201B中药合剂对大鼠抗肾小球基底膜肾炎病变的影响

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【摘要】 目的 观察201b中药合剂防治大鼠抗肾小球基底膜(GBM)肾炎的疗效。方法 建立大鼠抗GBM肾炎模型。实验分3组：肾炎+201B处理组、肾炎对照组及正常对照组。大鼠一次性尾静脉注射抗GBM抗血清后即刻给予201B中药合剂 (0．46g/(kg•d)，灌胃，至第21天。对照组则给予等量的生理盐水。定期于第4天、第14天和第21天，检测大鼠尿蛋白、血清肌酐和尿素水平，观察肾组织病理学改变。结果 肾炎对照组鼠注射抗血清后于第4天即出现异常蛋白尿，血清肌酐和尿素亦持续上升；肾小球内可见细胞数增加和新月体形成，肾小管内大量蛋白管型，GBM呈不规则增厚。而上述病变经201B中药合剂处理后均明显好转。结论 201B中药合剂能够明显改善大鼠抗GBM肾炎的肾功能。

【关键词】 201B； 抗GBM肾炎；大鼠

Effects of 201B on anti-glomerular basement membrane nephritis in rats SUN Wei, TANG Ren-xian, ZHOU feng, et al.Department of Immunology and Microbiology, Xuzhou Medical College, Xuzhou 221004, China

【Abstract】 Objective To investigate the effects of 201B on anti-glomerular basement membrane(GBM) nephritis in rats. Methods Anti-GBM nephritis model was elaborated by rabbit anti-rat GBM antibody in jection in SD rats in this study. The rats were divided into three groups: 201B treated group(0.46gokg-1od-1,ig), untreated nephritis control group and normal control group. 201B was administered daily after injection of anti-GBM IgG. All the rats were observed urinary protein at the 4th day, the 14th day and the 21st day. At the same time, the kidney specimens were collected. Results Rats injected with rabbit anti-GBM Ab developed heavy proteinuria by 4th days, and serum creatinine and serum urea appeared which kept on the rising. Glmerular hypercellularity, crescents, and protein casts were observed in nephriticrats. By electron microscopy, the thickening of GBM and loss of foot processes were seen. But, all pathological changes obviously turned for the better in 201B treated group. Conclusion 201B could inhibit the progression of rats anti-GBM nephritis.

【Key words】 201B; Anti-GBM nephritis; Rats

人类新月体性肾炎是一种自身免疫性疾病，发病机制复杂。临床上多数患者起病较急，病程迅速，预后较差[1]。由于机体免疫异常，造成了肾炎病变的迅速发展，最终导致患者肾功能衰竭[2]。目前临床上治疗该疾病时，一方面积极对症处理，另一方面使用一些免疫抑制剂(如环孢素A、FK506等)控制疾病的发展，从而缓解病情[3-4]。但经长期大量资料证实，免疫抑制剂用于治疗肾小球肾炎等疾病时，疗效虽满意，可毒副作用较大，且价格昂贵。寻找切实有效的治疗方法急不可待。

201B中药合剂的主要成分是益母草、黄芪和白茅根。此合剂经临床初试30多例肾小球肾炎患者，结果发现既减轻了临床症状，又降低了蛋白尿水平。不过这种合剂对肾炎病变的作用机制尚不十分清楚。本实验在建立大鼠抗GBM肾炎模型的基础上，探讨201B中药合剂对该型肾炎肾组织病变影响，旨在为今后临床用药提供必要的实验依据。

1 材料与方法

1．1 药品 201B中药合剂，湖南天隆生物工程研究所馈赠。其给予剂量为0．46 g/(kg•d)。给予前，用蒸馏水将其配制成4．6g%的水溶液，即将4．6g药量加入100 ml的蒸馏水中，搅拌至全部溶解后，高压灭菌备用。

1．2 动物 正常健康SD大鼠，雌雄不限，体质量180~220 g，徐州医学院动物实验中心提供。

1．3 大鼠GBM抗原及其抗体的制备 由本教研室制备，具体方法参见文献[5]。

1．4 大鼠抗GBM肾炎模型的复制及动物分组处理[5] 取正常健康SD大鼠24只，单笼饲养，实验前测定各鼠24 h尿蛋白总量，结果均无异常。按随机化原则分为3组，每组8只，即：①肾炎+201B处理组：经尾静脉注入兔抗大鼠GBM抗血清（0．5 ml/100g）后，即刻给予201B中药合剂（1 ml/100g，灌胃），1次/d，至第21天末；②肾炎对照组：经尾静脉注入兔抗大鼠GBM抗血清（0．5 ml/100g）后，即刻给予无菌生理盐水(1 ml/100g，灌胃),1次/d，至第21天末；③正常对照组：经尾静脉注入同剂量的非抗体性的正常兔血清后，即刻给予无菌生理盐水(1 ml/100g，灌胃),1次/d，至第21天末。

1．5 主要观察指标

1．5．1 24 h尿蛋白总量、血肌酐（Cr）及血尿素含量的测定 于实验后第4天、第14天和第21天 ，将各组大鼠分别单置于代谢笼内收集大鼠24h全部尿液，采用3%磺基水杨酸浊度定量法进行尿蛋白定量测定。另于实验的第4天、第14天和第21天行各组鼠眼内眦静脉放血，留取血清，严格按照试剂盒说明书进行，经全自动生化分析仪测出血肌酐及血尿素的含量（肌酐和尿素试剂盒购自上海长征康仁医学科学有限公司）。

