高效液相色谱(HPLC)法测定岩黄连注射液中脱氢卡维丁的含量

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[摘要]目的：以高效的液相色谱（hplc）法对岩黄连注射液中其脱氢卡维丁的含量进行测定。方法：色谱柱选取Zorbax-ODS-C18（250mm×4.6mm，5um），流动相选取乙腈-0.05mol/L的溶液磷酸二氢钾，设定流速为1.0ml/min，检测波长是347nm，以室温作为柱温。结果：脱氢卡维丁在2.51-75.36ug/ml范围内的线性关系良好，均回收率为99.86%，RSD值为0.58%。结论：高效液相色谱法快速简单，试验重现性较好，可推荐用于对岩黄连注射液中脱氢卡维丁进行定量分析。

[关键词]岩黄连注射液；HPLC法；脱氢卡维丁

岩黄连（Corydalis saxicola Bunting）属于紫堇科中紫堇属的多年生草本类植物。该植物主要分布于我国四川、贵州、云南以及广西等地区[1]。其多生长于石灰岩山区，是石山的特有品种[2]。比较传统的药用部位为全草，其具有高效的安定与镇痛以及消炎和抗菌等作用，临床上多用于肝炎、肝硬化以及肝癌等疾病的治疗。该植物主要成分是右旋白蓬叶碱、小檗碱、岩黄连碱（亦称脱氢卡维丁）和卡维丁等，其中以脱氢卡维丁的含量占最高[3]，为岩黄连其主要的有效成分。近期的研究，主要针对岩黄连其总生物碱的临床应用与引种栽培，另外还有其含量测定以及成分分析等方面进行。本文以高效的液相色谱（HPLC）法对岩黄连注射液中其脱氢卡维丁的含量进行测定，报道如下。

1 实验仪器与试剂用药：

仪器由美国安捷伦公司生产的Agilet1100型号高效的液相色谱仪。广西河在药业有限责任公司生产的岩黄连注射液。而脱氢卡维丁的对照品为中国药品生物制品检定所，批号111667―200401，乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果：

2.1方法：

取ZorbaxODSC18（250毫米×4.6毫米5微米）为色谱柱，采用乙腈-0.05mol/L的溶液磷酸二氢钾作为流动相，其流速为1.0毫L/分钟，其进行检测的波长是347纳米，其柱温是室温。

2.2结果：

在2.51-75.36微克/毫L范围内脱氢卡维丁的线性关系为良好，其平均的回收率是99.86%，其RSD是0.58%。（见图1，表1）

3 讨论：

3.1提取条件与方法的选择：

经过查阅相关文献，对多种提取试验样品的方法作了对比考察。对甲醇与100：1的甲醇-盐酸以及乙醇与100：1的乙醇-盐酸作溶媒的提取进行比较，两者结果没有明显差异。因此，在实验中选取无水乙醇作为提取溶剂。

3.2色谱条件的选择：

岩黄连注射液中其主要的有效成分为脱氢卡维丁，其属于苄基异喹啉类的生物碱，据相关文献报道，应用乙腈：-0.05mol/L，其磷酸二氢钾的水溶液中（调pH等于5.0），以乙腈-0.05mol/L的溶液磷酸二氢钾作为其流动相。所以脱氢卡维丁于此溶液中其最大的吸收可达347nm，经实验的结果证明，于此条件中脱氢卡维丁其保留的时间适宜，同时与相邻其色谱峰能保持有良好的分离度，并适合进行含量的测定。

3.3流动相的选择：

在脱氢卡维丁里的氮原子是碱性的，同固定相的酸性硅醇基之间可进行相互作用，导致其脱氢卡维丁色谱峰拖尾；假如在流动相中若加入三乙胺溶液，则可部分阻断或者竞争硅醇基对实验所产生的影响，最终能明显改善其色谱峰形，而减少拖尾现象。

3.4波长的选择：

脱氢卡维丁的紫外吸收峰共有2个，其中最大的吸收峰在274nm，另外的吸收峰在347nm处。假设被检测的波长是274nm米，会出现杂质峰对脱氢卡维丁其检测形成干扰；而检测波长为347nm时，则没有杂质峰对其干扰，所形成的峰形也较好，所以其分离度与出峰的时间也相对比较的理想。故多选取347nm作为检测的波长。

3.5根据《中华本草》所记载，其中岩黄连是罂粟科植物中石生黄堇的全草，其别名为岩连（四川与云南叫法）和岩胡（贵州叫法）以及土黄连（广西叫法）；其性凉并味苦；可以有止痛止血与利湿清热以及解毒之功效[4]，并主治肝炎与口舌糜烂，以及痔疮出血，腹痛与腹泻痢疾，目翳与火眼等症[5]。而岩黄连其主要的有效成分是生物碱类的化合物，在这类化合物中，可有潜在对抗HBV的活性与肝脏保护的活性。

本文以高效的液相色谱（HPLC）法对岩黄连注射液中其脱氢卡维丁的含量进行测定。结果显示，在2.51-75.36微克/毫L范围内脱氢卡维丁的线性关系为良好，其平均的回收率是99.86%，其RSD是0.58%。综上所述，本法快速简单，并且重现性较好，可适用于对岩黄连注射液中其脱氢卡维丁进行定量分析。

参考文献：

[1]王娟，杜宇，任真等.HPLC-MS/MS法测定岩黄连提取物中脱氢卡维丁的含量[J].南京工业大学学报（自然科学版），2010，32（2）_4.DOI：10.3969/j.issn.1671-7627.2010.02.020.

[2]孙会敏，田颂九.高效液相色谱法简介及其在药品检验中的应用[J].齐鲁药事，2011，30（1）.

[3]黄艳艳，刘道杰.HPLC手性流动相拆分法在分离药物对映体中的应用[J].化学试剂，2007，29（6）_5.

[4]吴秋华，李正平，马晶军等.化学衍生法应用于生物多胺的HPLC荧光检测[J].理化检验-化学分册，2006，42（4）_4.

[5]贾彦波，王清清，宋海峰等.高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MSn）分析生物样品时的基质效应研究[J].军事医学，2011，35（2）.

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