穿刺活检联合流式细胞仪检测对恶性淋巴瘤诊断和分型临床研究

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[摘要] 目的 探讨穿刺活检联合流式细胞仪检测对恶性淋巴瘤诊断和分型的情况。 方法 回顾性分析 2009年3月～2012年3月在我市两所医院就诊的恶性淋巴瘤患者62例，均进行流式细胞仪检测和穿刺活检。 结果 应用流式细胞仪检测结果为：骨髓受累者55例，其中非霍奇金淋巴瘤45例，霍奇金淋巴瘤10例；应用穿刺活检检测结果为：骨髓受累者28例，其中 6例在流式细胞仪检测中未检测出；具有统计学差异（P < 0.05）。 结论 应用流式细胞仪检测比应用穿刺活检法有更高的准确度，但也有假阴性的现象，所以应该将穿刺活检联合流式细胞仪进行检测，这样能提高准确度。

[关键词] 穿刺活检；流式细胞仪检测；联合检测

[中图分类号] R733.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）18-0106-02

淋巴细胞发生了恶性增生就会形成恶性淋巴瘤。恶性淋巴瘤常见表现为骨髓受累。淋巴瘤的病理类型约70种，主要可分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤这两种类型。在我国，大部分患者为非霍奇金淋巴瘤[1]，约90%。随着社会的进步，人们生活水平的提高，恶性淋巴瘤在近20年来的发病率逐年升高[2]，怎样准确诊断恶性淋巴瘤是临床上亟待解决的难题之一。本文回顾性分析了2009年3月～2012年3月在我市两所医院就诊的恶性淋巴瘤患者62例，目的是研究穿刺活检联合流式细胞仪检测对恶性淋巴瘤诊断和分型的情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2009年3月～2012年3月在我市两所医院就诊的恶性淋巴瘤患者62例，其中男34例，女28例，年龄14～74岁，平均（47.4±2.5）岁；非霍奇金淋巴瘤55例，其中T细胞来源15例，B细胞来源26例，霍奇金淋巴瘤11例， 其余不详。

1.2 检测方法

1.2.1 流式细胞仪检测 抽取骨髓液5 mL，立即加入15 mL肝素抗凝，用流式细胞仪检测。并分离出单个的核细胞，将核细胞进行洗涤，将细胞数量控制在（1～3）×106。再取20支试管，每支试管中加入100 μL的核细胞，依次在每支试管中加入20 μL荧光标记过的单克隆抗体、CD2、CD4、CD5、CD3、CD9、CD10、CD8、CD7、CD34、CD20、CD15等。将这些试管在4℃冰箱里放置15 min，用小鼠血清IgG作为阴性对照。在每支试管中加入2～3 mL的红细胞裂解液[3]，离心20 min，离心后产物用PBS洗涤1～2次。最后用流式细胞仪进行分析。用Cell Quest来分析，先圈定异常幼稚细胞群，计算各细胞表面抗原的阳性百分率，如果被标记的细胞大于总数的20%，则为阳性。

1.2.2 穿刺活检 在患者身上做骨穿，抽取3 mL骨髓液，进行涂片和染色，在显微镜下观察。

1.3 统计学处理

应用 SPSS 17.0软件来进行数据的统计及处理，计数资料采用卡方检验，P < 0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

应用流式细胞仪检测结果为：骨髓受累者55例，其中非霍奇金淋巴瘤45例，霍奇金淋巴瘤10例；应用穿刺活检检测结果为：骨髓受累者28例，其中有6例在流式细胞仪检测中未检测出；两组结果具有统计学差异（χ2=6.45，P < 0.05），见表1。流式细胞仪检测得到的恶性淋巴瘤骨髓受累方法中，a型11例，b型0例，c型28例，d型16例。

