HPLC法测定蜜炼甘草良咽含片中总皂苷的含量

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【摘要】 目的 建立hplc法测定蜜炼甘草良咽含片中总皂苷的含量。方法 采用HPLC法。以AgilentZORBAXSB-C18（250mm×4.6mm，5μm）为色谱柱；流动相：0.02%磷酸溶液：乙腈（80：20）；流速：1.0ml/min；检测波长：205nm。结果 总皂苷（以人参皂苷Re计）在800-6400ug之间呈良好，线性关系回归方程：Y=82476.250X-318.56，r=0.9993（n=5）；平均回收率为97.1%，RSD=1.15%（n=6）。结论 本法分离度好，专属性强，准确度高，可用于测定蜜炼甘草良咽含片中总皂苷的含量。

【关键词】 HPLC法；蜜炼甘草良咽含片；总皂苷；含量

蜜炼甘草良咽含片是以乌梅、罗汉果、青果、金银花等为主要原料制成的保健食品，而罗汉果中的总皂苷具有清咽润喉的功效，目前《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）紫外分光光度法测定中总皂苷的含量，试剂气味刺激，操作复杂，结果不够准确。本文采用HPLC法测定蜜炼甘草良咽含片中总皂苷的含量，操作简单，准确。

1 仪器与试药

岛津LC-20AT型高效液相色谱仪，岛津SPD-20A紫外检测器，岛津SIL-20A自动进样器，CTO-10AS色谱工作站。METTLER AE 240电子天平，JAC-300超声波清洗机。

蜜炼甘草良咽含片（批号2011 09 06，2011 12 02，2012 01 04）人参皂苷Re对照品（中国药品生物制品检定所），乙腈为色谱纯，其他为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：AgilentZORBAXSB-C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.02%磷酸溶液：乙腈（80：20）；流速：1.0ml/min；检测波长：205nm；进样量：20ul；柱温：30℃。理论板数按人参皂苷Re计算不低于2000。

2.2 溶液的制备 精密称取人参皂苷Re对照品400.03mg，置10ml的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成40mg/ml对照品贮备液。精密称取供试品（相当于人参皂苷Re0.2g），置25ml的量瓶中，加水适量，超声30分钟，加水稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液5ml，用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇溶解并移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察 线性关系的考察：精密量取人参皂苷Re（40mg/ml）对照品贮备液0.2，0.4，0.8，1.2，1.6.ml，分别置10ml的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件，分别进样20ul，以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），得回归方程：Y=82476.250X-318.56，r=0.9993（n=5）。结果表明，在800-6400μg范围内，人参皂苷Re峰面积值与进样量有良好的线性关系。

精密度实验：精密量取对照品贮备溶液1ml，置10ml的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，重复进样5次，测定其峰面积，结果RSD分别为0.59%，表明仪器精密度良好。

稳定性实验：取供试品溶液（批号2012 01 04）别于0，2，4，6及8h，分别进样20 μl，测得供试品中人参皂苷Re峰面积值并计算。结果RSD为1.62%（n=5），实验表明，供试品溶液在8h内稳定。

重复性实验：取同一批供试品溶液5份，依法测定峰面积。结果RSD为0.85%，表明本方法重复性良好。

空白干扰试验：按溶液制备方法制备不含罗汉果的阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，结果在阴性对照溶液中，与人参皂苷Re保留时间处无色谱峰出现。

加样回收率实验：精密量取6份已知含量的供试品（批号2012 01 04）2ml，分别加入人参皂苷Re（4mg/ml）对照品溶液0.5ml，1.0ml，1.5ml各2份，按上述供试品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，回收率平均值为97.1%，RSD为1.15%（n=6）。结果加样回收良好。

供试品含量测定：取3批供试品，按供试品溶液制备方法制备供试液，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液20ul，记录色谱峰峰面积，以外标法计算，测定人参皂苷Re的含量。结果批号2011 09 06，2011 12 02，2012 01 043批供试品人参皂苷Re含量分别为3.95，4.32，3.80mg/g。

3 讨 论

用HPLC法测定蜜炼甘草良咽含片中总皂苷的含量，同紫外分光光度法比较，快速，准确，重现性好。

本法在样品提取方法中曾试用过正丁醇，75%乙醇，以及通过Amberlite-XAD-2大孔树脂等几种方法，实验结果表明用正丁醇提取的样品回收率高。

提取次数考察：按照溶液制备的测定方法，分别用水饱和正丁醇提取1，2，3，4，5次，依次测定。结果表明提取3次以后，人参皂苷Re总皂苷基本提尽。

参考文献

[1] 伍毅.高效液相色谱测定复方田七滴丸中人参皂苷Re1含量[J].中国药房，2005，16（22）：1737.

[2] 罗云，金城，李果，等.高效液相色谱法同时测定姜参胶囊中人参皂苷Rg1及Re的含量[J].中国药房，2007，6（18）：451.