295例宫颈病变患者HPV亚型多重感染与宫颈病变的关系

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[摘要] 目的 探讨人瘤病毒（HPV）不同亚型多重感染与宫颈病变的关系。 方法 采用基因芯片技术对手术切除宫颈石蜡组织及液基细胞技术所获宫颈脱落细胞进行基因分型检查，同时检测其宫颈病变程度。 结果 295例宫颈病变样本总的HPV阳性率为58.98%（174/295）。仅感染高危HPV或高、低混合型HPV组的宫颈病变程度构成比与仅感染低危型HPV组的对应构成比差异有统计学意义（x2=16.801，P0.05）；单一高、低危亚型之间有统计学差异（x2=16.369，P

[关键词] 人瘤病毒；基因芯片技术；宫颈癌

[中图分类号] R711.74 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2013）18-07-03

宫颈癌的发生率和致死率在女性恶性肿瘤中位居第2位。目前认为持续的高危型人瘤病毒（human papillomaviurs，HPV）感染是导致高度宫颈上皮内瘤变，以及进一步发展为宫颈癌的重要因素[1-2]。临床基因分型检测中，HPV的感染常常会出现单纯高危型单一或多重感染，单纯低危型单一或多重感染，以及高、低危混合型多重感染等多种类型。迄今，HPV病毒的多重感染与宫颈病变的发展进程，以及宫颈癌的发生是否存在相关性还存在争论[3-8]。本研究通过基因芯片技术，对295例不同宫颈病变样本进行HPV基因分型检测，探讨HPV病毒不同亚型多重感染与宫颈病变程度的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象

2011年5月～2013年3月，年龄20～70周岁，在四川省泸州医学院附属医院、富顺县人民医院、富顺县妇幼保健院就诊及手术切除的295例富顺地区宫颈病变患者（宫颈脱落细胞样本155例，石蜡样本140例）为研究对象。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集及hpv感染类型分组 TCT技术如姚军等[5，9]所述。石蜡样本取自泸州医学院附属医院病理科及富顺县人民医院病理科库。样本分为7组，A组：仅感染高危型HPV（包括单一亚型和多重亚型混合感染）；B组：仅感染低危型HPV（包括单一亚型和多重亚型混合感染）；C组：高、低危混合感染。将多重HPV感染样本分为D组（仅感染多种高危亚型）和E组（仅感染多种低危亚型）；将单一HPV感染样本分为F组（仅感染一种高危亚型）和G组（仅感染一种低危亚型）。

1.2.2 GPMT W2600基因芯片分型检测系统 该系统可以同时检测16种高危型及8种低危型HPV亚型，由北京金菩嘉有限责任公司提供。

1.2.3 DNA提取及PCR扩增 DNA提取按常规方法，如代红莹等[4-6]所述。PCR扩增条件为：50℃ 2min ，94℃ 4min；扩增28个循环： 94℃ 30s48℃ 45s72℃ 20s；加25个循环：94℃ 30s65℃ 45s72℃ 20s。

1.2.4 变性杂交 向每管样本扩增产物中加入已扩增好的阳性对照20μL；再加入60μL杂交缓冲液，震荡混匀后瞬时离心；95℃变性5min。

1.2.5 基因分型分析 按照基因分析仪器（GPMT W2600）操作步骤及其芯片阅读仪控制软件2.0对样本进行检测和分析。

1.2.6 结果判读 结果有效：阳性对照流池的信号值≥40m。且阴性对照流池信号值

1.3 统计学方法

采用Microsoft Excel 2003和SPSS13.0软件进行数据处理和统计分析，P

2 结果

2.1 单纯高、低危HPV亚型感染，以及高、低危HPV混合感染间的关系

295例宫颈病变患者中174例感染了HPV病毒，感染率为58.98%（174/295）。仅感染高危HPV（A组）或高、低混合型HPV组（B组）的宫颈病变程度构成比与仅感染低危型HPV（ C组）的对应构成比存在显著性差异（x2=16.801，P

2.2 HPV多重感染与宫颈病变类型的关系

仅高危多重感染（D组）或仅低危多重（E组）HPV组分别与仅高危单一（F组）、仅低危单一（G组）HPV组之间，其宫颈病变程度的构成比无统计学意义（x2=7.325，P>0.05； x2=4.362，P>0.05）；单一高（F组）、低危（G组）亚型之间有统计学差异（x2=16.369，P

3 讨论

人瘤病毒是一种双链闭环无包膜的小分子DNA肿瘤病毒，具有多种亚型。根据致病力或致癌危险性的大小，HPV可分为高危型和低危型两大类。在宫颈病变中，不同亚型引起宫颈病变的类型和程度有所不同。高危型HPV的持续感染被认为是宫颈癌发生的主要危险因素[2-3]。

本研究的结果表明，首先，在宫颈病变与感染高、低危HPV类型的关系方面，仅感染高危HPV组或高、低危混合型HPV组的宫颈病变程度构成比与仅感染低危型HPV组的对应构成比存在显著性差异。另外，感染单一高危组与单一低危组之间的宫颈病变程度构成比也有统计学意义，这些都说明宫颈病变程度与感染HPV高、低危型别有关，这与相关文献[3，10]报道的一致；而仅感染高危HPV组与混合感染组间无统计学意义，说明宫颈病变程度与高危HPV是否合并感染低危型无关，这与李燕坤等[6]报道的一致。

其次，在多重感染HPV类型与宫颈病变程度的关系方面，仅高危多重感染组或仅低危多重感染组分别与仅高危单一组、仅低危单一组之间，其宫颈病变程度的构成比没有统计学意义，说明多重高危型HPV感染并没有增加宫颈癌的患病风险，多重低危型HPV感染也并未增加尖锐湿疣的患病风险，这与刘洋等[3，6，10]报道的一致，与代红莹等[4-5，11-12]报道的不相符，这可能与各自所选不同的样本人群及样本量的多少有关，因此，要明确多重感染在宫颈癌发生发展中的确切作用还需要大样本的前瞻性研究来证实。如果证实多重感染能够影响宫颈病变的发展进程，将有助于宫颈癌防治计划的改善，为治疗方案的选择提供更多参考，也会对目前HPV疫苗的研制和应用提出新的挑战。

综上所述，本研究中HPV多重感染并未促进宫颈病变的发展，提示宫颈癌发生与HPV的复合感染间的关系可能性不大，而与感染的HPV基因型别相关。高危型感染增加患宫颈癌风险，低危型感染则更易患尖锐湿疣等良性性传播疾病。

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（收稿日期：2013-07-12）