其注入到液相色谱仪当中。每个剂量对照品溶液均测量3次，并对其峰面积进行测定。结果显示，黄芪甲苷进样量控制为0.98～4.9ug时拥有良好的线性关系。

稳定性试验：使用仪器对同一个供试品溶液进行吸取，剂量为10uL，每间隔2h对其进行1次测定，共需要测定12次。结果显示供试品溶液在24h之内能够保持稳定。

精密度试验：将同一个供试品溶液进行重复进样，共需6次，对其峰面积进行测定，结果显示仪器精密度效能良好。

重复性试验：将同一批样品取出，然后根据拟定的方法对其进行独立测定，共需5次，结果显示拟定的方法重复性良好。

2.4 样品含量测定 本次研究总共对3批样品进行测量，了解其黄芪甲苷含量，结果测定3批样品含量分别为0.053%、0.053%以及0.052%，样品均符合质量标准。

2.5 加样回收试验 将已经知道含量的样品取出，共称取5份出来，每份剂量大约为2g，加入一定剂量的黄芪甲苷对照品溶液，该溶液剂量为每升0.49g，对其进行混匀。对其回收率进行计算，见表1。

3 讨论

已经有相关研究对比例为1∶2的乙腈-水、比例为2∶3的甲醇-水、比例为1∶3的四氢呋喃-水等流动相进行测定，对于药物当中黄芪以及相关制剂中各个成分分离状况还有灵敏度进行测试[6]。在本次研究中，对比例为27∶69∶4的乙腈-水-四氢呋喃进行测试，证明其分离效果良好，除此之外出峰的保留时间满足相关需要，显示了在流动相当中加入微量的四氢呋喃能够对其分离度以及色谱峰峰型进行有效的改善，有效提升监测结果准确度。本次研究显示，使用高效液相色谱-蒸发光散射检测方法对健天颗粒中黄芪甲苷含量进行测量，能够准确了解其中的数据，有良好的重复性，对健天颗粒的质量控制有重要的临床意义。

参考文献

[1] 唐德智，莫迎.小儿健脾开胃合剂中黄芪甲苷的含量测定[J]. 中国药业，2010，13（6）：104-105.

[2] 李飞.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定心脑补益口服液中黄芪甲苷含量[J].中国药业，2011，25（5）：251-252.

[3] 孙健，刘泓，范斌.HPLC-ELSD法测定百草精口服液中黄芪甲苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2011，7（1）：136-137.

[4] 王欣.HPLC-ELSD法测定阿胶黄芪口服液中黄芪甲苷的含量[J]. 现代中西医结合杂志，2011，18（13）：155-156.

[5] 董红红.HPLC-蒸发光散射检测法测定贞芪扶正颗粒中黄芪甲苷的含量[J].中国药房，2012，15（6）：147-148.

[6] 李静，林晓，高辉.HPLC-ELSD法测定阿胶补血口服液中黄芪甲苷的含量[J].齐鲁药事，2011，14（5）：145-146.