3 讨论

在淋巴结和结外淋巴组织产生的细胞肿瘤就叫做淋巴瘤。按照现行统一的分类[4]，恶性淋巴瘤可分为非霍奇金淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤两大类。恶性淋巴瘤常见的表现主要为淋巴受累。骨髓检查的目的就是了解骨髓造血功能和骨髓受累的情况，确定恶性淋巴瘤的分型，从而为选择药物和选择治疗手段提供依据。

有研究报道，2%～74%的淋巴瘤有骨髓受累现象[5]，非霍奇金淋巴瘤的骨髓受累为16%～75%，霍奇金淋巴瘤的骨髓受累为2%～32%。用骨髓活检的方法发现骨髓受累率为21%。而应用针吸骨髓涂片法发现骨髓受累率约为15%～33%。国内的骨髓受累检出率远远低于国外，主要原因为我国在这方面的技术不过关，仪器精度较低。随着科技的发展，应用流式细胞术已经问世，应用流式细胞仪检测骨髓受累无疑能提高检出率。

恶性肿瘤的主要治疗方法就是保肢治疗，它要求穿刺活检有更严格的方法。如果穿刺活检不正确，容易造成肿瘤对局部血管和神经的污染，导致穿刺活检失败。所以在进行穿刺活检时，要对肿瘤有充分的了解。在穿刺活检中，需要免疫标记，免疫标记时，有许多抗体可供选用，但一定要根据抗体的种类，选择合适的抗原修复方法，如消化法和微波法等。

流式细胞术能对细胞进行自动分选和分析。将细胞溶液放入流式细胞仪，就可以测量细胞的各种性质，如生物物理性质和生物化学性质，也可以根据细胞的性质，将细胞从特定的范围内分选出来。

本文通过流式细胞仪对62例恶性淋巴瘤患者进行检验，发现骨髓受累患者55例，通过穿刺活检对62例恶性淋巴瘤患者检测发现骨髓受累患者28例，其中6例未在流式细胞仪中检测出。通过统计学分析，两种方法检测出的骨髓受累患者有统计学差异（P < 0.05），说明用流式细胞仪检测的方法优于穿刺活检的方法。但是有6例患者在穿刺活检中呈阳性，但在流式细胞仪检测中呈阴性，这表明流式细胞仪还未达到100%的检测准确度。穿刺活检这种方法样本量小，准确度小，但方便可行，而流式细胞仪检测操作复杂，准确性高，只有两种方法结合，才能更精确地检测恶性淋巴瘤骨髓受累。

临床分期与患者的治疗方法有密切的关系。如果恶性淋巴瘤患者有骨髓受累，那么患者的临床分期就为Ⅳ期，应该引起重视。本文用流式细胞仪检测比用穿刺活检法检测出更多的骨髓受累患者，这说明流式细胞仪检测技术精确度更高，值得临床上应用。目前用得较多的方法就是穿刺活检法，而流式细胞仪检测法还未得到更普遍的应用。

通过本文的研究，发现应用流式细胞仪检测比应用穿刺活检法有更高的准确度，但也有假阴性的现象，所以应该将穿刺活检联合流式细胞仪进行检测，这样能提高准确度。

[参考文献]

[1] 子华，杜湘桂，王桃仙，等. 骨髓检查对恶性淋巴瘤分期的重要性[J]. 中国肿瘤临床，1984，11（1）：17-19.

[2] 殷杰，顾健. 流式细胞术对恶性淋巴瘤细胞膜表面标记及倍体分析[J]. 国外医学：输血及血液学分册，2003，26（5）：421-422.

[3] 珊珊. 流式细胞术-白血病免疫分型规范化[J]. 中国实验血液学杂志，2002，10（1）：1-5.

[4] 叔逵，王健民，王杰军. 中国临床肿瘤学教育专辑[M]. 北京：中国医药科技出版社，2001：204-211.

[5] 郭会芹，孙耘，田援. 乳腺粗针穿刺活检的临床病理应用[J]. 中华病理学杂志，2004，33（3）：277-279.

（收稿日期：2013-03-18）