绿原酸\连翘苷\黄芩苷的含量

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摘要：目的：建立同时测定双黄连注射液中绿原酸、连翘苷和黄芩苷的HPLC方法。方法：色谱柱为Agilent ZORBAX XDB C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.2 ％磷酸溶液，线性梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长为324 nm、280nm，柱温30 ℃。结果：绿原酸、连翘苷、黄芩苷的线性范围分别为0.093～1.860、0.022～0.440、0.328～6.560μg，三种成分的含量分别为绿原酸0.043mg/mL、连翘苷0.13mg/mL、黄芩苷7.90mg/mL。结论：该方法简便、快速、准确，可作为双黄连注射液的质量控制方法。

关键词：双黄连注射液；高效液相色谱法；绿原酸；连翘苷；黄芩苷

双黄连注射液由金银花、黄芩及连翘三味中药提取精制而成，具有清热解毒、疏风解表的功效。用于外感风热所致的感冒、上呼吸道感染、轻型肺炎、扁桃体炎等[1]。中国药典（2010版）对3种成分的测定都采用在不同流动相系统下进行测定的方法，这在很大程度上给分析带来麻烦，而目前文献报道的有关双黄连注射液中指标成分含量测定方法主要是同时测定绿原酸和黄芩苷的含量或测定某一种成分的含量，或相对较复杂的流动相体系测定3种成分[2～5]。本文采用线性梯度洗脱高效液相色谱法，同时测定双黄连注射液中绿原酸、连翘苷和黄芩苷的含量，方法简便、快速、准确，可用于双黄连注射液的质量控制。

1仪器与材料

Agilent 1100型高效液相色谱仪，HP1100型二极管阵列检测器，Agilent Chem-Station色谱工作站（美国Agilent公司）；XS205电子天平（梅特勒-托利多公司）。

绿原酸（批号110753-200413）、连翘苷（批号110821-200711）、黄芩苷（批号110715-201016）对照品均购于中国食品药品检定研究院。双黄连注射液（哈尔滨珍宝制药有限公司，批号：20091123，规格：每支20mL）。甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为娃哈哈纯净水。

2方法与结果

2.1色谱条件及系统适应性试验

色谱柱为Agilent ZORBAX XDB C18柱（250mm

×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇（A）-0.2％磷酸溶液（B）线性梯度洗脱，0～35min，A：10％～65％；检测波长：0～16min，324nm，16-35min，280nm；柱温 30℃，流速1.0mL/min，进样量为10μl。在上述色谱条件下，3种待测组分与邻近组分达到了基线分离，各对照品的理论塔板数均大于3000。色谱图见图 1。

2.2混合对照品溶液的制备

分别精密称取绿原酸、连翘苷和黄芩苷对照品适量，加50%甲醇溶解，制成浓度为0.093、0.022、0.328 mg/mL的混合对照品溶液，备用。

2.3供试品溶液的制备

精密吸取双黄连注射液2mL置于50mL容量瓶中，加50％甲醇适量，超声处理5min，放置至室温，加50％甲醇稀释至刻度，过0.45μm微孔滤膜，即得。

2.4线性关系考察

精密吸取绿原酸、连翘苷和黄芩苷混合对照品溶液1、5、10、15、20μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行分析，记录色谱图。以峰面积为纵坐标， 各组分的质量为横坐标，进行线性回归，得回归方程：绿原酸Y=3042.5X-7.2633；r＝0.9999；连翘苷Y=583.76X+

1.2042，r＝0.9999；黄芩苷Y= 3256.2X+175.3，r＝0.99

98；结果表明绿原酸、连翘苷和黄芩苷分别在0.093～1.860、0.022～0.440、0.328～6.560μg线性关系良好。

2.5精密度试验

精密吸取绿原酸、连翘苷和黄芩苷混合对照品溶液注入液相色谱仪，连续进样5次，绿原酸、连翘苷、黄芩苷峰面积RSD分别为0.98%、1.32%、0.75%。

2.6重复性试验

取双黄连注射液，按“2.3”项下方法平行制备5份供试品溶液，进样测定，结果绿原酸、连翘苷、黄芩苷质量分数的RSD分别为1.27%、0.85%、1.53%。

2.7样品测定

取双黄连注射液，按“2.3”项下供试品溶液制备方法制备，按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，结果为绿原酸0.043mg/mL、连翘苷0.13mg/mL、黄芩苷7.90mg/mL。

3讨论

3.1检测波长的选择

经二极管阵列检测器全波长扫描，得各待测物质最大吸收波长分别为：绿原酸为324nm，连翘苷为280nm，黄芩苷为274nm，由于连翘苷的含量较低，并且在324nm基本无吸收，因此确定连翘苷与黄芩苷的检测波长为280nm；但绿原酸在280nm左右吸收弱，而且在注射液中绿原酸含量很低，故绿原酸的检测波长设定为324nm。综合考虑各峰高及峰面积的比例，选择324nm和280nm为检测波长，在不同的时间段进行双波长切换检测。

3.2流动相的考察

试验中分别比较甲醇-1％冰醋酸、乙腈-1％冰醋酸、甲醇-0.2％磷酸、乙腈-0.2％磷酸等不同流动相，并进行梯度洗脱考察。通过比较发现以甲醇-0.2％磷酸为流动相，在0～35min内进行线性梯度洗脱色谱峰峰形较好，3种成分均达到基线分离，而且时间短，操作简便。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[s].北京：中国医药科技出版社，2010：611-615.

[2] 黄敬群，杨娟，李红.高效液相色谱法测定双黄连口服液中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩苷的含量[J].中国中医药信息杂志，2008，15（5）53-55.

[3] 覃薛文.RP-HPLC测定双黄连颗粒中连翘苷的含量[J].中国药师，2008，11（5）：550-551.

[4] 林敏.RP-HPLC法同时测定双黄连胶囊中的绿原酸及黄芩苷的含量[J].海峡药学，2006，18（4）：78-79.

本文为江西科技师范学院第四届本科生创业、科研基金资助项目。