瘀血痹胶囊质量标准研究

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[摘要] 目的：建立瘀血痹胶囊质量标准。方法：采用薄层色谱法对瘀血痹胶囊中威灵仙、当归、黄芪进行薄层定性鉴别；采用高效液相色谱法对其中的丹酚酸B进行了含量测定。结果：在薄层色谱中可检出威灵仙、当归、黄芪的特征斑点。丹酚酸B在0.218 8~2.188 0 μg线性关系良好（r=0.999 9），方法的平均回收率为100.49% (RSD=1.80%)。结论：本法操作简便、准确、重现性好，能够较好地控制瘀血痹胶囊的质量。

[关键词] 瘀血痹胶囊；薄层色谱法；高效液相色谱法；丹酚酸B

[中图分类号]R286 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）06（c）-013-03

Quality standard for Yuxuebi Capsules

JIN Feng-huan

(Liaoning Herbapex Group Benxi Pharmaceutical Co. LTD.， Benxi 117000， China)

[Abstract] Objective: To establish the quality standard of Yuxuebi Capsules. Methods: TLC identifications of Radix Et Rhizoma Clematidis，Radix Angelicae Sinensis and Radix Astragali in Yuxuebi Capsules were carried out.The contents of salvianolic acid B were determined by means of HPLC.Results: The linear range of salvianolic acid B was 0.218 8~2.188 0 μg(r=0.999 9); the average recovery was 100.49% (RSD=1.80%). Conclusion: The methods reported in this paper are easy to operate and can provide accurate and reproducible results， thus are able to control the quality of Yuxuebi Capsules.

[Key words] Yuxuebi Capsules;TLC; HPLC; Salvianolic acid B

瘀血痹胶囊是由黄芪、威灵仙、红花、丹参、当归、川牛膝等10多种中药材组成，瘀血痹胶囊具有活血化瘀、通络定痛的功效，对表现为瘀血痹阻证候疾病有一定的治疗作用，无明显不良反应，是一种治疗风湿病的安全有效的药物。为更好地控制本品质量，按照《国家药品标准提高行动计划中成药品种增修订项目任务表》中瘀血痹颗粒所列增修订内容，对本品质量标准进行修订；对原部颁标准中威灵仙薄层鉴别项，按2005年版《中国药典》威灵仙药材的薄层鉴别方法进行了修改，使方法更加简单、斑点更清晰。增加了当归、黄芪的薄层鉴别和丹参中丹酚酸B的含量测定项。

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪（包括G1379A在线脱气机、G1313A 自动进样器、G1311A四元梯度泵、G1316A柱温箱、G1314A 紫外检测器）；UV-2401型紫外分光光度计；恒温水浴锅；PW型超纯水制备器；KQ5200型超声波清洗器（昆山超声波设备厂）。

威灵仙对照药材（中国药品生物制品检定所提供，批号为1189-200101）；当归对照药材（中国药品生物制品检定所提供，批号为120927-200512）；黄芪甲苷（中国药品生物制品检定所提供，批号为0781-200311）；丹酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号为111562-200302，供含量测定用）。甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1薄层色谱鉴别

2.1.1 威灵仙的鉴别取本品内容物10 g，加乙醇50 ml，回流提取2 h，滤过，取滤液浓缩至约20 ml，加盐酸3 ml，加热回流1 h，加水10 ml，放冷，加石油醚（60~90℃）25 ml，振摇提取，蒸干石油醚，残渣加无水乙醇10 ml溶解，作为供试品溶液。另取威灵仙对照药材2.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验（《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ B），吸取上述两种溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶3∶0.2）为展开剂，薄层板置展开缸中预饱和30 min，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.1.2 当归的鉴别取本品内容物20 g，加水30 ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20 ml，合并乙醚液并蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材1 g，加水煎煮1 h，滤过，滤液浓缩至30 ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.1.3 黄芪的鉴别取本品内容物20 g，研细，加甲醇40 ml，回流提取1 h，放冷，滤过，滤液蒸干。残渣加水20 ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次（20、20 ml），合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次（20、20 ml），再用正丁醇饱和的水洗涤2次（20、20 ml）；正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液20 μl，对照品溶液2~5 μl，分别点于同一以0.2%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）于10℃以下放置的下层溶液为展开剂，预饱和15 min，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5 min。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点，紫外光灯（365 nm）下显相同的橙黄色斑点。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件、系统适用性试验