1．5．2 病理学检查 于实验后第4天、第14天和第21天取各组大鼠肾组织活检，分别行光镜和电镜检查。①光镜：肾切片行HE染色。②电镜：观察肾小球内电子致密物（即免疫复合物，IC）的部位、大小，GBM厚度，及足突融合情况等。并采用多功能测微格印的方法，对GBM的厚度作立体计量学定量分析，具体方法参见文献[5]。

1．6 统计学方法 所有数据均以（x±s）表示，计量资料采用t检验。方差不齐时，取几何均数再进行t′检验。

2 结果

2．1 24 h尿蛋白总量、血Cr及血尿素的改变 肾炎模型组鼠于第4天 24 h尿蛋白总量明显高于正常组鼠（P

2．2 光镜检查 免疫后于光镜下可见：肾炎对照组肾小球内细胞数增多，肾小球体积增大，肾小管内大量蛋白管型；至第21天时，尿囊腔部分闭塞，可见新月体形成，肾小球内细胞数反而减少，出现节段性肾小球硬化，见图1。而201B处理组上述病变在各期均相对减轻；第21天尿时，囊腔内可见少量渗出物，尿囊腔壁层上皮细胞轻度增生，肾小球内细胞数增多，见图2。

2．3 电镜检测 电镜下可见肾炎对照组GBM上电子密度增加，厚度增宽，至第21天，可见GBM厚度增宽更加明显，并见GBM上皮侧有不规则团块状电子致密物沉积，沉积区足突融合，部分区域可见内皮细胞脱落、坏死，见图3。而201B处理组上述病变明显减轻，于第21天可见GBM不规则增厚程度明显减轻，足突细胞和内皮细胞病变情况得到改善，见图4。GBM厚度定量分析结果，见表2。

3 讨论

大鼠抗肾小球基底膜（GBM）肾炎，是利用异体抗GBM抗体直接诱导后产生的具有典型的人类新月体性肾炎病理变化的动物模型。本研究给大鼠一次性尾静脉注射抗大鼠GBM抗血清后第4天，发现大鼠出现了异常的蛋白尿，第14天血Cr及血尿素亦明显升高，之后，尿蛋白、血Cr及血尿素一直维持较高水平；肾组织病变严重，光镜下可见肾小球中大量细胞增生及新月体形成和肾小管中大量蛋白管型；电镜下GBM呈明显的不规则增厚，足突大片融合。上述结果表明，实验所建立的大鼠抗GBM肾炎模型与人类新月体性肾炎病变酷似，故本实验在成功建立该肾炎动物模型的基础上，探讨201B中药合剂防治该肾炎的可能性。

现代药理研究认为：益母草具有延缓组织纤维化，减轻血液高凝状态的作用，从而进一步减轻肾小球内炎症反应，起抗炎、抑制免疫反应的作用；黄芪甘温，可提高机体抗氧化酶活性，且能利尿，又能降低蛋白尿，从而改善肾功能；白茅根扩张血管，改善微循环及抗血小板凝聚作用，减轻肾小球的纤维化，促进肾功能恢复。湖南天隆生物工程研究所根据以上中药药理机制，配伍出以益母草、黄芪和白茅根为主要成分的201B中药合剂，经临床初试疗效很好。本研究利用了201B合剂处理大鼠抗GBM肾炎发现，第14天、24天尿蛋白总量和血尿素明显低于未予处理的肾炎对照组，随后第21天血肌酐亦较肾炎对照组鼠明显降低；通过光镜、电子显微镜观察，肾小球内细胞增生和新月体形成及蛋白管型的数量均明显减少，并未见肾小球硬化、尿囊腔闭塞；GBM不规则性增厚的程度明显减轻，足突细胞和内皮细胞病变情况得到明显的改善；上述结果均表明，201B中药合剂确实可以抑制肾小球内细胞增生和新月体形成，从而减轻大鼠抗GBM肾炎的肾组织损伤，改善其肾功能。对于201B合剂改善免疫功能的确切机制及对大鼠抗GBM肾炎的长期疗效尚有待于进一步的探讨。

参考文献

［1］ Hricik DE, Chung-Park M, Sedor JR. Glomerulonephritis.N Eng J Med, 1998, 339(13): 888-899.

［2］ Tam FW, Smith J, Morel D, et al. Development of scarring and renal failure in a rat model of crescentic glomerulonephritis. Nephrol Dial Transplant, 1999, 14(7): 1658-1666.

［3］ 叶任高，李幼姬.在自身免疫性疾病中使用环孢霉素A的现状. 国外医学•内科分册，1990，17（4）：162-164.

［4］ 汤仁仙，王迎伟，黄瑞,等.普乐可复防治大鼠抗肾小球基底膜肾炎的实验研究. 中国病理生理杂志，2003，19（12）：1631-1634.

［5］ 汤仁仙，简洁，王迎伟.大鼠抗GBM肾炎模型的建立及不同病期的生化指标和肾组织病理学观察. 徐州医学院学报，2003，23（1）：9-13.