反相高效液相色谱法同时测定来曲唑含量及有关物质

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摘要　目的：采用反相高效液相色谱法同时测定来曲唑含量及有关物质。方法：使用Agilent1100型高效液相色谱仪和ZORBAXXDB-C18色谱柱(150×4.6mm，5μm)，在流动相为水：乙腈=60：40、流速为1.0mL／min、紫外检测波长为230n／n的条件下测定来曲唑含量及有关物质。结果：来曲唑含量测定的线性范围为2～100μg／mL，相关系数为0.99996。日内和日间精密度均良好(RSD

关键词　来曲唑　有关物质　RP-HPLC　含量测定

中图分类号：TQ460.72；O657.72　文献标识码：A　文章编号：1006-1533(2010)03-0136-02

来曲唑(letrozole)是Novartis公司开发上市的一种非甾体类芳香酶抑制剂，主要用于治疗晚期乳腺癌。在美国药典(USP)27版中，来曲唑含量和有关物质测定均采用高效液相色谱法(HPLC)梯度洗脱法。但在国内，来曲唑含量测定采用容量滴定法，而有关物质测定采用HPLC法。笔者在实际工作中经对上述两种方法进行比较，建立了更为简便的HPLC方法，可以同时进行来曲唑含量及有关物质的测定。经方法学验证，证实此方法简单、灵敏，专属性强，定量结果准确。

1　仪器与试药

1.1仪器

Agilent1100型高效液相色谱仪，包括G1314AVWD检测器、G1315BDAD检测器、G1311A型四元泵、G1329A型自动进样器、G1316A型柱温箱和G1322A型脱气机。

1.2试药

来曲唑对照品(USPreferencestandard，CATNO：35697；LOT：FOB170；USPROCKVILLE,MD)，来曲唑杂质对照品(USPreferencestandard，CATNO：1356982：LOT：GOD298；USPROCKVILLE,MD)，来曲唑(本公司研制样品)及各中间体(本公司研制)，乙腈(色谱纯)和水(超纯水)。

2　方法与结果

2，1色谱条件

色谱柱：C18(ZORBAXEclipseXDB-C18150×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水--40：60；检测波长：230nm；流速：1.0mL／min；进样量：20μL；稀释剂：流动相。

2.2波长的选择

根据来曲唑与各杂质及中间体在DAD上的光谱扫描可以看出，来曲唑及其杂质在230～240nm有较大吸收，而苄唑在240nm处的吸收较小且对氟苯腈在240nm处几乎没有吸收。考虑以上杂质(即中间体)因素，选定波长为230nm。

2.3专属性试验

分别取来曲唑对照品、来曲唑杂质及各中间体适量，用溶剂溶解、稀释制取每毫升含0.01mg的溶液，进行定位。另取来曲唑对照品、来曲唑杂质及各中间体配制成含来曲唑8μg／mL及含其它各组分4μg／mL的溶液作为专属性试验用溶液。进样测定结果显示，主成分峰不脱尾，理论塔板数大于5000，且能与4个中间体和杂质完全分离，各峰之间的分离度均大于1.5，各组分出峰时间均在主成分峰保留时间2.5倍以内，溶剂对测定无干扰，证明本色谱系统的专属性良好。

此外，再分别取来曲唑精制品适量，分别用2％过氧化氢溶液、1mol／L盐酸溶液和1mol／L氢氧化钠溶液充分浸润后放置24h，在60℃下烘干；另取来曲唑精制品适量，在紫外灯下照射36h，进行破坏试验。测定结果显示，本色谱条件可以将各破坏条件下的降解产物与主成分完全分离，由此进一步证明本色谱系统的专属性良好。

2.4最低检测限

取来曲唑样品适量，用流动相溶解并稀释配置成一定浓度的溶液进行测定，测得其最低检测限为0.2ng。

2.5线性范围

取来曲唑样品20mg至100mL容量瓶中，用稀释剂溶解，摇匀，精密量取1、3、5、7、10、15、25、35、50mL分别置于100mL棕色量瓶中，用稀释剂定容，摇匀。取上述溶液在选定的色谱条件下，进样20μL，记录色谱图，根据峰面积计算，测得数据经线性回归得回归方程：y=113.91x+24.396，r=0.99996，说明来曲唑在2～100μg／mL浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.6精密度和稳定性试验

精密吸取来曲唑样品溶液(浓度为10μg／mL)20μL，注入液相色谱仪，重复进样5次，记录色谱图，发现来曲唑样品峰的RSD值为0.04％。连续测定3d，日间精密度RSD为0.24％。

另外，在第0、第2、第4、第8、第16和第24h分别取10μg／mL的来曲唑样品溶液20μL注入液相色谱仪。记录色谱图，结果见峰面积基本没有变化，RSD为0.22(N=6)，表明样品溶液在24h内稳定性良好。

2.7有关物质测定

取来曲唑样品10mg至100mL容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取适量，加稀释剂制成每1mL中含1μg的溶液作为自身对照溶液。另外，取来曲唑对照品和来曲唑杂质A适量，用稀释剂制成浓度为每1mL含10μg来曲唑和每1mL含2μg来曲唑杂质A的溶液作为系统适用性溶液。分别精密量取供试品溶液与自身对照品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍，且其中来曲唑和来曲唑杂质的分离度应大于1.5。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，则除溶剂峰外，杂质A的峰面积不得大于自身对照溶液主峰面积的0.3％，其它单个杂质不得大于自身对照溶液主峰面积的0.1％，其它总杂质不得大于自身对照溶液主峰面积的0.3％。3批样品测定结果，总杂质分别为0.10％、0.07％和0.03％。

2.8含量测定

取来曲唑样品适量，精密称定，加稀释剂溶解并定量稀释制成每1mL中约含10μg的溶液，精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取来曲唑对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算样品含量。结果显示，3批样品中的来曲唑含量分别为99.06％、98.76％和98.45％。

3　讨论

按USP27版方法使用梯度洗脱法测定来曲唑含量及有关物质，基线有一定的漂移，影响杂质的判断，且色谱柱也需采用非常规的柱子，成本较高，操作较烦琐。国内采用滴定法测定含量，用色谱法测定有关物质，检测的条件不一致，也较繁琐。笔者采用本文方法测定来曲唑含量和有关物质，可以达到满意的效果。经方法学研究，此法简便，结果准确，灵敏度高。

在各专属性试验中，均采用二极管阵列检测器检测来曲唑峰的纯度，结果发现纯度系数均良好，证明本色谱系统的专属性良好。