2.2.1.1检测波长的选择参考丹参药材（《中国药典》2005年版一部）中丹酚酸B的含量测定项，选用286 nm为检测波长。取丹酚酸B对照品的75%甲醇溶液，在200~400 nm波长范围内进行扫描，结果丹酚酸B在286 nm处有最大吸收，故选用286 nm作为本实验的检测波长。

2.2.1.2 流动相的选择参考文献资料，甲醇-乙腈-75%甲酸溶液(27∶10∶63)比较适合本产品，它分离的丹酚酸B峰形良好，分离度较高，且阴性对照无干扰，所以确定其流动相为甲醇-乙腈-75%甲酸溶液(27∶10∶63)。流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl；柱温：27℃。

2.2.1.3系统适用性试验在色谱柱最低理论塔板数试验中，我们采用不同色谱柱加以试验，流动相为甲醇-乙腈-75%甲酸溶液(27∶10∶63)，在各自条件下，供试品溶液中丹酚酸B与其他组分分离度良好，其保留时间（tR）、理论塔板数（n）、分离度（R）见表1。

根据测定结果，暂定本试验中理论塔板数按丹酚酸B峰计算不得低于4 500。

2.2.2 溶液的制备

2.2.2.1对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B对照品10.94 mg，置100 ml量瓶中，用75%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 ml含丹酚酸B 109.4 μg的对照品溶液。

2.2.2.2 供试品溶液的制备 取本品（批号：20060501）适量，研细，取约0.3 g，精密称定，置于具塞锥形瓶内，精密加入75%甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流提取1 h，取出，放冷，称重，用75%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 线性范围的考察分别精密吸取丹酚酸B对照品溶液2、5、10、15、20 μl注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积，以进样量为横坐标，以峰面积值为纵坐标作图，作回归曲线。回归方程为：Y=859.46X +2.663 4，r=0.999 9，结果表明，丹酚酸B进样量在0.218 8~2.188 0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.4 阴性干扰试验按工艺方法制备缺丹参的阴性样品，并按“2.2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，绘制色谱图（图1~3）。从图1~3可见，在与对照品色谱峰相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，而阴性液在此峰处无干扰。

2.2.5精密度试验取“2.2.2.2”项下供试品溶液，重复进样6次，每次10 μl，记录丹酚酸B色谱峰面积。试验结果表明，丹酚酸B峰面积积分值的RSD

2.2.6 重复性试验取批号为20060501的瘀血痹胶囊内容物适量，分成6份，分别按“2.2.2.2”项下的方法操作，制备供试品溶液，测定丹酚酸B的含量。试验结果表明，该方法对于本品中丹酚酸B含量测定的重复性较好，RSD

2.2.7 稳定性试验精密吸取“2.2.2.2”项下供试品溶液各10 μl，每隔一定时间分别注入液相色谱仪，依法测定，以丹酚酸B峰面积积分值为指标，测定其稳定性。试验结果表明，丹酚酸B峰面积积分值的RSD

2.2.8 回收率试验取已知丹酚酸B准确含量（14.727 2 mg/g）的本品(批号:20060501)6份，分别研细，各取粉末适量，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，各精密加入109.4 μg/ml的丹酚酸B对照品溶液20 ml，挥干溶剂，按“2.2.2.2”项下方法制备供试品溶液，各精密吸取10 μl，分别注入液相色谱仪，测定结果见表2。

结果表明，本试验RSD＜2%，回收率良好。

2.2.9 丹酚酸B的含量测定按“2.2.2.2”项下方法操作，制备供试品溶液，测定3批瘀血痹胶囊中丹酚酸B的含量，测定结果见表3。

3 讨论

丹参为瘀血痹胶囊的主药，故以丹参中丹酚酸B作为瘀血痹胶囊质量控制的定量指标。本方法简便、灵敏、准确、重复性好，可用于本品的质量控制。

对原部颁标准中威灵仙薄层鉴别项，按2005年版《中国药典》威灵仙药材的薄层鉴别方法进行了修改，使方法更加简单、斑点更清晰。

[参考文献]

[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：化学工业出版社，2005.52-53,89,175,212.

（收稿日期：2008-04-10）

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