微柱凝胶法对献血者Rh(D)亚型的确认与抗体筛选

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关键词 亚型 抗体筛选 微柱凝胶

为了保证临床输血工作的安全，保证Rh(D)阴性血患者及时用血，我站自2000年9月以来，对来我站无偿献血者进行常规Rh(D)抗原的鉴定，对Rh(D)阴性献血者进一步做Rh(D)阴性确认试验、抗体筛选及抗体鉴定，建立了Rh(D)阴性无偿献血者档案，保证了临床及时用血。

资料与方法

检测对象：2000年9月至今在我站进行无偿献血者共198 600人次，首先经检验科进行常规Rh(D)定型，其中男性101 200人次，女性97 400人次，年龄18～55周岁。

试剂：3种不同批号的抗-D血清，抗人球蛋白试剂，分别由Dominion Biologicals Limited提供；微柱凝胶卡及专用孵育器、离心机由长春博讯公司提供；谱系胞由上海血液中心提供。

方法：Rh(D)抗原初筛采用96孔微板法，对初筛阴性者，分别采用微柱凝胶抗人球卡Ⅱ和传统的抗人球法做Rh(D)阴性确认试验、抗体筛选及抗体鉴定。在198 600人次无偿献血者中，初筛Rh(D)阴性430例，弱D3例，D抗原阴性率为0.24%，抗体筛选阳性7例。

微柱凝胶法：向标记好D1、D2、D3的微柱凝胶孔中加入50μl 2%献血者红细胞,再加50μl不同批号的抗D血清;向标记好O1、O2、O3的微柱凝胶孔中加入50μl2%筛检红细胞，再分别加献血者血清50μl。置37℃专用孵育器孵育15分钟，取出置专用水平离心机离心5分钟，观察结果，红细胞全部沉于微柱凝胶底部者为阴性，聚于微柱凝胶上面或者其中者为阳性（将阳性者再用间接抗人球蛋白试验复试）。

间接抗人球蛋白试验（试管法）：取8支标识好1、2、3、4、5、6阳性对照、阴性对照的试管，1、2、3管加5%献血者红细胞50μl和3种不同批号抗-D血清50μl，4、5、6管加5%筛检红细胞R1、R2、r各50μl，献血者血清各50μl，阳性对照管加5% rh(D)阳性细胞50μl和IgG+IgM抗-D血清50μl，阴性对照管加5% Rh(D)阳性细胞50μl和AB型血清50μl。各管均置37℃孵育1小时，然后用生理盐水洗涤3次，再加抗人球蛋白试剂2滴，1000转/分离心1分钟。观察结果：当阳性对照管和被检管出现凝集，而阴性对照管不凝集，为弱D/血清中存在不规则抗体。

结 果

用微柱凝胶法对430例Rh(D)阴性者进行Rh(D)确认试验，其中发现弱D3例，不规则抗体筛选阳性7例，其中1例假阳性并经间接抗人球蛋白实验确证。1例为抗c+E,1例为抗c,4例为抗D。

讨 论

利用微柱凝胶间接抗人球卡进行献血者弱D的确认及抗体筛检工作，标本用量少，简便、快捷，省去了繁杂的细胞洗涤过程，且灵敏度高［１］。需要注意的是，血清标本中的纤维蛋白原必须完全析出，否则，标本中的纤维蛋白原在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞的沉淀，易造成假阳性反应。试验中的标准红细胞浓度过高或过低，都可能导致假阳性或假阴性结果。经反复对比试验笔者认为2%是最佳红细胞浓度，这与文献报道相符［2］。对于微柱凝胶在临床输血中的其他应用还有待进一步探讨。

参考文献

1 彭道波，兰炯采，王梁平.用微柱凝胶试验进行交叉配血.中国输血杂志，2001，14（4）：232

2 杨崇礼，兰炯采，胡利亚.婴儿ABO血型定型的研究.中国儿科杂志，1995，33（4）：221