羌活提取物抗哮喘作用研究

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【摘要】目的探讨羌活提取物（extract from notopterygium，EN）对哮喘小鼠Thl/Th2细胞平衡的影响。方法40只雄性清洁级BABL/c小鼠，随机分为4组，每组10只，分别为生理盐水对照组；卵蛋白（Ovalbumin，OVA）哮喘组；羌活低剂量组；羌活高剂量组。在末次激发24h后分别用酶联免疫吸附法（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ含量。结果哮喘模型组小鼠与对照组小鼠相比较BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平增高，而IFN-γ的表达明显降低（P

【关键词】哮喘；羌活；p38丝裂原活化蛋白激酶

doi：103969/jissn1004-7484（x）201309624文章编号：1004-7484（2013）-09-5373-01

过敏性哮喘是由嗜酸性粒细胞、肥大细胞等多种炎症细胞参与的以气道高反应性和慢性气道炎症为特征的免疫变态反应性疾病。糖皮质激素是目前治疗哮喘的最有效药物，长期反复使用可引起耐药性和严重的副反应。因此，有必要研究哮喘的发病机理，寻求治疗哮喘的新靶点。羌活在中医认为是一种解表药和祛风湿药。现代医学研究认为羌活具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗血栓形成、改善血循环，抗心律失常、镇痛等药理作用[1-3]。但在哮喘中羌活的作用及作用机制尚不清楚。在本研究中，我们利用小鼠哮喘观察羌活提取物（extract from notopterygium，EN）抗哮喘作用，并对其作用机制进行初步探讨。

1资料与方法

11材料药品与试剂：羌活水提物由延边大学药学院提供；卵清蛋白，氢氧化铝粉和细胞因子IL-4、IL-5、IL-13和IFN-检测试剂盒均购自美国Sigma公司。欧姆龙U219雾化器；美国伯乐PC1000电泳仪。

12方法

121动物及分组雄性BALB/c小鼠40只，体重（20±3）g，由延边大学实验动物中心提供。按随机数字表法分为4组，即正常对照组，哮喘模型组，羌活低剂量组，羌活高剂量组，每组10只。

122动物模型的建立模型制备参照李良昌等[4]报道的方法：哮喘组，羌活低高剂量组均用OVA50μg和AL（OH）3干粉1mg第1天及第14天腹腔注射共2次，对照组用生理盐水代替。自第21天开始激发，哮喘组和羌活低和高剂量组用1%OVA生理盐水溶液雾化吸入，每日1次，持续5天。对照组只用生理盐水雾化吸入。羌活低和高剂量分别在激发后1天开始按照200mg/kg和400mg/kg每天1次灌胃治疗，共4天。末次激发24h后处死小鼠，获取支气管肺泡灌洗液（BALF）。取50μLBALF用细胞计数板进行细胞计数。剩余BALF离心取上清，测细胞因子。沉淀进行涂片，Diff-quik染色后进行细胞分类计数。

123BALF中细胞因子IL-4，IL-5，IL-13和IFN-γ含量的检测采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定，按试剂盒说明书进行操作，结果单位为ng/L。

13统计学处理数值用（χ±s）表示，用SPSS133统计软件，各组计量数据采用单因素方差分析（ANOVA），组间两两比较采用LSD法。P

2结果

21BALF中炎症细胞的变化哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞计数明显升高，与正常对照组比较有统计学意义（P

22BALF中细胞因子IL-4、IL-5、L-13和IFN-γ的变化哮喘模型组小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平升高，而IFN-γ水平降低，与正常组比较有统计学意义（P

3讨论

支气管哮喘是嗜酸性粒细胞浸润为主的气道和肺部炎症性疾病，现在研究认为Th1和Th2细胞失平衡在这一过程中发挥重要的作用[5]。Th1代表细胞因子有IFN-，Th2代表的细胞因子有IL-4、IL-5和IL-13，本实验研究发现，哮喘小鼠BALF中IL-4、IL-5和IL-13的浓度明显升高，而BALF和肺组织中IFN-的水平明显下降，暗示哮喘小鼠体内存在Th1和Th2细胞失平衡，BALF中细胞总数，嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数都明显升高。羌活提取物能明显的降低BALF中Th2代表细胞因子水平，提高Th1代表细胞因子的水平，降低BALF中细胞总数，嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数，并能明显抑制哮喘小鼠肺部炎症，暗示羌活提取物有明显的抗哮喘作用，其作用可能是通过影响Th1和Th2细胞失平衡，这可能是其抗哮喘作用机制之一。

参考文献

[1]Sun Y，Xu QAqueous extract from rhizoma notopterygii reduces contact sensitivity by inhibiting lymphocyte migration via down-regulating metalloproteinase activity[J]Pharmacol Res，2002，46（4）：333-337

[2]张贤，黄波禹羌活汤治疗痛风性关节炎疗效观察[J]中国中医药骨伤科杂志，2000，10（3）：34-35

[3]唐迎雪谈羌活对心脑血管疾病的治疗作用[J]中国中药杂志，2001，26（5）：346-348

[4]李良昌，秦向征，李光昭，等黑米花色苷提取物在小鼠哮喘模型中队p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响[J]解剖学报，2012，43（1）：51-54

[5]Larche M，Robinson DS，Kay ABThe role of T lymphocytes in the pathogenesis of asthma[J]J Allergy Clin Immunol，2003，111（3）：450-463