盐酸金刚乙胺颗粒微生物限度检查法验证研究
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【中图分类号】R473 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2012)07－0301－01
【摘要】：建立盐酸金刚乙胺颗粒的微生物限度检验方法。采用常规法对样品进行方法验证。结果五种规定试验菌的回收率均不低于70%，可用于盐酸金刚乙胺颗粒的微生物限度检验。
【关键词】：盐酸金刚乙胺颗粒；微生物限度检查；方法验证
Research of microbial limit test of yan suan jin gang yi an granules
Zhou Feng Jiao(GuangXi HeLi Pharmaceutical Co.，Ltd. Guan Xi Nan Nin 530219)
【Abstract】：The method of microbial limit test for yan suan jin gang yi an granules was established and compared the results with the conventional method. Results: the recovery rate of the five kinds of test bacterium was not less than 70%. The method can be used in the microbial limit test of yan suan jin gang yi an granules.
【Key words】： yan suan jin gang yi an granules, microbial limit test, verification
盐酸金刚乙胺颗粒适用于预防和治疗A型(包括H1N1、H2N2、H3N2)流感病毒感染。所含成分为：α-甲基-1-金刚烷甲基胺盐酸盐。根据其制剂用药途径，应进行细菌数、霉菌和酵母菌数的测定、及控制菌——大肠埃希菌检查。经实验研究，确定采用常规法进行细菌数、霉菌和酵母菌数、大肠埃希菌检查。经对所确定的方法进行验证，符合2010年版《中国药典》二部附录ⅪJ有关微生物限度检查法有关规定，方法可行。
1 实验仪器、试药
1.1 实验菌种
枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、大肠埃希菌CMCC（B）44102、白色念珠菌CMCC(F)98001、黑曲霉CMCC(F)98003。
1.2 样品
盐酸金刚乙胺颗粒：批号： 20101101，20101102，20101103，生产厂家：广西禾力药业有限公司。
1.3 培养基及稀释剂
营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，营养肉汤培养基，胆盐乳糖培养基（BL）,改良马丁培养基，MUG培养基，曙红亚甲蓝琼脂培养基， pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液，0.9%无菌氯化钠溶液等。
1.4 仪器
生化培养箱（LRH-250A型），精密培养箱（PW-30型），手提式高压蒸汽灭菌器（YX-280B型）等。
2 细菌数、霉菌和酵母菌数测定方法的建立及验证
2.1 菌液制备
取经35℃培养18～24h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，备用；取经25℃培养24～48h的白色念珠菌液体培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液,备用；取经25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加10 ml 0.9%无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子，吸取菌液用0.9%无菌氯化钠溶液制备成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，备用。
2.2 供试液的制备方法
常规法：取样品10g，用pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液制成1：10的供试液；取1：10的供试液1ml注皿。
2.3 回收率试验
试验组：同2.2，另分别取各试验菌50～100CFU，分别注入同一平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度，细菌培养24～48h，白色念珠菌和黑曲霉培养48～72h。
菌液组：取试验菌50～100CFU注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度，细菌培养24～48h，白色念珠菌和黑曲霉培养48～72h，测定所加入的试验菌数，平行制备2个平皿。
供试品对照组：同2.2，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度，细菌培养24～48h，霉菌和酵母菌培养48～72h，测定供试品本底菌数。
回收率 = 试验组平均菌落数 － 供试品对照组平均菌落数 菌液组的平均菌落数×100%
2.4 方法的确定
选用金黄色葡萄球菌、白色念珠菌作为敏感菌株进行预试验，结果见表1。